(天津农学院水产学院，天津市水产生态与养殖重点实验室，天津300384)
摘要:为研究在饲料中添加不同藻粉对非洲王子鱼Labidochromiscaeruleus生长、体色和部分免疫指标的影响，选用体质量为(8.76±0.51)g的非洲王子鱼幼鱼360尾，随机分成4个组，每组设3个重复，每个重复放30尾鱼，分别投喂不添加藻粉(对照)、添加盐藻Dunaliellasalina粉、裂壶藻Schizochytriumlimacinum粉、小球藻Chlorellavulgaris粉(3种藻粉的添加量均为1%)的试验饲料，进行为期45d的摄食生长试验。结果表明：饲料中添加1%裂壶藻能有效提高非洲王子鱼的增重率、特定生长率及饲料效率(P<0.05)，而盐藻、小球藻对非洲王子鱼生长性能无显著性影响(P>0.05)；添加1%裂壶藻后，非洲王子鱼体表b*值和类胡萝卜素含量较对照组均显著升高(P<0.05)；添加3种藻粉均能显著降低血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活力(P<0.05)；添加裂壶藻能显著提高肠道中酸性磷酸酶(AKP)、碱性磷酸酶(ACP)活力(P<0.05)。研究表明，饲料中添加适量的裂壶藻可使非洲王子鱼生长、体色和免疫功能达到最佳效果。
关键词:非洲王子鱼；藻粉；生长；体色；生化指标
非洲王子鱼Labidochromiscaeruleus隶属于鲈形目、隆头鱼亚目、慈鲷科、镊丽鱼属，是淡黑镊丽鱼的别称。原产于非洲马拉维湖，其体呈柠檬黄色，背鳍近边缘处有黑色条纹，具有较高的观赏价值，且易于饲养，因而广受消费者喜爱[1]。
在其养殖过程中，由于养殖环境与原生态环境的差异及饲料等原因，常导致其体色暗淡，影响其观赏价值。因此，如何使其体色艳丽、提高其观赏价值，已成为研究的热点问题。
微藻是一类光合利用度较高的植物，可通过光合作用生产较多高附加值的产物，如多糖、色素等。藻多糖复合物具有免疫活性和抗氧化性，类胡萝卜素具有提高鱼体体色的作用[2]。裂壶藻Schizochytriumlimacinum是属于真菌门的一类海洋真菌，其细胞内含有大量有益的活性物质，其中二十二碳六烯酸(DHA)的含量非常高，达到35%～40%[3]。已有研究表明，裂壶藻能有效提高大黄鱼Larimichthyscrocea苗种的成活率[4]。盐藻Dunaliellasalina含有丰富的β-胡萝卜素，是迄今为止人类发现的β-胡萝卜素含量最高的天然生物[5]，因而，盐藻是一种优秀的鱼类增色剂。研究发现，在饲料中添加盐藻对卵形鲳鲹Trachinotusovatus具有显著的增色作用[6]。小球藻Chlorellavulgaris含有丰富的活性物质，它的光合效率高，含有丰富的蛋白质、维生素等，是一种十分重要的微藻资源[7]。在饲料中添加适当含量的小球藻可促进鱼类的生长发育，提高机体的免疫能力[8]，小球藻作为水产养殖饵料已被广泛应用[9]。
目前，有关微藻对非洲王子鱼生长、体色和生化指标的影响研究尚未见报道，为此，本试验中分别以裂壶藻、盐藻和小球藻为饲料添加剂，研究了其对非洲王子鱼生长、体色和部分生化指标的影响，旨在为非洲王子鱼饲料的配制提供参考。
试验用非洲王子鱼购于天津市精武镇观赏鱼养殖基地，选择3月龄非洲王子鱼，运送至天津农学院循环水实验室后先进行为期2周的暂养驯化。
1.2.1饲料的配制以中山统一有限公司提供的非洲王子鱼基础饲料(粗蛋白质为40.12%，粗脂肪为8.52%，粗灰分为9.36%，水分为7.42%)为底料，饲料底料经粉碎后分别添加裂壶藻、盐藻和小球藻，添加量均为1%，对照组不添加藻粉，在混匀机中充分混合后使用饲料制粒机(江苏牧羊集团牧MUZLMV4型)制成直径为2.00mm的沉性颗粒饲料，待其自然风干后于冰箱(-20℃)中保存备用。
1.2.2试验设计与饲养管理将非洲王子鱼驯化2周后，挑选体型健壮、体表无伤、规格一致的鱼(体长为6.61cm±0.13cm，体质量为8.76g±0.51g)随机分成4组，每组设3个重复，每个重复放30尾鱼。试验期间水温为(26.0±0.5)℃，pH为7.8±0.2，投饵量约为体质量的3%，每日9:00和16:00投喂，养殖周期为45d。
1.2.3生长指标的测定饲养试验结束后，将试验鱼禁食24h，用MS-222(40mg/L)麻醉后，从每个缸中随机取10尾鱼，用纱布拭去体表水分，测定试验鱼的体质量、体长、全长和体高。增重率(%)、饲料效率(%)、特定增长率(%/d)和肥满度的(%)计算公式分别为
增重率=100%×(Wt-W0)/W0,
饲料效率=100%×(Wt-W0)/F,
特定生长率=100%×(lnWt-lnW0)/t,
肥满度=100%×Wt/L3。
其中：W0为试验初始鱼体质量(g)；Wt为试验终末鱼体质量(g)；t为养殖周期(d)；L为试验末鱼体长(cm)；F为饲料摄入量干质量(g)。
1.2.4非洲王子鱼体表色度值的测定在试验进行的第15、30、45天时，从每缸随机取10尾鱼，用纱布拭去体表水分，用色彩色差仪(CR-400型)的探头紧贴试验鱼体侧线上部皮肤，对鱼体明度值(L*)、红度值(a*)、黄度值(b*)等色度指标进行检测。
1.2.5非洲王子鱼体内总类胡萝卜素含量的测定养殖进行到第15、30、45天时，从每缸随机取5尾试验鱼，用MS-222(40mg/L)麻醉后，分别取试验鱼体侧线上部皮肤(含鳞片)、整个胸鳍、背鳍、尾鳍和背部肌肉，剪碎。参考陈晓明等[10]的方法并略做修改：用电子分析天平准确称取0.1g组织，用丙酮定容至5mL，放入超声波清洗机低温超声波震荡45min后取出，4℃下以4000r/min离心10min，放入冰箱(4℃)中静置24h。
将所得的色素萃取液分别置于1cm比色皿中，以丙酮为空白对照管(比色皿加盖以防止丙酮挥发)，用ThermoSpectronicUVmini-1240型紫外分光光度计进行扫描，找出最大吸收峰处的波长(448nm)，在该波长下测定各组色素萃取液的吸光度值。
总类胡萝卜素含量(mg/kg)计算公式为
总类胡萝卜素含量
其中:A为吸光度值；K为常数(K=104)；V为提取液体积(mL)；E为摩尔消光系数(E=2500)；G为样品质量(g)。
1.2.6部分免疫指标的测定饲养试验结束后，将试验鱼禁食24h，用MS-222(40mg/L)麻醉后，从每个缸中随机取10尾鱼，从尾部采血，4℃下以4000r/min离心5min，后取上清液。采血后的试验鱼于冰盘上解剖取肝脏和肠道，将肝脏、肠道组织样品放在预冷的生理盐水中漂洗清除血液，用滤纸吸干体表水分后称重。按质量体积比为1∶9(g∶mL)在组织块中用移液管加入预冷匀浆介质(0.85%的氯化钠注射液)，于4℃下以4000r/min在匀浆器中进行匀浆，匀浆后15min，取上清液备用。
肝脏、血清中的丙谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活力，以及肠道、肝脏、血清中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活力的测定均采用南京建成生物研究所的试剂盒。
试验结果均用平均值±标准差(mean±S.D.)表示，采用SPSS22.0软件进行单因素方差分析(one-wayANOVA)，若差异达到显著水平，则采用Duncan氏法进行多重比较，显著性水平设为0.05。
从表1可见，各种试验鱼存活率均为100%，在饲料中添加裂壶藻能显著提高非洲王子鱼的增重率、特定生长率和饲料效率(P<0.05)，而添加盐藻、小球藻均对非洲王子鱼的生长指标均无显著性影响(P>0.05)。
2.2.1非洲王子鱼皮肤、鳍条、肌肉中的总类胡萝卜素含量的变化从表2可见:在试验进行到第15、30、45天时，裂壶藻组非洲王子鱼的皮肤中总类胡萝卜素含量均显著高于其他3组(P<0.05)，其余3组之间总类胡萝卜素含量均无显著性差异(P>0.05);在试验进行到第15、30天时，小球藻组非洲王子鱼鳍条中总类胡萝卜素含量最高，且显著高于对照组(P<0.05)，第45天时，各组间非洲王子鱼鳍条中的类胡萝卜素总含量均无显著性差异(P>0.05);在试验进行到第15、30天时，各试验组鱼肌肉中总类胡萝卜素含量与对照组相比均无显著性差异(P>0.05)，第45天时，盐藻组鱼肌肉中类胡萝卜素含量显著高于对照组(P<0.05)。
表1投喂添加盐藻、裂壶藻、小球藻的饲料对非洲王子鱼生长指标的影响
Tab.1EffectsofdietaryDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisongrowthperformanceofLabidochromiscaeruleus
组别group增重率/%weightgainrate特定生长率/(%·d-1)specificgrowthrate饲料效率/%feedefficiency肥满度/%conditionfactor存活率/%survival对照control40.64±7.80a0.76±0.12a25.86±4.21a3.28±0.35a100裂壶藻Schizochytriumlimaci-num54.03±3.68b0.96±0.05b33.26±2.57b3.50±0.46a100盐藻Dunaliellasalina44.23±1.16ab0.81±0.01ab27.71±0.51ab3.44±0.02a100小球藻Chlorellavulgaris51.11±5.34ab0.92±0.08ab32.37±3.53ab3.56±0.47a100
注：同列中标有不同小写字母者表示组间有显著性差异(P<0.05)，标有相同小写字母者表示组间无显著性差异(P>0.05)，下同
Note:Themeanswithdifferentletterswithinthesamecolumnaresignificantlydifferentamongthegroupsatthe0.05probabilitylevel,andthemeanswiththesameletterswithinthesamecolumnarenotsignificantdifferences,etsequentia
表2饲料中添加不同藻粉对非洲王子鱼皮肤、鳍条和肌肉中总类胡萝卜素含量的影响
Tab.2EffectsofdietaryDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisoncarotenoidcontentsinskin，finrays，andmuscleofLabidochromiscaeruleusmg/kg
组织tissue组别group15d30d45d对照98.84±17.20b115.24±4.67b133.14±6.51b皮肤裂壶藻148.30±23.49a163.54±12.47a177.01±34.54askin盐藻101.57±14.17b114.96±12.78b120.93±8.55b小球藻107.74±14.22b113.49±9.32b116.00±21.36b对照81.30±14.92b85.60±8.94b97.80±17.83a鳍条裂壶藻94.96±19.43ab86.99±11.49ab79.98±25.26afinrays盐藻95.42±24.01ab95.14±11.64ab99.04±19.45a小球藻119.47±7.34a107.09±9.89a100.46±11.10a对照4.31±2.28a3.12±0.82a1.57±0.25b肌肉裂壶藻4.23±1.01a3.67±1.18a4.04±0.77abmuscle盐藻3.72±1.69a4.07±0.47a7.37±1.39a小球藻2.43±1.87a2.00±0.36a4.32±1.03ab
2.2.2非洲王子鱼体表L*、a*、b*值的变化从表3可见：除了第45天时，裂壶藻组非洲王子鱼体表色度b*值显著高于对照组(P<0.05)外，其余在第15、30、45天时，各试验组试验鱼体表的L*、a*、b*值与对照组相比，均无显著性差异(P>0.05)。
2.3.1非洲王子鱼血清、肝脏GOT、GPT活力的变化从表4可见：添加不同藻粉后,试验鱼血清中的GOT、GPT活力均显著降低；肝脏中GOT活性显著升高(P<0.05)，而肝脏中GPT活力4组间无显著性差异(P>0.05)。
2.3.2非洲王子鱼各组织AKP、ACP活力的变化从表5可见：裂壶藻组肝脏中的AKP、ACP活力显著高于对照组(P<0.05)，盐藻组肝脏中的ACP活力也显著高于对照组(P<0.05)；而血清和肠道组织中的AKP和ACP活力与对照相比，均无显著性差异(P>0.05)。
表3饲料中添加不同藻粉对非洲王子鱼体表L*、a*、b*值的影响
Tab.3EffectsofdietaryDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisonL*,a*,andb*valuesinLabidochromiscaeruleus
指标index组别group15d30d45d对照39.73±1.71a34.90±6.11a30.32±1.07abL*裂壶藻39.37±7.29a35.74±1.95a34.55±2.37a盐藻38.09±2.47a34.39±7.58a29.69±2.83ab小球藻40.70±3.47a30.00±2.15a24.54±0.97b对照-2.98±0.20a-2.75±0.57a-2.68±0.29aba*裂壶藻-1.99±1.02a-2.11±0.28a-3.02±0.21b盐藻-2.65±0.49a-2.17±0.82a-2.29±0.69ab小球藻-2.81±0.12a-1.73±0.15a-1.91±0.44a对照18.43±2.66a15.29±3.02a11.99±0.55bb*裂壶藻18.51±3.81a17.36±1.89a16.17±0.74a盐藻17.01±1.96a15.82±3.83a13.95±3.13ab小球藻18.94±1.89a14.34±0.57a11.64±0.28b
表4饲料中添加不同藻粉对非洲王子鱼血清、肝脏GOT、GPT活力的影响
Tab.4EffectsofdietaryDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisonGOTandGPTactivitiesinserumandliverofLabidochromiscaeruleus
组别group血清serum肝脏liverGOT/(U·L-1)GPT/(U·L-1)GOT/(U·g-1prot)GPT/(U·g-1prot)对照118.91±5.38a79.54±24.85a178.51±15.29c309.02±85.58a裂壶藻61.34±6.78b35.82±16.79b815.12±88.12a341.25±44.84a盐藻57.16±0.14b45.28±4.57b868.96±63.73a380.54±29.08a小球藻73.91±13.60b36.81±19.27b410.69±84.09b344.24±53.24a
表5饲料中添加不同藻粉对非洲王子鱼肠道、肝脏和血清中部分酶活力的影响
Tab.5EffectsofdietaryDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisonAKPandACPactivitiesindifferenttissuesofLabidochromiscaeruleus
组别group肠道intestinaltract肝脏liver血清serumAKP/(U·g-1prot)ACP/(U·g-1prot)AKP/(U·g-1prot)ACP/(U·g-1prot)AKP/(U·L-1)ACP/(U·L-1)对照138.19±15.47a576.93±94.46ab14.43±1.86b123.42±20.36b1.89±0.53a33.64±3.83a裂壶藻162.75±17.48a643.91±56.78ab28.79±4.65a270.43±59.53a2.26±0.44a40.84±5.44a盐藻115.05±39.04a729.76±87.61a25.4±10.18ab279.41±68.93a2.20±0.54a35.10±4.55a小球藻100.76±22.16a537.70±80.52b15.47±5.47ab115.41±0.71b1.81±0.80a41.42±5.86a
体色是评判非洲王子鱼观赏价值的重要标准，而体色是由类胡萝卜素含量的多少决定的。微藻中含有各种多糖和大量的天然色素，对于增强水生动物的体色具有重要作用[18-19]。陈家鑫[4]将裂壶藻用于大菱鲆Scophthalmusmaximus仔鱼的培育，不但提高了仔鱼的成活率，而且在仔鱼的发育过程中未出现白化仔鱼的现象，其色素细胞发育正常。本试验中，在饲料中添加1%裂壶藻的试验组非洲王子鱼皮肤中类胡萝卜素含量显著高于其他3组，说明对于非洲王子鱼而言，裂壶藻具有良好的增色作用，与对大菱鲆的试验结果类似。方珍珍等[20]的研究发现，与辣椒红相比，盐藻对红白锦鲤的着色效果更好。对斑节对虾Penaeusmonodon的研究也发现，盐藻能显著增色[21]。而本试验中，盐藻对非洲王子鱼增色效果不明显，这可能与试验鱼的种类、年龄、生理状况和饲料有关。
谷丙转氨酶和谷草转氨酶在氨基酸代谢过程中发挥着重要的作用。GOT、GPT主要存在于肝脏中，正常情况下血清中的活性较低，当组织细胞受损时，这两种酶会从细胞内逸出，然后进入血液，进而活性升高，因此，血清中GOT和GPT活性可反映肝脏的损伤情况[23]。刘宏超等[13]对津新鲤的研究发现，饲料中裂壶藻添加量在0.8%～1.2%时，谷丙转氨酶/谷草转氨酶活性最低。本试验与上述结果相类似。添加3种藻后非洲王子鱼血清中的GOT、GPT活性均显著降低，肝脏中的GOT活性升高，说明3种藻均能减轻非洲王子鱼肝脏的损伤，并减轻应激反应。
磷酸酶在蛋白酶的去磷酸化过程中发挥着至关重要的作用，AKP和ACP不仅参与一些营养物质的消化、吸收、运输，在生物体内还起到重要的解毒作用。ACP、AKP能够杀死外来入侵的病原体，并能通过修改病原表面分子来加速吞噬细胞的吞噬及异物的降解速度，在免疫反应中发挥着重要的作用[24-25]。裂壶藻、盐藻藻粉作为添加剂加入饲料中投喂动物，能够加强动物机体的非特异性免疫力。黄亮华等[26]的研究表明，裂壶藻能提高刺参的免疫机能，冯伟等[27]研究表明，裂壶藻可以提高对虾的免疫机能。本试验中，饲料中添加了裂壶藻，试验鱼的肝脏AKP、ACP活性显著升高，说明其肝脏的免疫力得到提高。
本试验中通过在饲料中添加3种不同藻粉连续投喂非洲王子鱼45d，研究结果表明：
(1)饲料中添加1%裂壶藻能有效提高非洲王子鱼的生长性能，而盐藻、小球藻对非洲王子鱼生长性能无显著影响。
(2)饲料中添加1%裂壶藻对非洲王子鱼具有良好增色效果，而盐藻、小球藻对非洲王子鱼增色效果不明显。
(3)3种藻对非洲王子鱼肝脏均有保护作用；添加1%盐藻、裂壶藻能够提高其免疫力。
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EffectsofdietaryalgaeDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisongrowthperformance,bodycolorandpartialbiochemicalindicesofLabidochromiscaeruleusCUIPei,SHENGYe-ting,YANGYan-jing,SUNJin-hui
(CollegeofFisheries,TianjinKeyLaboratoryofAqua-ecologyandAquaculture,TianjinAgriculturalUniversity,Tianjin300384,China)
Keywords：Labidochromiscaeruleus;algapower;growthperformance;bodycolor;biochemicalindex
收稿日期：2018-07-15
基金项目：浙江省重中之重一级学科(水产)开放基金资助项目(xkzsc1501)；天津市自然科学基金资助项目(14JCQNJC15100)；天津市宝坻区农业科技重大项目；农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室开放基金资助项目
作者简介：崔培(1985—)，女，博士研究生。E-mail:icp7410@hotmail.com
通信作者：孙金辉(1979—)，男，副教授。E-mail:jhsun@163.com