上海市资源植物功能基因组学实验室

该平台主要开展遗传转化、基因编辑、细胞融合、倍性育种、器官培养、共生培养、脱毒快繁、次生代谢调控及珍稀濒危植物拯救等研究工作。平台实验室建制较为齐全,培养间平面200m2,储备100多种植物离体再生技术体系,例如普陀鹅耳枥、蛇足石杉、红豆杉、花叶熊掌木、芍药属等物种。

负责人:朱木兰研究员

二、代谢分析平台

为植物小分子代谢产物的分析工作提供所需的实验设备设施。

负责人:孔羽高级工程师

主要仪器介绍如下:

(一)超高效液相色谱-高分辨质谱联用仪

生产厂家及型号:

美国ThermoFisherScientific公司,Q-Exactiveplus

功能应用介绍:

Q-ExactiveplusLC-MS/MS系统将四极杆母离子选择性与高分辨率和准确质量数Orbitrap检测相结合,主要用于非目标或目标化合物筛查,也能够实现广泛的定性和定量应用,特别适合于复杂背景下的目标成分分离、结构鉴定,可以快速可靠地识别、定量和确认更多化合物。

HRAM和全扫描能力可以自始至终捕获所有样品数据,从而实现回顾性数据分析而无需再次扫描样品,可完成大规模代谢组学样品分析;分辨率高达140,000FWHM,可消除同量异序同分异构化合物的干扰;全离子碎片(AIF)模式和多重解离技术——源内CID和HCD可以辅助化合物识别;四个数量级的扫描动态范围可以在一次扫描中同时检测痕量级和高丰度化合物。其典型应用包括:(1)药物代谢物鉴定,尤其是复杂体系中痕量成分的鉴定和分析;(2)天然产物组分分析、中药现代化、药物研发等;(3)药物残留或环境污染物的鉴定、确认和真假药鉴别等。

用户可进行有机小分子的结构鉴定分析,药物代谢物及其衍生物定性分析、植物活性成分等的结构鉴定分析等。

主要配置:

该仪器的质量范围(m/z)为50~2000,离子源:ESI源;质量分析器:采用四极杆与静电场轨道阱串联的组合;液相系统:戴安U3000超高压液相色谱(配DAD紫外检测器);二级质谱碎裂方式(MS/MS):HCD;数据系统(Software):Xcalibur数据采集系统、MassFrontier结构解析软件,CompoundDiscoverer2.1代谢组学软件、TRACEFINDER定量软件。

管理规则:

1、样品以课题组委托的方式交给仪器管理员进行针对性的检测和条件优化,不得自行上机操作仪器。

2、需自行根据自己样品的特性进行样品前处理,然后在网上提交预约,预约时请明确检测的目标物,方便我们根据情况联合处理。切记:样品不可含有DMSO、甘油等表面活性剂,不可含有非挥发性的酸、碱及其盐等(仅氨水、甲酸、乙酸可用),样品上机前需有机滤膜0.22um过滤。

3、原则上每周一,周二进行仪器的校正等维护,然后进行小分子样品分子量及LC-MS的检测。

4、样品由孔羽根据样品检测类型及样品情况安排机时进行检测。不以网上预约机时为准。

5、若因样品问题导致的色谱柱或仪器堵塞,研究组需承担相应的赔偿责任。

按时计费:

开机费200.00元;测样按小时收费

(二)超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪

美国ABSciex公司,Qtrap6500+

该系统主要应用于药物代谢及药物动力学研究以及小分子代谢产物的定量分析。1)产生更多离子,聚焦和传输更多离子,聚焦和传输更多离子,2)速度更快的MRM3增强的选择性,3):借助SCIEX质谱平台,QTRAP技术具有高出基本三重四极杆质谱仪100倍的全扫描灵敏度,在增强定性分析工作流程的同时,发挥同步定量分析和图谱库搜索工作流程的优势。该靶向功能分析定量筛选质谱系统具体配置包括毛细管电泳及高灵敏度的串联四极杆质谱仪(Qtrap6500),在靶化合物定量筛选中具有广泛的应用。可用于目标化合物的定量筛选研究等等。

主要技术参数:

1、质量范围(m/z):50-1700m/z;

2、质量准确度:<2ppm;

3、质量稳定性:±0.1amu/24h。

1、离子源:电喷雾离子源(ESI)、大气压化学电离源(APCI);

2、质量分析器:三重四极杆与线性离子阱复合型质谱(QTRAP)的组合(Q1四极杆,Q2四极杆,Q3线性离子阱);

3、超高液相系统(UPLC):超高压液相色谱(二元梯度混合泵、自动进样器、柱温箱);

4、数据系统(Software):Analyst数据采集系统、OS软件。

该质谱仪为三重四级杆质谱仪,主要用于靶向化合物检测,需要通过标准品采集质谱检测信息。1.在预约前请告知所要检测的代谢物种类信息以确定是否有现成的方法进行检测;若无现成方法,需自备标准品进行方法开发。2.绝对定量检测需自备标准品配置标准曲线样品。3.若因样品问题导致的色谱柱或仪器堵塞或严重污染(样品不可含有DMSO、等表面活性剂,不可含有非挥发性的酸、碱及其盐等),研究组需承担相应的赔偿责任。

美国Agilent公司,7200B

2、质量精度<2ppm;

3、扫描速度1-50谱图/秒;

4、分辨率:>12000FWHM1pgOFN(八氟奈)不分流进样,在m/z271.9867;

5、动态线性范围可高达5个数量级;

6、二级高分辨质谱,可以提供更丰富的化合物结构信息。

1、离子源:配置EI源和CI源;

3、气相系统(GC):配150位液体自动进样器;

4、数据系统(Software):MasshunterWorkstation数据采集处理系统、MassProfinderProfessional软件、NIST14谱库。

1.在预约前请告知所要检测的代谢物种类信息;2.绝对定量检测需自备标准品配置标准曲线样品。3.若因样品问题导致的色谱柱损伤或仪器严重污染或(样品溶液不可含有水、酸碱等已损伤色谱柱的强极性试剂),如造成色谱柱损伤研究组需承担相应的赔偿责任。

开机费300.00元;测样按小时收费

(四)液相色谱-三重四级杆质谱联用仪

美国Agilent公司,6460

该质谱仪为三重四级杆低分辨质谱仪,主要用于代谢物与微量成分的定性定量分析、代谢组学、脂质组学杂质分析等多种领域研究。

其经惰性处理的镀白金离子传输毛细管,消除电荷蓄积作用,同时保证在极性切换过程中不损失离子;高频、小口径八极杆,更有效地聚焦离子成束,有助于MRM的高灵敏的采集;线性加速的高能碰撞六极杆反应池,有效消除背景噪音和“记忆效应”,从而保证了痕量样品快速、准确的分析结果。其配有调谐溶液自动输送系统,软件控制的自动调谐,相对操作简便,培训后可自行操作。

1、质量范围(m/z):20-3000m/z;

2、飞克(femtogram)级的检测限;线性范围达到106;

1、离子源:ESI、APCI源;

2、质量分析器:三重四极杆;

3、液相系统(HPLC):Agilent1260HPLC,配有G4212BDAD紫外检测器、G1316A柱温箱、G1367E高效能自动进样器、G1322A在线脱气机G1312B二元梯度混合泵。

4、数据系统(Software):MasshunterWorkstation数据采集处理系统。

5、氮气发生器、高纯氮等。

1.培训后可自行操作(详细电子教程保存于控制电脑内);2.检测需自备标准品、流动相、色谱柱等耗材。3.若因样品问题导致仪器严重污染或损伤(样品不可含有DMSO、等表面活性剂,不可含有非挥发性的酸、碱及其盐等),研究组需承担相应的赔偿责任。

开机费200.00元;测样按小时收取机时费

(五)气质联用仪(单四级杆)

美国Agilent公司,7890A-5975C

该质谱仪为单四级杆低分辨质谱仪,主要用于可以进行挥发性有机物的定性与定量分析:色谱峰谱库检索(NIST08谱库)、百分比报告、内/外标法定量测定。离子源温可达300℃,适合挥发有机物质(沸点<300℃)的定性、定量分析;惰性氦气为载气提高分析速度;培训后可自行操作。

1、质量扫描范围:1-1050u;

2、扫描速率:12500u/s;

3、灵敏度:进样1uL浓度为20pg/uL的八氟萘标样,m/z272离子信噪比为10:1

1、气相色谱:带FID检测器;

2、自动进样器:150位液体进样器;

3、质量分析器:四级杆质谱检测器;

4、数据系统(Software):Chemstation数据采集处理系统、NIST08谱库。

1.培训后可自行操作(详细电子教程保存于控制电脑内);2.检测需自备标准品、特殊色谱柱等耗材。3.若因样品问题导致的色谱柱损伤或仪器严重污染,研究组需承担相应的赔偿责任。

开机费200.00元(使用高纯氮);测样按小时收取机时费

(六)超高效液相色谱仪

(此图源于网络,具体以实物为准)

美国Agilent公司,1260InfinityII

该仪器为超高效液相色谱仪类,主要用于①分离分析代谢物的组分含量。②药物质量控制。③分析药物在体内的残量。④测定代谢产物。

1、最高耐压:不低于78MPa(780Bar);

1、四元梯度泵:含主动密封垫清洗蠕动泵,实时维护泵的使用性能;

2、在线真空脱气机:含集成脱气单元,4个脱气通道;

3、自动进样器:120个样品瓶(2mL),进样量范围0.1-100μL。

4、智能化柱温箱:柱温箱可以左右同时控制不同温度;内配置6通阀,耐压不低于78Mpa(780Bar),可进行双柱切换等高级功能。

5、二极管阵列检测器DAD

6、数据系统(Software):MasshunterWorkstation数据采集处理系统。

1.培训后可自行操作(详细电子教程保存于控制电脑内);2.检测需自备标准品、流动相等耗材。3.若因样品问题导致的色谱柱损伤(自备除外)或仪器严重污染,研究组需承担相应的赔偿责任。

开机费50.00元;测样按小时收取机时费

附表1、液相色谱及液相色谱质谱联用的应用案例

应用领域

具体应用对象举例

1

生物

蛋白质、肽类、核酸、氨基酸、植物代谢物等

2

食品

食品营养成分、添加剂、污染物等分析

3

医药

抗生素、磺胺类药物;中药鉴别,生物碱、黄酮。。。。

4

环境

多环芳烃、多氯联苯、小基化合物、酚类、邻苯二甲酸酯等;农残、除草剂等

5

化工

表面活性剂、化妆品、染料等等

6

法医学

血、尿、唾液等特定成分的检测

附表2、气相色谱及气相色谱质谱联用的应用案例

植物中的萜类、胺类、脂肪酸及酯类

香料、牛奶、黄油等的不饱和脂肪酸、香气成分

中药挥发油

水中的芳香烃、杀虫剂、除草剂等农药

空气中的有机污染物,如苯类、苯酚、卤代烃等

发动机燃料中的烃类

石油

汽油中的各种烷烃、原油成分等

7

血液中的酒精、尿液中的可卡因、毒鼠强等

(一)化学发光成像仪

DU-934P-BV(CCD英国andor,其他为国产)

满足植物学研究的需要,解决植物活体荧光成像时叶绿体荧光干扰的问题,针对不同的实验需求配置突变体筛选暗箱或光周期暗箱。实验无需将植物样本做任何处理,并可通过生物发光(LUC)和荧光方法实时观察植物样本基因表达的变化,准确定量分析。

1、CCD:像素:≥1024x1024,像素点≥13x13-μm,量子效率:≥95%@575nm,满阱电荷:100,000,制冷:-80°C(ambientairat20°C)

2、镜头:50mm焦距,F1.8高通光量定焦广角镜头

3、铝合金暗箱46*42*72cm(数控加工,氧化发黑处理);相机固定座(数控加工,氧化发黑处理);6位滤镜轮(数控加工,氧化发黑处理);

4、手动升降台(数控加工,氧化发黑处理);

5、光源:2*LED白色辅助光源;2*LED兰色辅助光源;2*LED红色辅助光源。

1、CCD;

2、C型接口;

3、镜头;

4、暗箱。

1、检测需自备耗材。2、若因人为导致仪器损伤,研究组需承担相应的赔偿责任。

开机费50元;测样按小时收取机时费

仪器管理员:邵文(37792288-930)

(二)实时定量遗传分析仪

PyroMarkQ48

该仪器测序原理为:焦磷酸测序。具备SNP分析、突变及插入缺失检测分析、CpG/CpN甲基化定量分析、微生物鉴定分型等功能;适用于基因频率定量分析,细菌、病毒、真菌的快速分型和鉴定;在一个反应中对一段片段中所有甲基化位点进行逐点的精确定量分析;适用于植物甲基化定量测序,无需专业生物信息人员判读,无需额外的数据分析软件;对1-48个样本的分析一键完成,5分钟完成所有样本分析。

1、样品通量:48个样本;

2、定量测序,定量线性范围:5%-95%;

3、结果可靠性:测序第1个碱基开始即为可信结果;

4、连续碱基准确性:可精确读取8个的连续单个重复碱基;

5、实时监测:可以实时体现并且监测反应过程;

6、内在的质控标准:检测甲基化位点的同时即可监测样品的亚硫酸氢盐转化程度,无需额外质控;

7、无需建库,直接测序;

8、甲基化位点精确定量分析无需构建克隆。

1、主机;

2、软件包:PyromarkQ48Autoprep、PyroMarkAssayDesign2.0;

开机费0元;测样按小时收取机时费

仪器管理员:暂无

(三)纳米孔(核酸)测序仪

英国OxfordNanoporeGridIONX5

该仪器测序原理是:通过灵活的文库准备方案控制DNA/RNA的读长。测序仪通过顶端的酶马达控制DNA或RNA链的移动并依次通过纳米孔,产生电流的波动,仪器采用专用集成电路捕获来自纳米孔的这种电流波动信号,通过算法将其转化成相应的碱基响应数据并记录下来;纳米孔底层的电阻膜保证电流必须通过纳米孔,确保信号不受干扰;基因通过后,马达蛋白分离,纳米孔准备好接受下一个片段。采用纳米孔测序技术对基因组进行实时长读长测序,以帮助从头组装完整的基因组、解决结构变异问题并评估其影响以及快速鉴定混合种群的种属。该仪器能够单次同时运行多个测序芯片,且不需要多个电脑进行数据处理;能够根据需要开始和停止运行单个测序芯片;需建库、流程相对简易;能够进行实时数据分析;具有长读长的测序能力;可用于高保真DNA和直接RNA测序。

1、可同时测序5个芯片,每个单独测序的芯片可达512个活动通道;

2、每次实验中,每个样本可进行独立的检测;可以对目标分子进行实时选择性测序,同时排斥无关联的分子。

3、可以在实验开始后很快开始生成数据流,2分钟内产生可用数据,以快速获得结果;可以在实验开始后很快进行分析,在获得结果后可以停止该实验并开始下一个实验。

4、样本输入量:介于10pg到1μg之间。

5、准确性:30X一致性准确度不低于99.8%。

6、质控标准:所有新的测序芯片开始使用前可以进行自动质量检测,显示可用的纳米孔数目

2、软件包;

仪器管理员:杨俊、王红霞(受平台委托暂时代管)

(四)数字式PCR仪

仪器管理员:暂无指定管理员

(五)流式细胞仪

PARTECCyFlow

该仪器配置488和365荧光光源。颗粒粒径检测范围0.05-200um荧光灵敏度<50MESFFITC,<30MESFPE荧光最佳分辨率CV≤1%,最大速度:200,000细胞/秒绝对计数误差≤2%,稳定性≥99.5%,分辨率≤1%。用于根据预选的参量范围对指定的细胞亚群进行分析,换算植物细胞c值(DNA总量)和倍性测量。

(六)实时荧光定量PCR

ABIsteponeplus

可选耗材:96孔反应板与光学盖膜/96孔反应板与光学平盖/0.1mL8连管与光学平盖,支持容量:10-30μL,4通道96孔、4℃-100℃温度范围,安装时已校准染料:SYBRGreenI、FAM、VIC、JOE、NED、TAMRA、ROX染料,被动参照染料:ROX染料。用于基因相对定量分析的基因表达分析,以标准曲线为基础进行绝对定量分析,定性的PCR扩增后核酸序列。

(七)酶标仪

TecanM200pro

光栅波长范围涵盖紫外到近红外区,用于DNA/RNA定量检测和蛋白定量检测等。光吸收波长准确性:<±0.5nm(波长315nm以上);<±0.3nm(波长315nm以下)波长重复性:<±0,5nm(波长315nm以上);<±0.3nm(波长315nm以下)荧光波长准确性:<±2nmforλ>315nm;<±1nmforλ≤315nm波长重复性:<±1nmforλ>315nm;<±0.5nmforλ≤315nm荧光模式:顶部、底部检测,滤光系统。可以进行光吸收、荧光激发光和发射光全波段扫描检测。

(八)激光粒度仪

暂无图片

英国马尔文仪器有限公司MarlvernMastersizer2000F

利用先进的激光衍射技术与高度实用的常规颗粒表征方法,采用全自动化操作,测量粉末、悬浮物质和乳状液等的粒度及其分布规律,并根据标准化程序得出可靠的测量结果。可用于测定土壤样品、沉积物的粒度及其分布规律,测定固体颗粒材料的粒度,测定水体中悬浮物的粒度,测定乳液的粒度及分布规律等。

四、植物观察及前处理等

(一)台式冷冻干燥机

LabconcoFreeZone6L-84

该仪器复叠式双1/3HP无氟制冷系统可将冷阱内温度降到-84°C,集冰量6L,用于水溶性样品或含乙腈的样品。用于对中等量植物叶片、花、种子等材料样品进行批量冷冻干燥,可以中到大量样品或多批次样品处理。

1、主机、带加热样品架;

2、真空泵;

1、培训后自行使用。2、若因人为导致仪器损伤,研究组需承担相应的赔偿责任。

开机费0元;使用按小时收取机时费

仪器管理员:沈雯(37792288-930)

(二)扫描电镜

SEM-FEIQUANTA250

二次电子像分辨率:高真空模式:≤3.0nm(30kV),背散射电子像分辨率:4.0nm;加速电压:0.2~30kV用于植物类扫描植物花粉、叶表皮、附属物、腺体、维管束、花原基、胚胎等组织材料。处理样品中不得具有磁性,并且不易被磁化,不得含有油类和液体,样品高度小于30mm,直径小于30mm,放大倍数40-20000倍。

1、扫描电镜;

2、喷金仪(LEICAEMACE200),喷金仪用于扫描电镜样品的前处理,铂/黄金10nm/60sec;

按量计费:

开机费200元;使用按样品数量收取费用

(三)激光共聚焦显微镜

OlympusFvi10

4根激光器(405nm,473nm,559nm和635nm),各激光器单独分立,整合输出。物镜放大倍数10-60倍,电动控制转换。Z轴调焦驱动装置,最小步进≤15nm。点扫描,矩形扫描,ZOOMIN扫描,成像。用于形态学、细胞生物学、分子细胞生物学、神经科学、药理学等研究领域,优先用于动、植物细胞、组织水平四通道波长信号检测。

(四)荧光显微镜

LeicaDM6000B

透射光轴:12V100W卤素灯;自动聚光镜头;自动光强管理,BF、Cy3、JFP、YFP和Cy5滤镜。用于动、植物细胞、组织水平五种滤镜下信号检测。

开机费100元;使用按样品数量收取费用

(五)X-微焦射线仪

UltraFocus60

探测器的尺寸为10x15cm,能量范围从10到60KV,UltraFocus60成像样本为8μm的焦点和6倍的几何放大倍数。用于种子、花等动植物(含活体)器官的成像

开机费50元;使用按样品数量收取费用

(六)超薄切片机

LeicaUC7

触屏控制器显示操作提示,多方位LED照明,体视镜方便对玻璃刀/钻石刀,常温切片,全马达操控刀台,东、西方向可测量。用于半薄和超薄切片高精度切片厚度50nm~1um

使用按样品数量收取费用

(七)切片机

LEICA2245

独立控制面板的半自动轮转式切片机,2-20um软石蜡样品以及较硬样品的手动切片。用于常规植物组织切片,花粉管,果实,胚胎,根茎叶等显微切片。

(八)光合分析仪

Li-Cor6400

主机、检测器、红蓝光源.用于植物净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(E)、胞间CO2浓度(Ci)、大气CO2浓度(Ca)等光合和呼吸速率等生理指标。

(九)叶绿素荧光仪

主机、检测手柄。用于对植物进行叶绿素荧光检测,如叶绿素a、b等。

THE END
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