1.2.3精密度试验按上述实验确定的最佳检测条件对同一份IgM,IgG阳性及以阴性混合血清重复检测20次,计算A450值的变异系数(CV值),CV值等于A450值的标准差除以均值。
1.2.6临界值的计算临界值(cutoffvalue):按上述实验确定的最佳检测条件检测30例弓形虫抗体阴性的正常血清样本,以正常血清OD450nm值的均数加两倍标准差为正常值上限,OD值高于上限为阳性,OD值低于上限为阴性。
1.2.7(rSAG1+rHXGPRT+rAK)-ELISA法血清抗体的检测按上述实验确定的最佳检测条件分别检测经ZeusToxo-ELISA试剂盒筛选的66例弓形虫IgM阳性血清、70例弓形虫IgG阳性血清和30例弓形虫抗体阴性血清,设阳性对照、阴性对照、空白对照各两孔。
同一份弓形虫IgM阳性及阴性混合血清重复检测20次,阳性血清A450值的变异系数(CV)值为12.3%,阴性血清A450值的变异系数(CV)值为10.2%。同一份弓形虫IgG阳性及阴性混合血清重复检测20次,阳性血清A450值的变异系数(CV)值为14.5%,阴性血清A450值的变异系数(CV)值为11.9%。
IgM:对照组A450均值为0.86,抑制组A450均值为0.23,特异性抑制率为73.3%。IgG:对照组A450均值为1.25,抑制组A450均值为0.33,特异性抑制率为73.6%。
以Toxo-ELISA试剂检测结果为标准,(rSAG1+rHXGPRT+rAK)-ELISA法检测66例IgM阳性、30例阴性、70例IgG阳性血清结果:66例IgM阳性血清,出现7例假阴性,敏感性为89.4%;30例阴性血清,出现1例假阳性,特异性为96.7%,总符合率为91.7%,约登指数为0.861;70例IgG阳性血清,结果出现2例假阴性,敏感性为97.1%;30例阴性血清,出现2例假阳性,特异性为93.3%,总符合率为96.0%,约登指数为0.904。结果见表3。
本次研究显示3种重组抗原rSAG1、rHXGPRT和rAK混合的间接ELISA法检测弓形虫IgM和IgG抗体具有较高的敏感性、特异性,与进口Toxo-ELISA试剂的检测结果相比较总符合率高,试剂易于标准化,减少了实验动物的使用,为临床弓形虫病的检测试剂的国产化奠定基础。