根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定，经审查，批准南京农业大学等29家单位申报的藿蜂散等7种兽药产品为新兽药，核发《新兽药注册证书》，发布产品质量标准、说明书和标签，并发布酮洛芬等2种兽药产品每日允许摄入量和最高残留限量（试行）及残留检测方法标准（试行），自发布之日起执行。
批准江西中成药业集团有限公司等3家单位申报的注射用黄芩等2种兽药产品变更注册，发布修订后的质量标准、说明书和标签，自发布之日起执行，原我部发布的本产品质量标准、说明书和标签同时废止。
特此公告。
附件：1.新兽药注册目录
2.兽药变更注册目录
3.质量标准
4.说明书和标签
5.酮洛芬每日允许摄入量和最高残留限量标准（试行）及残留检测方法标准（试行）
6.羟氯扎胺每日允许摄入量和最高残留限量标准（试行）及残留检测方法标准（试行）
农业农村部
2020年8月26日
附件1
新兽药注册目录
新兽药名称
研制单位
类别
新兽药注册证书号
监测期
备注
藿蜂散
南京农业大学、山东百力和生物药业有限公司、芮城绿曼生物药业有限公司、青岛创生药业有限公司、山西农业大学
三类
（2020）
新兽药证字36号
3年
注册
土苓茅根颗粒
青岛动保国家工程技术研究中心有限公司、石家庄江山动物药业有限公司、湖北回盛生物科技有限公司、山东欣慧瑞生物科技有限公司、广东海纳川生物科技股份有限公司、山东省兽药质量检验所、青岛蔚蓝生物股份有限公司、成都新精华药业有限公司、石家庄市金元康牧药业有限公司、青岛信诺邦生物科技有限公司、江西邦诚动物药业有限公司
新兽药证字37号
裸花紫珠末
广州格雷特生物科技有限公司、华南农业大学
新兽药证字38号
酮洛芬注射液
佛山市南海东方澳龙制药有限公司
五类
新兽药证字39号
羟氯扎胺
中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所、常州齐晖药业有限公司、内蒙古齐晖化学有限公司
二类
新兽药证字40号
4年
羟氯扎胺混悬液
中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所、常州齐晖药业有限公司、武威牛满加药业有限责任公司、成都中牧生物药业有限公司、重庆方通动物药业有限公司、河北远征药业有限公司、兰州牧药所生物科技研发有限责任公司、江苏优力维生物医药有限公司
新兽药证字41号
美洛昔康咀嚼片
浙江海正动物保健品有限公司
新兽药证字42号
附件2
兽药变更注册目录
兽药名称
变更事项
注射用黄芩
江西中成药业集团有限公司、江西中成中药原料有限公司
增加“每支装1g”规格，修改质量标准
D-氯前列醇钠注射液
宁波第二激素厂
增加10ml∶0.3mg兽药含量规格，修改注册质量标准
附件3略
附件4
藿蜂散等9种兽药产品说明书和标签
一、藿蜂散说明书和标签
（一）藿蜂散说明书
兽用
【兽药名称】
通用名称：藿蜂散
商品名称：
汉语拼音：HuofengSan
【主要成分】淫羊藿、酒制蜂胶。
【性状】本品为浅棕色粉末。
【功能与主治】补益正气，增强免疫。用于提高鸡对鸡新城疫疫苗、猪对猪瘟疫苗的免疫应答。
【用法与用量】配合疫苗使用，混饲：雏鸡0.2g，连用3日；仔猪1～1.5g，连用3日。
【不良反应】暂未发现不良反应。
【注意事项】
【规格】每100g相当于原生药4g。
【包装】100g/袋。
【贮藏】密闭，防潮。
【有效期】24个月。
【批准文号】
【生产企业】
（二）藿蜂散标签
【生产日期】
【生产批号】
【有效期】至
二、土苓茅根颗粒说明书和标签
（一）土苓茅根颗粒说明书
通用名称：土苓茅根颗粒
汉语拼音：TulingmaogenKeli
【主要成分】土茯苓、白茅根、益母草、槐花、广藿香。
【性状】本品为棕黄色至棕褐色颗粒；气香，味微苦。
【功能与主治】清热利湿，健脾化浊。用于治疗由湿热及饲料蛋白质含量过高引起肾肿的湿热证。
【用法与用量】混饮，一次量，每1L水，鸡1g，每日2次，连用5日。
【不良反应】按规定剂量使用，暂未发现不良反应。
【注意事项】1.严格按照给药浓度配制药液，并充分搅拌后给药。
3.每次给药结束后，高压水冲洗水线至水流完全澄清。
【规格】每1g相当于原生药0.946g。
【包装】
【贮藏】密封，置干燥处。
（二）土苓茅根颗粒标签
三、裸花紫珠末说明书和标签
（一）裸花紫珠末说明书
通用名称：裸花紫珠末
汉语拼音：LuohuazizhuMo
【主要成分】裸花紫珠。
【性状】本品为暗黄色至灰褐色粉末；气微香，味涩、微苦。
【功能与主治】抗炎、抑菌，止血，促生长。用于促进猪的生长。
【用法与用量】混饲：每1kg饲料，猪3g。连用28天。
【注意事项】可在商品饲料和养殖过程中使用。
【规格】
（二）裸花紫珠末标签
四、酮洛芬注射液说明书和标签
（一）酮洛芬注射液说明书
通用名称：酮洛芬注射液
英文名称：KetoprofenInjection
汉语拼音：TongluofenZhusheye
【主要成分】酮洛芬
【性状】本品为无色至淡黄色澄明液体。
【药理作用】药效学酮洛芬为解热镇痛非甾体抗炎药，属于芳香基丙酸衍生物，具有抗炎、镇痛和解热的作用。其主要作用机理是通过干扰花生四烯酸代谢途径中的环氧化酶，减少前列腺素和血栓烷等炎性介质的生成而发挥抗炎、镇痛和解热作用。
【适应证】与适宜的抗菌药合用，治疗奶牛临床型乳房炎引起的炎症、发热与肌肉疼痛等。
【用法与用量】以酮洛芬计。肌内注射：一次量，每1kg体重，牛3mg，一日1次，连用3日。
【不良反应】肌注后对局部组织有轻微刺激作用。
【注意事项】1.用于奶牛临床型乳房炎辅助治疗时，需与适宜的抗菌药配伍使用。
2.对酮洛芬过敏及肝、肾功能受损的动物禁用。
3.不可与其他非甾体类抗炎药同时使用。
4.消化道溃疡或出血患畜慎用。
【休药期】牛7日；弃奶期0日。
【规格】（1）50ml∶7.5g（2）100ml∶15g
【贮藏】遮光，密闭保存。
【有效期】36个月。
（二）酮洛芬注射液标签
五、羟氯扎胺标签
通用名称：羟氯扎胺
英文名称：Oxyclozanide
汉语拼音：Qianglüzha’an
【包装规格】
【运输注意事项】
六、羟氯扎胺混悬液说明书和标签
（一）羟氯扎胺混悬液说明书
通用名称：羟氯扎胺混悬液
英文名称：OxyclozanideSuspension
汉语拼音：Qianglüzha’anHunxuanye
【主要成分】羟氯扎胺
【性状】本品为乳白色混悬液。
【药理作用】药效学羟氯扎胺为水杨酰苯胺类抗寄生虫药。主要通过抑制寄生虫体内的氧化磷酸化过程，减少ATP的产生，并降低糖原含量，使琥珀酸蓄积，从而影响虫体的能量代谢过程使虫体死亡。
【适应证】用于治疗牛肝片吸虫病。
【用法与用量】以羟氯扎胺计。内服：一次量，每1kg体重，牛10mg（相当于每10kg使用本品3ml）。
【不良反应】1.给药后动物可能会出现轻微的粪便软化、排便次数增多、短暂的食欲不振或腹泻，停药后恢复正常。
2.过量使用本品可能引起动物相对增重率下降。
【注意事项】1.使用前需振摇均匀；
2.对本品过敏的动物禁止使用；
4.在正常剂量水平下，本品对存在于肝组织中的未成熟吸虫没有活性。
5.在计算给药剂量前，应尽可能准确地评估动物的体重，检查给药装置的准确性。
【休药期】牛28日，弃奶期72小时。
【规格】（1）100ml∶3.4g（2）250ml∶8.5g（3）500ml∶17.0g。
【贮藏】遮光，密封保存。
（二）羟氯扎胺混悬液标签
【性状】本品为乳白色混悬液
【适应证】用于治疗牛肝片吸虫病
【不良反应】详见说明书。
【注意事项】详见说明书。
七、美洛昔康咀嚼片说明书和标签
（一）美洛昔康咀嚼片说明书
宠物用
通用名称：美洛昔康咀嚼片
英文名称：MeloxicamChewableTablets
汉语拼音：MeiluoxikangJujuepian
【主要成分】美洛昔康
【性状】本品为土黄色圆形刻痕片，有褐色斑点。
【药理作用】美洛昔康为解热镇痛、非甾体抗炎药。通过抑制前列腺素的合成而发挥作用。美洛昔康可发挥抗炎、抗渗出、镇痛和解热作用。其可抑制白细胞渗入炎症组织，预防骨和软骨损伤，可微弱地抑制胶原蛋白诱导的血小板聚集。
【适应证】用于缓解急性和慢性肌肉-骨骼疾病引发的炎症和疼痛。
【用法与用量】以美洛昔康计。内服：每1kg体重，犬0.1mg，一日1次，首次加倍。症状消失，立即停药。临床反应常见于给药后3～4天。
维持剂量给药方案
规格
体重（kg）
用药数量（片）
1mg
4.0～7.0
7.1～10.0
1
10.1～15.0
15.1～20.0
2
2.5mg
20.1～25.0
25.1～35.0
35.1～50.0
【不良反应】可能发生非甾体抗炎药典型的不良反应（尤其在给药后5～14天），主要是食欲下降、呕吐、腹泻、大便潜血和嗜睡。少数情况下会引起出血性腹泻、吐血、胃肠道溃疡和肝酶升高。通常是暂时性的，治疗结束后会消失。
【注意事项】1.禁与甾体类或其他非甾体类抗炎药、氨基糖苷类抗生素或抗凝血剂合用。
2.胃肠道溃疡或出血，肝脏、心脏或肾脏功能受损，出血异常及对该类药物过敏的动物禁用。
3.小于6周龄或体重小于4kg的犬禁用。
4.本品为风味片，犬可自由摄取，可单独给药或与食物一起喂食。
5.存在肾中毒的潜在风险，脱水、失血性休克或低血压动物慎用。
6.怀孕晚期或哺乳期的母犬禁用。
7.若治疗10天后，症状没有得到改善，则中断使用该产品并咨询兽医师。
8.治疗前若使用了其他抗炎药，应根据其药代动力学特征至少停药观察24小时后再使用本品，以免引起或增强不良反应。
9.避免儿童接触。
【休药期】不需要制定。
【规格】（1）1mg（2）2.5mg
【贮藏】遮光，密封，25℃以下保存。
（二）美洛昔康咀嚼片标签
【适应证】解热镇痛、非甾体抗炎药。用于缓解急性和慢性肌肉-骨骼疾病引发的炎症和疼痛。
八、注射用黄芩说明书和标签
（一）注射用黄芩说明书
通用名称：注射用黄芩
汉语拼音：ZhusheyongHuangqin
【主要成分】黄芩。
【性状】本品为淡黄色至棕黄色的粉末；味淡，微苦。
【功能与主治】清热燥湿，泻火解毒。主治咳喘证，用于缓解鸡传染性支气管炎引起的呼吸道症状。
【用法与用量】规格（1）每支装0.5g，肌内注射：一次量，鸡，10～20mg，一日2次，连用3日。临用前以10ml注射用水充分溶解。
规格（2）每支装1g，肌内注射：一次量，鸡，10～20mg，一日2次，连用3日。临用前以20ml注射用水充分溶解。
【规格】（1）每支装0.5g，（2）每支装1g。
【贮藏】密封，置阴凉干燥处。
（二）注射用黄芩标签
九、D-氯前列醇钠注射液说明书和标签
（一）D-氯前列醇钠注射液说明书
通用名称：D-氯前列醇钠注射液
英文名称：D-CloprostenolSodiumInjection
汉语拼音：D-LüqianliechunnaZhusheye
【主要成分】d-氯前列醇钠
【性状】本品为无色的澄明液体。
【药理作用】前列腺素类药。d-氯前列醇是自然存在的前列腺素PGF2α的一种功能合成类似物，具有强效溶解黄体作用，d-氯前列醇比氯前列醇（外消旋混合物）活性强3-4倍。引起功能黄体的快速消退。从而导致孕酮产量的快速下降。黄体溶解后卵巢开始卵泡发育，母畜恢复正常发情与排卵。d-氯前列醇同时能引起子宫平滑肌收缩。对子宫有收缩作用。
【适应证】用于治疗母牛持久黄体，诱导黄体溶解，使母牛恢复正常发情。
【用法与用量】以D-氯前列醇计。肌内注射：一次量，母牛，0.15mg。
【不良反应】按推荐剂量使用未见不良反应。
【注意事项】1.不希望流产的怀孕母牛禁用。
2.因胎位异常、机械阻力等因素导致难产的母牛禁用。
3.患有心血管或呼吸系统疾病的母牛禁用。
4.开瓶后1～10℃避光保存，28日内有效，未用完部分应废弃。
5.接触本品时避免污染。
6.怀孕妇女或患有哮喘、支气管疾病或其他呼吸系统疾病的患者不得接触本品。
7.眼睛或皮肤直接接触本品后，应立即以大量清水冲洗。
8.避免儿童接触本品。
【休药期】牛0日；弃奶期0小时。
【规格】按C22H29ClO6计算，（1）2ml∶0.15mg；（2）10ml∶0.3mg；（3）20ml∶1.5mg
【生产企业】宁波第二激素厂
地址：浙江省慈溪市宗汉街人健路28号。
（二）D-氯前列醇钠注射液标签
附件5
酮洛芬每日允许摄入量和最高残留限量标准（试行）及酮洛芬残留检测方法标准（试行）
酮洛芬每日允许摄入量和最高残留限量标准（试行）
申报单位参照日本有关标准制定了酮洛芬的每日允许摄入量（ADI），参照日本肯定列表中酮洛芬残留限量标准制定了酮洛芬在牛组织中的最高残留限量（MRLs），如下表：
活性成分
ADI
残留
标志物
动物
品种
靶组织
MRLs（μg/kg）
酮洛芬
0-1μgkg-1d-1
牛
牛奶
50
肌肉
肾脏
肝脏
脂肪
酮洛芬残留检测方法标准（试行）
一、牛奶中酮洛芬残留量的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛奶中酮洛芬残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于牛奶中酮洛芬残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则
GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中酮洛芬残留物用甲醇提取，液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。
4试剂和材料
以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水。
4.1酮洛芬对照品（分子式：C16H14O3，含量≥98%）。
4.2酮洛芬-D3内标物（分子式：C16H11D3O3，含量≥99.5%）。
4.3甲醇：色谱纯。
4.4乙腈：色谱纯。
4.5甲酸：色谱纯。
4.6酮洛芬储备液（1mg/mL）：精密称取酮洛芬对照品50mg置于50mL棕色容量瓶，用30mL甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。分装，置于-20℃冰箱避光保存，有效期1个月。
4.7酮洛芬标准工作液：取酮洛芬储备液适量，分别置于10mL棕色容量瓶内，用甲醇稀释至刻度，制得2000ng/mL、1500ng/mL、1000ng/mL、500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、20ng/mL、10ng/mL系列浓度的酮洛芬标准工作液，现配现用。
4.8酮洛芬-D3贮备液（1mg/mL）：精密称取含酮洛芬-D3对照品10mg置于10mL棕色容量瓶，用5mL甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。分装，置于-20℃冰箱避光保存，有效期3个月。
4.9酮洛芬-D3标准工作液：取酮洛芬-D3储备液适量，置于10mL棕色容量瓶，用甲醇稀释至刻度，制得500ng/mL、250ng/mL的酮洛芬-D3标准工作液，避光，现配现用。
4.100.1%甲酸溶液：取1.00mL甲酸加入1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得，现配现用。
4.110.1%甲酸的乙腈溶液：取1.00mL甲酸加入1L容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得，现配现用。
4.120.1%甲酸溶液-0.1%甲酸的乙腈溶液（90/10，v/v）：量取900mL0.1%甲酸溶液与100mL0.1%甲酸的乙腈溶液，混匀即得，现配现用。
5仪器和设备
5.1液相色谱仪—串联质谱仪：配电喷雾离子源。
5.2分析天平：感量0.00001g。
5.3天平：感量0.01g。
5.4漩涡振荡器。
5.5水平振荡器。
5.6数控超声波清洗器。
5.7高速台式冷冻离心机。
5.8数显恒温水浴锅。
5.9离心管：50mL。
5.10氮吹仪。
5.11Millipore-Q超纯水系统。
5.12两用型隔膜真空泵。
5.13可调微量移液器。
5.14滤膜：孔径0.22μm。
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合，并使均质。
——取均质的供试样品，作为供试试料。
——取均质的空白样品，作为空白试料。
——取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
6.2试料的保存
-20℃以下保存。
7测定步骤
7.1样品预处理
将牛奶样品解冻至室温，涡旋混匀后准确称取1g试料（精确至0.01g）于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入“酮洛芬-D3标准工作液”50μL（浓度为500ng/mL），内标的添加浓度为25ng/mL，涡旋3min，避光静置30min后，加甲醇4mL涡旋1min，200r/min水平振荡10min后，超声10min。于4℃10000r/min离心10min，取上清液转移至10mL离心管中。40℃水浴下氮吹干燥。
干燥后，离心管中加入1mL复溶液﹝0.1%甲酸溶液-0.1%甲酸的乙腈溶液（90∶10，v/v）﹞，涡旋，超声10min后，于4℃10000r/min离心10min，取上清液过滤，供液相色谱-串联质谱测定。
7.2标准曲线的制备
表1牛奶中酮洛芬标准曲线系列浓度表
编号
0
3
4
5
6
7
空白牛奶提取液量（μL）
1000
800
内标的添加体积（μL）
100
内标工作液浓度（ng/mL）
250
酮洛芬工作液的浓度（ng/mL）
500
1500
2000
酮洛芬工作液添加体积（μL）
酮洛芬添加浓度（μg/kg）
10
25
150
200
内标的上机浓度（μg/kg）
酮洛芬上机浓度（μg/kg）
7.3测定
7.3.1色谱条件
色谱柱：AgilentpursuitXRS5-C18，2.0mm×150mm，5μm，或效能相当的色谱柱；
柱温：25℃；
流动相：A-0.1%甲酸溶液，B-乙腈，梯度条件见表2；
流速：0.25mL/min；
进样量：5μL。
表2流动相洗脱梯度
A相%
B相%
90
1.5
7.5
8
13
7.3.2质谱条件
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
干燥气温度：350℃；
干燥气流速：9L/min；
喷雾气压力：30psig；
毛细管电压：4000V；
DeltaEMV：200V。
表3酮洛芬和内标的定性、定量离子对及碰撞能量参考值
化合物
定量离子对
(m/z)
定性离子对
碰撞电压
（V）
碰撞能量
（eV）
255.1＞209.2
120
9
255.1＞105.0
21
酮洛芬-D3内标物
258.1＞212.1
258.1＞105.0
7.4定性测定
表4定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度
>50%
>20%至50%
>10%至20%
≤10%
允许的相对偏差
±20%
±25%
±30%
±50%
7.5定量测定
7.6空白试验
除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
8结果计算和表述
单点校准：由X=（Ai×A′is×Cs×Cis×V×f）/（Ais×As×C′is×m）
或基质匹配标准曲线校准：X=（C×V×f）/m
式中：
X——供试试料中酮洛芬的残留量，μg/kg；
C——由基质匹配标准曲线得到的酮洛芬浓度，μg/L；
Ai——供试试料溶液中酮洛芬的峰面积；
A′is——基质匹配标准溶液中酮洛芬-D3的峰面积；
Cs——基质匹配标准溶液中酮洛芬的浓度，μg/L；
Cis——供试试料溶液中酮洛芬-D3的浓度，μg/L；
Ais——供试试料溶液中酮洛芬-D3的峰面积；
As——基质匹配标准溶液中酮洛芬的峰面积；
C′is——基质匹配标准溶液中酮洛芬-D3的浓度，μg/L；
V——残余物定容体积，mL；
m——供试试料质量，g；
f——稀释倍数。
注:计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。
9检测方法灵敏度、准确度、精密度
9.1灵敏度
本方法检测限为1.0μg/kg，定量限为10.0μg/kg。
9.2准确度
本方法在10～100μg/kg添加浓度水平的回收率为80%～110%。
9.3精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。
附录A
（资料性附录）
图A1牛奶空白试样溶液特征离子色谱图
图A2牛奶基质匹配酮洛芬标准溶液特征离子色谱图（5μg/L）
图A3牛奶空白添加试样溶液特征离子色谱图（10μg/kg）
（图A1～A3中由上至下依次为酮洛芬-D3内标物、酮洛芬特征离子质量色谱图258.1>105.0、258.1>212.1、255.1>105.0、255.1>209.2）
二、牛可食性组织中酮洛芬残留量的测定液相色谱-串联质谱法
本标准规定了牛可食性组织中酮洛芬残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于牛肌肉、肾脏、肝脏和脂肪组织中酮洛芬残留量的检测。
试样中酮洛芬残留物用乙腈-水（80/20）提取，过反相固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3乙腈：色谱纯。
4.4甲酸：色谱纯。
4.5酮洛芬储备液（1mg/mL）：精密称取酮洛芬对照品50mg置于50mL棕色容量瓶，用30mL甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即成1mg/mL的酮洛芬储备液。分装，置于-20℃冰箱避光保存，有效期1个月。
4.6酮洛芬标准工作液：取酮洛芬储备液适量，分别置于10mL棕色容量瓶内，用甲醇稀释至刻度，制得1000ng/mL、500ng/mL、250ng/mL、125ng/mL、50ng/mL、10ng/mL系列浓度的酮洛芬标准工作液，现用现配。
4.7乙腈-水（80/20）：量取乙腈80mL与水20mL混匀，即成乙腈-水（80/20，v/v），现用现配。
5.1高效液相色谱仪—串联质谱仪：配电喷雾离子源。
5.4涡旋振荡器。
5.5超声波清洗器。
5.6高速台式冷冻离心机。
5.7离心管：50mL。
5.8氮吹仪。
5.9Millipore-Q超纯水系统。
5.10可调微量移液器。
5.11滤膜：0.22μm。
5.12反相固相萃取柱：如AgilentCaptivaEMR-Lipid，3mL/300mg或效能相当的萃取柱。
取适量新鲜或解冻的空白或供试牛组织，绞碎并使均质。
7分析步骤
7.1提取
取2g（准确至0.01g）试料于50mL离心管中，加2mL水，涡旋混合1min，再加8mL乙腈，900r/min振荡10min；于4℃10000r/min离心8min，取上清液备用。
7.2净化
取2.5mL备用液过固相萃取柱，收集洗脱液于10mL离心管内，待样品液全部流出后，再加1mL乙腈-水（80/20）进行二次洗脱，挤干。洗脱液于40℃下氮吹至无有机相，用甲醇定容至1mL，900r/min振荡5min，滤膜过滤，待测。
7.3基质标准曲线的制备
取空白组织样品，按“7.1和7.2”处理样品，获得试料基质空白溶液，分别精密量取相应酮洛芬标准工作液100μL，加900μL空白基质中，配制成酮洛芬浓度为1、5、12.5、25、50、100ng/mL系列的基质匹配标准溶液。
7.4测定
7.4.1色谱条件
超高效液相色谱仪：WatersAcquityUPLC；
色谱柱：BEHC18柱，50mm×2.1mm，1.7μm，或效能相当色谱柱；
流动相：A相-0.1%甲酸溶液；B相-乙腈；
流速：0.3mL/min；
柱温：25°C；
表1流动相洗脱梯度
曲线
/
40
60
4.1
7.4.2质谱条件
检测方式：多反应监测；
离子源温度：500℃；
离子化电压（IS）：5500V；
气帘气（CUR）：25psi；
喷雾气（GS1）：50psi；
辅助加热气（GS2）：50psi。
表2酮洛芬定性、定量离子对及碰撞能量的参考值
药物
锥孔电压
(V)
(eV)
255.0>209.1
255.0>105.0
80
20
7.5测定法
7.5.1定性测定
表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
7.5.2定量测定
8试验数据处理
单点校准：X=（A×Cs×V1×V3）/（As×m×V2）
或基质匹配标准曲线校准：由As=a×Cs+b
求得a和b，则C=（A-b）/a
按下式计算酮洛芬的残留量：
X=（C×V1×V3×f）/（m×V2）
Cs——基质匹配溶液中相应酮洛芬药物浓度，μg/kg；
C——供试试料溶液中相应酮洛芬药物浓度，μg/kg；
As——基质匹配溶液中相应酮洛芬药物峰面积；
A——供试试料溶液中相应酮洛芬药物峰面积；
V1——提取液总体积，mL；
V2——过柱上清液体积，mL；
V3——残余物定容体积，mL；
注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。
本方法检测限为1.0μg/kg，定量限为2.0μg/kg。
本方法在2～100μg/kg添加浓度水平的回收率为60%～120%。
本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤25%。
附录B
图B1酮洛芬标准溶液特征离子色谱图（1ng/mL）
图B2空白牛肌肉特征离子色谱图
图B3牛肌肉基质匹配标准溶液（1ng/mL）特征离子色谱图
图B4牛肌肉添加回收酮洛芬（2μg/kg）特征离子色谱图
图B5空白牛肾脏特征离子色谱图
图B6牛肾脏基质匹配标准溶液（1ng/mL）特征离子色谱图
图B7牛肾脏添加回收酮洛芬（2μg/kg）特征离子色谱图
图B8空白牛肝脏特征离子色谱图
图B9牛肝脏基质匹配标准溶液（1ng/mL）特征离子色谱图
图B10牛肝脏添加回收酮洛芬（2μg/kg）特征离子色谱图
图B11空白牛脂肪特征离子色谱图
图B12牛脂肪基质匹配标准溶液（1ng/mL）特征离子色谱图
图B13牛脂肪添加回收酮洛芬（2μg/kg）特征离子色谱图
（图B1～B13中由上至下依次为酮洛芬特征离子质量色谱图255.0>105.0、255.0>209.1）
附件6
羟氯扎胺每日允许摄入量和最高残留限量标准（试行）及残留检
测方法标准（试行）
羟氯扎胺每日允许摄入量和最高残留限量标准（试行）
申报单位参照欧盟有关标准制定了羟氯扎胺的每日允许摄入量（ADI）和羟氯扎胺在牛奶及牛组织中的最高残留限量（MRLs），如下表：
MRLs
ADI：
0～30μg/kg
b.w./d
10μgkg-1
20μgkg-1
100μgkg-1
500μgkg-1
羟氯扎胺残留检测方法标准（试行）
牛可食性组织及牛奶中羟氯扎胺残留量检测液相色谱-串联质谱法（试行）
本标准规定了牛可食性组织及牛奶中羟氯扎胺残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于牛肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织以及牛奶中羟氯扎胺残留量的检测。
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分标准的结构和编写规则（ISO/IECDirectives,Part3,1997,RulesforthestructureanddraftingofInternationalStandards,NEQ）
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
试料中残留的羟氯扎胺，用乙腈-丙酮（60∶40，V/V）溶液（肌肉、肝脏和肾脏组织）或1%三乙胺乙腈溶液（脂肪组织和牛奶）超声提取，阴离子固相萃取柱净化，乙腈饱和的正己烷除脂后，经高效液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。
4.1羟氯扎胺对照品：含量99.0%
4.2乙腈：色谱纯。
4.3甲酸：色谱纯。
4.4甲醇：色谱纯。
4.5丙酮：分析纯。
4.6三乙胺。
4.7正己烷。
4.8氨水。
4.9无水硫酸钠。
4.10乙腈-丙酮混合液：取600份的乙腈与400份的丙酮混匀。
4.111%三乙胺乙腈溶液：取1.0mL三乙胺，用乙腈稀释并定容至100mL，混匀。
4.120.3%甲酸乙腈溶液：取3.0mL甲酸，用乙腈稀释至1000mL，混匀。
4.1325%氨化乙腈溶液：取25mL氨水，用乙腈稀释至100mL，混匀。
4.145%甲酸乙腈溶液：取5.0mL甲酸，用乙腈稀释至100mL，混匀。
4.155%氨水溶液：取5.0mL氨水，用水稀释至100mL，混匀。
4.160.1%甲酸溶液：取1.0mL甲酸，用超纯水定容至1000mL，混匀。
4.17乙腈饱和的正己烷：取1份乙腈和2份的正己烷，混匀，静置分层，取正己烷层。
4.18羟氯扎胺标准储备液（1000μg/mL）：准确称取10.15mg羟氯扎胺对照品，置于10mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，即成1000μg/mL的羟氯扎胺标准储备溶液，-20℃冰箱中保存。有效期6个月。
5.1高效液相色谱－串联质谱仪：配电喷雾电离源。
5.4组织匀浆机。
5.5离心机：转速大于8000r/min以上。
5.6轨道式摇床。
5.7涡旋振荡器。
5.8移液器：量程为10～100μL、20～200μL、100～1000μL、1000～5000μL。
5.9氮气浓缩仪。
5.10固相萃取小柱：Poly-SeryMAX混合型阴离子交换SPE小柱，规格：60mg，3mL。
5.11离心管：50mL、10mL。
5.12微孔滤膜：0.22μm，有机系。
6试样的制备与保存
取适量新鲜或解冻的空白或供试牛肌肉、脂肪、肾脏，除去组织上多余的其他组织和筋腱，切碎后经高速组织均质机捣碎。
7.1.1肌肉、肝脏、肾脏组织样品
准确称取组织样品（2.00±0.02）g，置于50mL离心管中，加入乙腈-丙酮混合液15mL，漩涡混悬15s，超声提取10min，300r/min振荡10min，4℃下8000r/min离心10min后收集上清液；上清液中加入1mL5%氨水待净化。
7.1.2脂肪组织样品
准确称取组织样品（2.00±0.02）g，置于50mL离心管中，加入1%三乙胺-乙腈溶液15mL，漩涡混悬15s，超声提取10min，300r/min振荡10min，8000r/min离心10min后收集上清液；上清液中加入2mL5%氨水后置于-20℃冷藏1h，取出后在4℃下8000r/min离心10min。上清液转移至另一50mL离心管中待净化。
7.1.3奶样品
准确称取牛奶样品（5.00±0.05）g，置于50mL离心管中，加入无水硫酸钠1g，再加入1%三乙胺乙腈溶液10mL，漩涡混悬1min，300r/min振荡10min，4℃下8000r/min离心10min后收集上清液；上清液中加入2mL5%氨水待净化。
MAX固相萃取柱预先用25%氨化乙腈溶液3mL活化，再将前述上清液装载入柱，以1mL/min流速过柱。待上清液流出后，依次用水3mL和甲醇3mL分别淋洗，负压抽干后用3mL5%甲酸-乙腈溶液洗脱，收集洗脱液，在40℃下氮气吹干，残渣用1mL0.3%甲酸乙腈溶液溶解，转移至2mL离心管，加入乙腈饱和的正己烷0.5mL，涡旋，于4℃下15000r/min离心10min，上清液过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。
7.3基质匹配标准曲线的制备
肌肉、脂肪准确称取2.00g±0.02g空白匀浆组织于5mL离心管中，按“7.1”与“7.2”方法处理，洗脱吹干。取0.3%甲酸-乙腈配制的2.5、5、10、20、40、80、100μg/L标准工作液1mL溶解残渣，制备出浓度为1.25、2.5、5、10、20、40、50μg/kg基质匹配标准工作液，涡旋混匀，加入乙腈饱和的正己烷0.5mL，涡旋混匀，于4℃下15000r/min离心10min，取下层液过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。
肝脏准确称取2.00g±0.02g空白匀浆组织于5mL离心管中，按“7.1”与“7.2”方法处理，洗脱吹干。取0.3%甲酸-乙腈配制的2.5、5、100、250、500、1000、2000μg/L标准工作液1mL溶解残渣，制备出浓度为1.25、2.5、50、125、250、500、1000μg/kg基质匹配标准工作液，涡旋混匀，加入乙腈饱和的正己烷0.5mL，涡旋混匀，于4℃下15000r/min离心10min，取下层液过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。
肾脏准确称取2.00g±0.02g空白匀浆组织于5mL离心管中，按“7.1”与“7.2”方法处理，洗脱吹干。取0.3%甲酸-乙腈配制的2.5、5、25、50、100、200、400μg/L标准工作液1mL溶解残渣，制备出浓度为1.25、2.5、12.5、25、50、100、200μg/kg基质匹配标准工作液，涡旋混匀，加入乙腈饱和的正己烷0.5mL，涡旋混匀，于4℃下15000r/min离心10min，取下层液过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。
牛奶准确称取5.00g±0.05g空白牛奶于5mL离心管中，按“7.1”与“7.2”方法处理，洗脱吹干。取0.3%甲酸-乙腈配制的5、10、25、50、100、250、500、100μg/L标准工作液1mL溶解残渣，制备出浓度为1、2、5、10、20、50、100、200μg/kg基质匹配标准工作液，涡旋混匀，加入乙腈饱和的正己烷0.5mL，涡旋混匀，于4℃下15000r/min离心10min，取下层液过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。
色谱柱：C18（150mm×2.1mm，粒径3.5μm），或相当者；
柱温：35℃；
进样量：5mL；
流动相：乙腈+0.1%甲酸-水；梯度洗脱程序见表1。
表1液相色谱梯度洗脱条件
（min）
0.1%甲酸-水
（%）
乙腈
95
0.2
0.5
3.0
3.1
6.0
扫描方式：负离子扫描；
离子源温度：650℃；
喷雾电压（ionsprayvoltage,IS）：-3500V；
雾化气电压（nebulizergas,GS1）：60psi
辅助气流速（ionsourcegas2,GS2）：60L/min
气帘气压力（curtaingas,CUR）：15psi
碰撞室压力（CAD）：8psi；
定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见表2。
表2羟氯扎胺定性离子对、定量离子对及锥孔电压、碰撞电压的参考值
定量离子对(m/z)
CE
DP
CXP
398＞175.9
-36
-68
-10
398＞201.6
-30
-58
-17
注：其中带*的离子对是用来进行分析的离子对；CE：碰撞能量（CollisionEnergy）；DP：去簇电压（DeclusteringPotential）；CXP：碰撞室射出电压（CollisionCellExitPotertial）。
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差
＞50%
＞20%至50%
＞10%至20%
允许的最大偏差
取试样溶液和基质匹配标准溶液，按外标法，以峰面积定量。基质匹配标准溶液及试样溶液中的羟氯扎胺的峰面积应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，空白添加试样溶液中特征离子质量色谱图见附录A。
除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。
将标准曲线的浓度和对应峰面积进行回归分析，然后按下式计算。
X——供试试料中相应的羟氯扎胺残留量，mg/kg；
A——试样溶液中相应的羟氯扎胺峰面积；
b——标准曲线回归方程中截距；
a——标准曲线回归方程中斜率。
V——溶解残余物所用溶液体积，mL；
m——供试试料质量，g。
8.2单点校准
——试样中羟氯扎胺残留量，μg/kg；
——羟氯扎胺标准工作溶液的浓度，μg/L；
——试样溶液中羟氯扎胺峰面积；
——对照溶液中羟氯扎胺峰面积；
——试样溶液定容体积，mL；
——试样溶液所代表试样的量，g。
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位。
9检测方法灵敏度、准确度和精密度
本方法中羟氯扎胺在牛组织中的检测限均为1μg/kg，定量限均为2.5μg/kg；在牛奶中的检测限为1μg/kg，定量限为2μg/kg。
本方法在牛可食性组织中添加LOQ、1/2MRL、MRL、2MRL四个浓度水平上的回收率为80%～115%。牛奶中添加LOQ、1/2MRL、MRL、2MRL四个浓度水平上的回收率为70%～120%。
本方法批内相对标准偏差≤10%，批间相对标准偏差不大于20%。