土壤脂肪酶(S-LPS)活性试剂盒说明书(可见分光光度法)
测定意义:
LPS又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。
测定原理:
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算LPS活性。
自备仪器和用品:
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯100mL、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体90mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体14mL×1瓶,4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡20min。
试剂三:甲苯100mL×1瓶,4℃保存(自备)。试剂四:液体20mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体10μL×1瓶,10μmol/mL的标准溶液,4℃保存。临用前加入3.168mL甲苯,充分溶解。
样本处理:
建议称取约0.1g土样,加入1mL试剂一进行冰浴匀浆,再用回旋式振荡器振荡提取15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。
S-LPS测定操作:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长到710nm,蒸馏水调零。2、试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。3、在5mLEP管中依次加入下列试剂
试剂名称(μL)
空白管
测定管
蒸馏水
375
样本
125
试剂一
750
试剂二
250
试剂三
2000
标准管
上清液
1200
标准品
试剂四
300
37℃振荡反应5min后,静置5min,取800μL上层液加入1mL玻璃比色皿,于710nm处测定吸光值。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
S-LPS活性计算公式:
活性单位定义:37℃中每克土样每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
S-LPS(μmol/min/g土样)=[C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T