组织学技术脱水透明

脱水:用化学试剂将组织内的水分全部清除(脱水剂)

透明:用一些试剂将组织内的脱水剂全部置换并能与包埋剂相融(透明剂)。透明剂是脱水剂与包埋剂的媒介。

脱水剂不溶于包埋剂如石蜡,需要媒介物置换脱水剂

脱水剂溶于包埋剂则具有透明作用,则不需媒介物(透明剂)

一组织块脱水透明

1纯脱水剂脱水

(1)酒精(alcohol):最常用

脱水能力强,能使组织硬化

但易使组织收缩变脆

脱水从70%酒精开始,切勿直接用高浓度酒精脱水

胚胎组织或较柔软组织块:从更低浓度开始,如10%、35%或50%酒精

3~5毫米厚的组织块,各级酒精小于3~6小时,无水酒精1~2小时(脆化组织)

实质性器官如肝、脾、肾、淋巴结等赠能浸泡太久(易于硬脆)

脂肪组织和疏松结缔组织要长央95%酒精内尽量脱去脂肪和残存的水分

含重铬酸钾固定液固定的组织大多有硬脆现象,在酒精内过久会增加其脆性

无水酒精应保持无水

(2)丙酮(acteone)

脱水能力比酒精强

对组织块收缩较大

主要用于快速脱水或固定兼脱水,1~3小时左右

2脱水兼透明剂脱水和透明

(1)正丁醇(butylalcohol)

微溶于水,水溶解度为8.3%,脱水能力弱

能与水、酒精与石蜡混合。经它脱水的组织块,直接浸蜡包埋

很少引起组织块收缩与变脆,适于制作植物标本。

一般用法:

组织块固定、冲洗→50%酒精→70%酒精→80%酒精→正丁醇12~24小时→浸蜡

其它用法:

组织块从5%酒精脱水→30%酒精→正丁醇-95%酒精-蒸馏水(10:40:50)12~24小时→正丁醇-95%酒精-蒸馏水(20:50:30)12~24小时→正丁醇-95%酒精-蒸馏水(35:50:15)1小时→正丁醇-95%酒精-蒸馏水(55:40:5)1小时→正丁醇-无水酒精(75:25)1小时→正丁醇5~24小时→正丁醇石蜡(1:1)1~3小时→浸蜡包埋

(2)叔丁醇(tert-Butanol)

能与水、酒精混合,溶于石蜡

对组织块无收缩及硬化

多用于特殊要求及精制标本制作

(3)松脂醇(松节油透醇terpineol):

最后一次二氧陆环脱水,加入5~10%二甲苯或氯仿

(4)四氢呋喃(一氧五环、氧杂环戊烷、四亚甲基氧)

四氢呋喃(1.4-环氧丁烷、四甲撑氧、氧杂环戊烷、一氧五环,Tetrahydrofuran,oxolane,THF)

溶于水、乙醇、乙醚、丙酮、苯等多数有机溶剂

(5)二氧陆环(Dioxane)

无色液体,易挥发

能与水、酒精、二甲苯及石蜡等以任何比例混合

既可脱水又能透明

脱水的一直接浸蜡包埋

对组织块收缩少,硬化程度低

但有毒性,性价格较高

如含水,可用无水硫酸铜、无水氯化钙吸收

用过的二氧六环,也可通过无水硫酸铜、无水氯化钙回收

能溶解苦味酸和升汞。用苦味酸、升汞及其混合液固定的组织,脱水至纯二氧六环后浸蜡包埋二氧六环的使用方法:

*组织块固定水洗,经各级酒精至95%酒精,立即转入二氧六环脱水兼透明2~3小时,浸蜡

*组织块固定水洗,直接转入纯二氧六环3~5小时换新温文尔雅两次败二氧六环石蜡等量混合液2小时,再浸蜡包埋

*组织块固定水洗,转入30%酒精,依次转入50%、70%、90%、100%二氧六环液(30%二氧六环:二氧六环30毫升,蒸馏水70毫升)

由Bouin液固定的组织,经30~50%酒精脱水,移入70~90%酒精及无水二氧六环脱水

较柔软及易收缩的组织,水洗,直接入30~100%二氧六环逐级脱水

为使二氧六环处理的组织块能更好浸蜡,最后浸的二氧六环后中,加入5~10%二甲苯或氯仿

3透明

(1)二甲苯(Dimethylbenzene,Xylenes)

易溶于无水酒精,不溶于水,有毒,易挥发

溶于石蜡,易挥发,长期接触,对黏膜有刺激作用

透明能力强,易使组织收缩、变脆。组织块在南田村中不宜久留,小块组织30分钟,较大组织块适当延长,不超过2小时

组织块在二甲苯中呈白色混浊状,表示脱水不彻底

减少组织收缩,可在无水酒精后先经无水酒精二甲苯混合液(2:1,1:1)再入纯二甲苯

保持无水(发浑则含水)

(2)甲苯(甲基苯,Toluene)

能与乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、二硫化碳和冰乙酸混溶,极微溶于水

甲苯12~24小时也不易变脆

可代替二甲苯透明

(3)苯(Benzene,)

难溶于水,易溶于有机溶剂,本身也可作为有机溶剂

对组织收缩小,易挥发,易燃,有毒。

95%酒精与苯、甲苯、二甲苯等量混合液可代替无水酒精

(4)冬青油(邻羟基苯甲酸甲酯,冬绿油,甲基-2-羟基苯甲酸酯,水杨酸甲酯,柳酸甲酯,2-羟基苯甲酸甲酯Oils,wintergreen;Sweetbirchoil;OILOFWINTERGREEN;Analgit;SpicewoodOil;2-Carbomethoxyphenol)

无色油样液体,有特殊气味及甜味

易溶于醇、醚和冰醋酸,难溶于水

浸入慢

组织块脱水至95%酒精→冬青油数小时至数天,最好经无水酒精脱水后再入冬青油

制作骨组织切片时,用冬青油-苯甲酸甲酯(5:3)透明

(5)苯甲酸甲酯(Methylbenzoate)

难溶于水,溶于醚

组织块脱水至95%酒精,直接入苯甲酸甲酯透明12~24小时9经或不经二甲苯透明)

对组织块收缩和硬化极小

能溶解火棉胶,用于火棉胶包埋切片

(6)二氧陆环(1,4-Dioxane)

见脱水(5)二氧济环

(7)氯仿(三氯甲烷)

透明比二甲苯和苯差

溶于醇、醚、苯等,微溶于水,极易挥发,浸蜡时残存的氯仿易于挥发。多用于大块组织透明

用法:

组织经各级酒精脱水后直接转入氯仿;

组织块经酒精脱水后转入氯仿无水酒精混合液(3:1)1小时,经氯仿二次各2小时至组织块下沉至瓶底表示透明完好,转入氯仿石蜡等量混合液(45℃以下)1小时,再浸蜡

先用苯胺油透明,经氯仿二次,每次可缩短5~30分钟,浸蜡迅速完成

氯仿还用于火棉胶石蜡双重包埋中火棉胶的透明,24小时或更长

在快速火棉胶包埋中作凝固剂,利用氯仿蒸汽硬化火棉胶块

(8)香柏油(Cedarwoodoil)粗制品

溶于醇,为酒精脱水后的良好透明剂

对组织收缩及硬化比苯、二甲苯、氯仿小

透明慢。小块组织12小时以上,透明后须经二甲苯或苯洗后才能易于浸蜡

(9)苯胺油(安尼林油,氨基苯anilineoil):

微溶于水,参与醇醚、苯及多种有机溶剂混合,随水蒸汽挥发,应避光密封保存

脱水兼透明剂:

组织块经各级酒精至70%酒精亦能与它混合

一般在酒精中易脆的组织如蛙卵,用苯胺油透明

70%酒精苯胺油(1:1),85%酒精苯胺油(1:2),95%酒精苯胺油(1:2),各2~6小时,纯苯胺油待至全部透明,最后用甲苯洗两次,易于浸蜡

苯胺油用于分色,苯胺酒精

二组织切片、铺片、涂片脱水与透明

各种浓度酒精:逐渐转换组织、切片中的水分

1丙酮:

用于染色后切片的脱水。脱水快,不易褪去切片上的颜色。常用于甲基绿派若宁显示DNA和RNA切片的脱水

95%酒精一-二甲苯:代替无水酒精而不使组织发脆

石炭酸(苯酚,羟基苯carbolicacid)二甲苯:脱水(切片或铺片含水较多)

木馏油(木焦油creosoteoil)二甲苯:脱水(切片或铺片含水较多)

2二甲苯:

用于切片封固前的透明,不会使染色的切片褪色并获得最佳折光率。

树胶的溶剂。

3冬青油:

染色后整体标本和胚胎标本透明。切片染色后,冬青油透明,不加盖玻片封固,临时镜检而不干

THE END
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