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2013.06.26
（第1部分：培养基配制）
广东省药检所对《中国药典》2010版微生物专题培训班的有关问题解答答案。
2010版中国药典培训回答（第2部分：微生物限度）
010版中国药典培训回答（第3部分：无菌检查）
1、供试品传入无菌，对表面进行消毒。用75%无菌酒精浸泡表面是否可行？可用如何方法。（等紫外照射1h酒精喷射，是否可行？注：无缓冲间的情况。从一般区直接进入传递窗）
答：用75%无菌酒精浸泡表面应该可行，但酒精易燃。可用普通消毒剂如新洁尔灭等消毒。
2、无菌实验供试品在传入无菌传递窗前能否泡消毒液？
答：视包装而定。如：玻璃安瓿，可以；西林瓶，不可以。
3、检验针剂时，安瓿表面消毒可否用碘液浸泡作为消毒，如果可以，它会杀死样品本身的微生物吗？
答：我们没有碘液浸泡消毒的经验。就浸泡方式而言，视包装而定，如：玻璃安瓿，可以；西林瓶，不可以。
4、微生物检查样品传递消毒处理，需作验证吗如何确定其消毒效果？
答：验证当然最好，但也应结合常识、经验等，尽量减低工作量。
5、药典要求只要供试品的特性允许优先考虑薄膜过滤法。对于小剂量无抑菌作用的注射剂，是直接接种法好还是薄膜过滤法好？
答：优先考虑薄膜过滤法，可视样品包装情况而定。
6、无菌检查验证，2010年版方法改变，变换了大肠埃希杆菌，请问从前经过验证的无菌检查方法，实施2010年药典时是否必须从新的验证方法进行验证？验证后从能进行无菌检查？
答：应重新验证。
8、无菌制剂的处方与工艺都没有改变，10版药典出版是否还需重新验证？
答：10版用大肠埃希替代铜绿假单胞，应重新验证。
9、05版我们已经做了方法验证，10版还要再做方法验证吗？
答：如前所述。
10、做阳性对照，为什么同是做5批检样，到最后只是两到三批长菌？原因出在哪？滤膜吗？（我们是做抗菌素的产品）
答：原因是多方面的。请考虑方法的耐用性；此外，操作前后是否一致（比如：供试品溶液溶解是否彻底、供试品溶液的浓度是否一致、对滤膜滤筒的湿润、每次过滤对滤筒的荡洗、抽干、抽干是否过久等等）等等都有可能是影响因素。
11、清洁无菌室所用消毒液如何做到无菌拖把、拖桶如何做到无菌？
答：消毒液可采用过滤的方法。无菌拖把、拖桶可采用浸泡、高温灭菌的方法。
13、高压消毒炉的培训一般在哪里有举行？
答：广州：特种设备培训机构锅炉所
14、化妆品微控的容器洗涤一般用什么洗涤较好？
答：表面活性剂
15、贵所日常所用的消毒液是哪些？
答：新洁尔灭、消毒粉、75%酒精、来苏儿。
16、消毒液本来就是用来消毒杀菌的，又怎么会存在消毒液是否无菌这一说法？
答：消毒液不是万能的，对绝大对数菌有效，不排除对有些微生物无效。有些消毒剂质量难保证，如果有效成分浓度过低甚至无，则达不到灭菌效果。
17、能否直接用电磁炉煮培养基（加热）？最佳加热方法是？
答：电磁炉不能加热玻璃瓶。我们所：水浴（100℃），微波炉。18、硫乙醇酸盐流体培养基培养后会有点浑浊（排除是菌生长），是否可以在灭菌之前过滤培养基
答：找出培养基混浊的原因，若是培养基与样品发生作用导致的混浊，灭菌之前过滤培养基也是没用的。硫乙醇酸盐流体培养基含琼脂，如果用滤膜，一般很难过滤；如果用纱布、棉花、滤纸等，则须考虑滤材对不同成分的吸附程度不同，可能造成培养基成分比例的改变。
19、方法验证时：对照加的菌液是最后才加吗？
答：按药典，在最后一次冲洗液中加入。
20、培养基适用性检查无菌性检查中“每批培养基随机取不少于5支（瓶））中”中“每批”指脱水商品培养基的生产批次，还是指制备的批次？
答：指制备批次的培养基。
21、微生物检验用的各种试剂除了化学纯，能否使用分析纯？
答：可以。
22、生物安全柜，净化操作台每年是否需要检定？
答：是的，我所是每年检定一次。并定期检测洁净度，频次自己制订。
23、无菌操作时，对显微镜硬件条件的需求是怎样？
答：显微镜：至少1000X，也就说要有油镜。
24、生产原料药的公司，其微生物检测方法采用限度检查法，请问洁净室的划分中还需要建立“无菌检查室”吗？
答：只要满足药典规定的万级背景下的局部百级即可。
25、阳性接种室，有没有硬性要求在万级区域局部百级区域？
答：无硬性要求。但应使用生物安全柜，并按生物安全柜的要求设置外围空间。
26、阳性操作间的空调系统是否应与微生物限度检查的空调系统完全分开，若未分开，是否可以采取直排的方式？（不利用阳性间的空调回风）
答：应分开。直排不等于分开。
27、微生物限度实验室和阳性对照室的洁净系统要分别独立，如用同一套的HVAC，但都是全排，是否能接受？
28、微生物与无菌洁净系统也一定分别设置吗？
答：有条件最好将微生物限度检查与无菌检查洁净系统分开。
29、洁净区监控中，某些设备不宜采用冲淋法和接触碟法取样，而擦拭法中棉签释放率很低（普通棉签释放率只有20%左右）。请问如何设计采样方法才能真实反映设备表面微生物情况？
答：有些国外生产微生物检验仪器的大公司，有专用的小拭子，可能更有效。
30、用洁净服材质做成袋子来代替牛皮纸的包扎灭菌是否可行？
答：我们所目前采用此法。
32、灵敏度检测如何确定接种菌数量？
答：菌液在接种至灵敏度检测用培养基的同时用微生物限度检查法的平皿法测定每1ml菌液的cfu。
33、如何验证消毒剂消毒效果？
答：目前没有统一的方法，自行设计。
34、消毒剂消毒效果如何验证？如何设定SAL接受标准？
35、验证试验中，若供试品需加入β-内酰胺酶，那么阳性对照管是否应该加入等量β-内酰胺酶？
答：验证试验时，不加，因为对照管是用于比较试验菌生长情况的。检验时的阳性对照则加。
36、全封闭式无菌验证中，用0.9%Nacl溶液溶解后，抽入集菌器中，样品溶液是否要停留几秒钟？让样品与滤膜充分接触或者停留后溶液造成抗生素残角？如何停留几秒钟？应在100ml试停留还是50ml时停留合适？
答：不应停留，应让样品尽快通过，避免抑菌成分被吸附。薄膜过滤法的目的是仅让微生物截留在滤膜上。
37、每张滤膜每次冲洗量一般100ml，总冲洗量不得超过1000ml，若供试品容量较大，总供试品样品量按标准规定超过1000ml，那这种情况应如何看待呢？
答：中国药典未规定供试品溶液的体积，设计检验方法时，兼顾供试品溶液的浓度和体积，尽量采用较小的体积。
38、装消毒剂的容器是否要求灭菌？例如用可灭菌的不锈钢材质，因为塑料的容器不能灭菌问题。
答：应该灭菌
39、配制用水最长可以放置多久？
答：视放置条件，经验证，自己设定。
40、对灭菌效果进行验证，多久进行一次？
答：根据自己工作情况，自己制订。
41、微生物限度检查时所用吸管是否均需计量？
答：无规定。
42、无菌，微生物限度实验，样品与阳性对照可以共用一个培养箱吗？答：有2种意见：其一，条件许可，分开，以免污染；其二，共用一个培养箱，使其在相同条件下培养。我们：分开。
43、在无菌检查项下，供试品检验时，阳性对照是否必须每批都需做？是否供试品无菌试验跟阳性对照必须同步操作？
答：ChP要，同步。
生产企业一次生产80mg/瓶的冻干粉36000瓶，企业取20瓶
做无菌检验，是否应另增加10瓶做阳性试验？（方法：薄膜过滤法，滤膜三分法，一份阳性，另两份置两种不同培养基中。
答：是，总共需30瓶。
培养基灵敏度试验所用的菌种有6种，为什么没有大肠？
答：有专家解释：因铜绿与大肠均为革兰氏阴性杆菌，而铜绿在医院及自然界中更广泛存在，致病性更强。
如果产品经无菌验证后，是以大肠为对照菌时，可行吗？
答：如果验证6种菌均可行，建议按药典阳性对照章节的要求，设定阳性对照菌。如果验证结果样品是抗革兰阴性菌的，则阳性菌应用大肠埃希菌。
灵敏度试验可要加入大肠？
答：否。
薄膜过滤法中，菌悬液的加入，在最后一次的冲洗液中加入小
于100cfu的试验菌，过滤，这个说法用封闭式过滤器（）要如何做？如果做法是加入培养基后，再从管子里加1ml的100cfu的菌，可行吗？
答：在最后一次冲洗液中，经封闭式过滤器顶部的透气孔加入1ml的少于100cfu的菌液，抽干，再加培养基。
48、"全封闭式无菌检验中，每张滤膜每次冲洗量一般为100ml，我们验证的是50ml*3100ml*3，总冲洗量不超1000ml,可行吗？"
答：可行。
49、《中国药典》无菌检查方法验证中“菌种加在最后一次冲洗液中，过滤”，如果某供试品无菌检查方法无需进行冲洗，那么菌悬液应该加在哪合适？
答：药典无规定，可在过滤完样品后直接加菌液，然后加入培养基。
50、"无菌验证后，试验菌数经测定，若加入菌数大于100cfu,该情况如何处理？是否需要判断其试验无效，重新验证"
答：重新验证。
51、南方天气湿度大，易发霉，毛巾或者衣服上可能有黑色的霉点洗不干净，请问有没有好的方法去除霉点？
答：漂白、消毒。
52、粉针注射剂，同一个品种有不同规格的产品，在建立方法学验证时是否每个规格都需要进行验证？
答：理论上，以最大规格建立的方法应适用于其他较小规格。但这样做可能会提高成本，因小规格的冲洗量、灭活剂等用量可能可以更少，难以一概而论。
53、无菌检查方法中阴性对照，每瓶溶剂，稀释液，冲洗液都需要收集，是不是每做一批试验，都需同时操作两台集菌仪？阴性对照能否每一批溶剂，稀释液，冲洗液抽一、两瓶做阴性对照？
答：不一定每做一批试验，都需同时操作两台集菌仪。阴性对照不应该仅仅每一批溶剂，稀释液，冲洗液抽一、两瓶做阴性对照，应尽可能将所用到的每瓶都留少量做阴性。
54、"每一张膜总冲洗量不得超过1000ml,这个总冲洗量包括样品溶液吗？"
答：不包括。
55、无菌性检查，培养基是直接拿去培养，还是按照说明书灭菌处理后再拿去培养？
答：成品培养基直接培养；脱水培养基或自己配制的培养基灭菌后拿去培养。
56、液体硫乙醇酸盐培养基（中检所）极易被氧化，药检所做实验时是将管装量定在多高？
答：我们所用的是全封闭一次性滤筒，装量100ml，高度约6.5cm。57、如果培养过程氧化层高度已超过药典中要求的1/2高度，并发现其中长菌，结果如何判定？若未长菌，结果判定认为无菌是否成立？此类问题应该如何衡量？
答：如果培养过程氧化层高度已超过药典中要求的1/2高度，并发现其中长菌，可判断为不合格；若未长菌，按药典，结果判定认为无菌应不成立；此类问题应该照药典执行，培养后不超过1/2高度。
58、“无菌性检查中每批培养基随机取不少于5支（瓶）”,这句话中的“5支（瓶）”是5支或5瓶，还是5支和5瓶？”
答：或
59、洁净区与阳性实验室空调系统应如何分别设置？送风分离，回风分离，或两者均分离？即2套空调系统？
答：2套系统互不相干。
60、十四烷酸异丙酯若经验证后，不影响阳性菌生长，可否湿热灭菌？答：湿热灭菌的水蒸气可能会影响十四烷酸异丙酯的性能，建议按药典。
61、冲洗液的滤清，加入不浑浊，是否可不用过滤？
答：可
62、无菌检查时，阳性对照的接种与培养是否也必须和供试品培养同一天进行？
答：应同步操作。
63、使用的消毒剂应无菌，比如购买的新洁而灭要用无菌的4.5微米滤膜过滤再用吗？
答：如用在关键地方，建议过滤。
64、产品稳定性考察，有无菌检查项目，请问留样产品的无菌检查的数量和常规检查的数量要一样吗？如果是，留样量就会相当大，有的药品比较贵重，这样会造成企业较大的损失.
答：无菌检查的数量和常规检查的数量应一样。按药典稳定性试验指导原则附表，该做就应做，但若情况特殊，或许可减低检验频次，但如此一来，可能一些药品注册审评专家或GMP检查员会有不同意见。稳定性试验的无菌检查很大程度是在考察包装。
65、做培养基适用性与方法验证时，若加菌量为100~120cfu＞100cfu，是否需要重新做验证？
答：要。
66、药典只是提供了化药中干扰物的中和剂方法，能否提供一些中成药的除菌方法？
答：无
67、洁净区污染霉菌怎么处理？
答：可尝试甲醛熏蒸
68、洁净区有霉菌生长，要怎么净化环境？注：我们用75%的乙醇抹洗全部空间，然后开臭氧半小时，但是检测后还是发现有霉菌，老师是不是还有更好的方法？
答：未考察，我们使用期一般不超过一周。
70、酒精棉怎样取样进行微生物检查？
答：请自行设计
71、酒精棉有规定超过多少的菌数不能再用？
72、广州环凯有冻干菌粉卖，是否可以在其单位购买？
答：建议向中检所购买。
73、请问药典说“当产品的组分或原检验条件发生改变时，应对检验方法重新验证”，如何理解“原检验条件发生改变”
答：比如，将冲洗量500ml改为300ml，等等。
74、灵敏度检查：改良马丁和硫乙醇酸性流体培养基都要做6种菌株吗？
答：硫乙醇：4种，为金葡、铜绿、枯草、生孢；马丁：2种，为百念、黑曲。
75、清洁后的洁具需用微生物纯化水洗涤？
答：清洁后的洁具需用纯化水洗涤。
76、无菌：阳性对照培养48~72小时就可以灭活了吗？不用跟供试品培养14天吗？
答：是的
77、供试品处理时，需加入适量的聚山梨酯80，聚山梨酯80需要灭菌吗？方法如何？
答：需灭菌，可采用湿热灭菌。
78、含0.05%（v∕v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液如何配制？答：可直接用聚山梨酯80配制，或先配制聚山梨酯80的浓溶液，然后取浓溶液作进一步配制。
79、如何证明“表面活性剂，中和剂或灭活剂使用应有效性及对微生物无毒性”？
答：自行设计
80、抗生素效价室放在洁净室里面是否合适？
答：应与洁净区分开。
81、最后灭菌产品的原辅料是否需要做微生物限度检查？
答；一般情况应做。
82、薄膜过滤法若试验冲洗量1000ml阳性用量多少？
答：也1000ml。
83、无菌用培养基是否不用对照培养基？
答：是
84、无菌检查法从开始制样到加入培养基也不能超过1h吗？
答：一般情况应该如此。
85、薄膜过滤法滤膜若＞50mm，冲洗量是否需调整？如何调整？
答：建议按药典规定，选用直径约50mm的滤膜。如要调整，即重新验证。
86、阳性菌接种使用生物安全柜后，那接种室的空调系统能否与微生物限度检查室共用？如果现在共用了，有什么方法能避免交叉污染？
答：请掌握原则，净化系统应分开。
87、怎么消毒在试验中要用的无菌温度计？
答：我们没有这方面的经验。
88、发酵分装容器要预先灭菌，请问分装时是否有要求在无菌的环境下进行，分装后再进行灭菌，程序是否复杂化？
答：我们不明白该问题，一般而言，既然容器要预先灭菌，分装也应无菌操作。
89、无菌检查用的菌悬液是否必须用新鲜培养制备？用于制备菌悬液的培养物可否在25℃条件下连续使用一周？
答：请按药典10版要求，否则，自己验证。
90、饮用水检测中GB标准中“总大肠菌群检出应进一步检验大肠埃希菌或耐热大肠菌群”，是否可以只做大肠埃希菌？
答：我们目前尚未开展水质检验。
2010版中国药典培训回答（第4部分：菌种传代与特定菌检测）
1.以第五代菌做阳性对照，实验过程中的接种按药典应该也算传代，那是否算是第六代菌呢？答：依然算第五代(接种的菌株算第5代，培养后算第6代)
答：其实验结果是算哪一代菌的？答：见上题
2.药典规定只能传代五次，此次实验结果是否有效？
答：有效
4.菌种发放单应包括什么信息？
5.如何检查黑曲霉孢子悬浮液孢子含量为50~100个／ml。铜绿假单胞菌单菌如果用甘油冷冻管，也是低温，是否也会影响它的活性？应如何保存？
答：可用玫瑰红钠琼脂培养基或改良马丁琼脂来确定黑曲霉孢子悬浮液。铜绿假单胞菌应使用最终甘油浓度为20%的甘油冻存管保存，保存在-30℃或更低温度，则可保持其活性。若是斜面或营养肉汤，建议室温保存。
6.工作菌株，25℃下可连续使用一周，这里的工作菌株是指原液还是制备好的菌悬液。为何工作菌株不低温存放，而是25℃？
答：首先要说明，所有的操作应按药典要求来操作，这里的工作菌株指原液，工作菌株建议在2-8℃保存，但要注意的是，铜绿假单胞菌的工作菌液不能低温保存，低温会损伤其活性。由于笔误，写成了25℃，请更正为2-8℃。
7.简单方便的厌氧培养方案？
答：硫乙醇酸盐培养基；固体培养基的话可考虑使用一次性厌氧袋。
8.甘油冻存管一定要－30℃吗？0℃以下不可以吗？
答：详见《中国药品检验标准操作规范》2010版341页。我们的甘油冻存管保存在-30℃。
8.三糖铁斜面穿刺会断层，这是为什么？
答：产气菌产气使培养基断层，或培养基本身质量问题。
9.第一代菌种可不可以作为工作菌株使用？
答：我们不这样使用，因为担心菌株没有充分复壮，生化特性可能不典型。
10.制备菌悬液时，要使其在10~100cfu中，应多注意的地方是什么？
11.铜绿假单胞菌不宜放冰箱内保管，但其营养肉汤液能否放在冰箱保管？
答：详见《中国药品检验标准操作规范》2010版341页。能否放冰箱可自行验证。
12.黑曲霉的存放期如何验证？
答：通过孢子悬液计数和菌落特征，进行验证。
13.标准储备菌株必须进行纯度和特性确认？还是在必要情况下才做？
答：详见《中国药品检验标准操作规范》2010版341页，我们在制备标准贮备菌液前进行纯度和特性确认，最好在使用前再进行纯度和特性确认。
14.铜绿假单胞菌贮存温度应为多少度？
答：一般在10℃以上，甘油冻存管至少在-30℃以下。
15.制备工作菌种进行菌种保藏中的保存期是否要进行验证？
答：可参考2010年版《中国药典》标准操作规程（SOP），应进行验证。
16.验证用菌株可否使用ATCC？
答：如果按中国药典检验的，用CMCC
17.菌种鉴定该如何做？
答：请参考讲义内容。
18.药典菌悬液制备是要菌种的新鲜培养物接种至培养基中，培养18-24h再进行稀释，制备菌悬液，可否直接使用未过期工作菌种进行稀释来制备菌悬液？
答：按药典要求不行，如要使用，请自己验证。。
19.斜面低温保藏法：每一次的菌种传代都需要做菌种纯度鉴定吗？
答：建议制备斜面保存管前进行菌种纯度鉴定，以后的每次传代视具体情况而定。
20.如何比较快速有效判断菌液的浓度？除了可以用“比浊仪”参考，还有什么方法？
答：比浊仪只做辅助参考，还需通过平板计数来最后确认菌液的浓度。
21.曾于中检所中购买过黑曲霉的0代包子悬液，说明书上表示应于-20℃中保存，可保存一年，对于此保存唯独及效期，药企可否同法保存自制的黑曲霉孢子悬液？是否要验证？如何验证？
22.菌种纯度确认，怎么确认，需确认哪些项目？
23.细菌菌种接入营养肉汤中保存一周，这需要验证吗？、
答：建议做验证。
24.菌种斜面最多能保存菌几代？经冰箱保存的斜面菌种是否需复苏二次才能进行菌悬液配制？
答：药典规定，菌种传代不应超过5代。冰箱保存的斜面菌种复苏后即可使用。
26.哥伦比亚血琼脂平皿生长的菌落，对氧化酶试验是否有影响？菌悬液的制备过程中，接种菌种新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，这个新鲜培养物怎么理解，冰箱保存斜面菌种是新鲜培养物吗？
27.菌种鉴定时，一定要根据药典的所有试验做完，才能确认是某种菌株吗？可否省略一些试验？
答：请按药典规定来进行菌种鉴定，具体情况可能还要增加适宜的鉴定试验。
28.工作菌株可在25℃连续使用一周，是指同一代同一管的菌株吗？还是说同一代不同管的菌株？
答：笔误更正，同上一题。
29.若没有比浊仪，用什么方法来确认50~100cfu/ml？特别是孢子？
答：孢子计数建议通过平板计数的方法来确定浓度。
30.工作菌种是否可以使用后再次冷藏使用（斜面保藏法）？
答：请自行掌握。
31.大肠埃希菌镜检时，有时固定好的菌在染色过程中脱落，请问是什么原因引起这种情况？
答：首先，洗干净拨片，挑菌注意不要太多，待菌固定好后再进行染色。
32.生孢梭菌，菌落培养计数时一定要在厌氧条件下进行吗？
33.菌悬液怎样在24h内确定其菌落数？请讲解细菌和真菌的方法.
答：平板计数方法。
34.生孢梭菌培养时，怎样做才能使其在厌氧中培养？
答：详见2010版药典
35.菌种的纯度鉴定包括哪些内容？如果是跟省药检所买的3代菌是否就不用做纯度或确认试验？
答：省所现在销售的是第二代的甘油冷冻管，严格来说，请做纯度确认。
36.为什么有时候细菌管会长真菌，而真菌管也会长细菌。
答：原因可能是多方面的，某些细菌适宜在真菌培养基上生长，而某些真菌也能在细菌培养基上生长。比如2010版药典无菌检查法，两种培养基的使用范围已删去，已不是绝对的细菌培养基或真菌培养基。
37.在做方法验证时，黑曲霉菌浓度大于20cfu/皿时，培养5天后菌落蔓延扩散，无法各个区分，如何在药典要求的50~100cfu和实际操作结果中找到平衡？因为菌浓对回收率及操作RSD%影响很多.
答：培养48-72h后，菌落刚形成时，及时点计并做记号，然后每天观察有无新的菌落长出并计数。
39.有时候在玫瑰红钠琼脂或营养琼脂平板上生长有酵母菌，在酵母菌生长的位置底部产生了一个气泡状的圆形，把底部的琼脂都贡起来了，又或者表面没有任何菌落，而琼脂被贡起来，请问这种圆形气泡是菌吗？在计数时是否也把它算入酵母菌？
答：建议挑取气泡内含物接种至改良马丁琼脂培养基中，若能生长，且为酵母菌的菌落形态，应该可以将其算入酵母菌。
40.大肠生化实验中的靛基质试验（I）项结果为“”或者“-”均不影响最终结果的判断，请问该项的意义何在？是否可以取消？
答：反应为，为典型大肠埃希氏菌，-为非典型大肠埃希菌。关系到最终判断，都是必须的实验，不可取消。
41.生化检查用的鉴定盒是否需要跟培养基一样做适用性检查？如果需要做，应该如何进行？
答：用阳性菌做一次，实验结果相符即可。
42.铜绿假单胞菌用什么方法保存及更活处理方法？
答：建议采用甘油冻存管（终浓度为20%的甘油冻存管），-30℃（或更低温度）保存。
答：做标准储备菌株之前务必要进行鉴定，其它根据实际情况：如污染、活性下降、储存条件发上改变等。
46.革兰氏染色前，菌落是否要先纯化（接到营养琼脂斜面上）还是直接从选择性培养基上挑起菌落直接染色？
答：要纯化，从选择性培养基挑取单个菌落，最好先接到营养琼脂斜面后，再进行染色。
48.菌种鉴定一定要做到生化鉴定吗？
答：要。可以选择传统的生化试验鉴定，也可选择鉴定仪或鉴定试剂条。请视自身情况而定。
49.是否可按10版药典中抑制控制菌检验判定方法进行？比如金葡菌做甘露醇平板分离，革兰染色，血浆凝固酶为阳性就可以了。
答：金葡这样做可以。其他菌株视具体情况而选择适宜的鉴定试验。
50.请介绍一下，有什么简便的方法灭菌甘油？
答：高压湿热灭菌法
51.黑曲霉孢子悬液贮存期验证怎么做。‘
答：请参考前面该问题的答复。
52.铜绿假单胞菌琼脂斜面变红，是否会造成菌种变异？如何避免该情况出现？（本菌株于25℃保存）
答：出现这样的情况建议对菌种纯度进行鉴定。实验操作请注意防止污染。
53.铜绿假单胞菌菌悬液是否也可在2~8℃保存，24小时内使用？
答：不建议，请自己验证。
54.是否一定要使用CMCC的菌株吗？
答：药典是这样规定的。
55.假如使用ATCC的菌株代替CMCC的可以吗？
答：请按药典规定来进行实验，若是药品检验，请用CMCC菌株。
56.可以用液氮保藏甘油冷冻管吗？可以的话应该怎么操作？
答：可以。具体操作不清楚。我们没有液氮保存罐。
57.贵所有开展支原体检查法这个实验吗？
答：没有
58.制备菌悬液的时候，培养物用的营养肉汤用量是多少？
答：没有具体规定，请自行制定。
59.制备菌悬液的时候怎样保证他是50cfu呢？具体说一下操作方法
答：自行摸索一套方法，固定下来，以后就按该方法做就可以了。
答：参考上一题。
61.20%甘油v∕v是用水还是用相应培养基做稀释？
答：用相应的培养基。
62.验证或做培养基的适用性检查时，若实际操作制得的菌悬液，经测定计数后不在规定的范围内，如＞100cfu，是否应判本次实验无效，应重试？若试菌，真菌生长较慢，不能短期内预算菌数，如何解决？
答：第一个问题，请重试。第二个问题，请注意积累平时实验经验，标准化操作，慢慢摸索稀释的倍数。
63.有时候酵母菌在玫瑰红钠平板上不易观察，是否可用孟加拉琼脂培养基代替来作培养？
答：药品检验请严格按药典规定，若是平时科研，应该可以用孟加拉红琼脂培养基代替。
64.菌种的每一次传代（如3代→4代→5代）都必须做菌种鉴定实验吗？
答：视具体情况而定。
65.如何控制菌液的浓度为50～100cfu/ml？
答：见前面问题的回复。
66.菌种的传代，营养肉汤或改良马丁0.5ml～0.8ml复苏冻干菌粉→直接涂布于营养琼脂培养基或改良马丁琼脂培养箱→是第一代还是第二代？
答：冻干菌粉为第0代，若冻干菌粉未经过培养，直接涂布到培养基上，为第1代。
67.请教一个有关微生物限度检查的问题，在制备10～100cfu菌液时除了你说的比浊法，比较普遍的就是平板计数法，而其中用到的六种试验菌，细菌用营养琼脂计数，霉菌用玫瑰红钠琼脂平板计数，其它四种菌应用何种培养基计数？
答：不知道此处所说的其他4种指的是什么菌。
68.只用平板计数，结果准确吗？还有没有其他方法制备10～100cfu菌悬液？答：这是一个很好的课题，若感兴趣，你们可以好好研究一下。
69.大肠埃希菌检查中，MUG培养基配制后显荧光是什么原因？
答：有可能试管玻璃材质自发荧光，也可能清洗不干净，或培养基本身质量，比如有无发生污染等。
70.请问可用何种培养基或手段鉴定枯草芽孢杆菌？eg：大肠埃希菌用EMB，金黄色葡萄球菌用甘露醇
答：目前尚未有合适的选择性培养来鉴定枯草芽孢杆菌，可选用API或细菌鉴定仪等手段来鉴定。
71.请问：细菌鉴定仪有哪些用途？能够鉴定沙门菌属下的各种沙门菌么？怎样应用？
答：如有需要，可联系梅里埃的技术支持人员：13503006367霍工。他会详细解答你想问的问题。
答：药典规定在验证过的期限内使用。
73菌种的保藏可否用液体石蜡保藏？与甘油冷冻保藏有何区别？
答：药典未记载液体石蜡保藏法，部分参考书记载斜面保藏法或半固定保藏法可加灭菌石蜡覆盖。
2010版中国药典培训回答（第5部分：培养基抑制力）
1．是否只是添加了抑菌剂的注射剂才需要做抑菌效力检查？没有添加的就不需要了，是吗？
抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。要求具有抗菌活性的制剂（参见制剂通则），不管是添加的抑菌剂，还是药物本身具有抗菌活性，在药物研发阶段，均应确认其抗菌效力
2．抑菌效力实验中“菌数测定方法需经验证”是指示品种方法验证时的方法还是需重新做验证？
抑菌试验所加的菌与品种微生物限度检查法验证时所用的菌有所不同，这里的“菌数测定方法需经验证”，是指样品对试验时所加进的菌，在经样品作用后的剩余的菌数。与品种的微生物限度检查法的验证不同，所以必须重新验证。
3．培养基抑制能力检查接菌量不少于10cfu，有无上限要求？若无，直接加菌的原液是否可以？
没有上限要求。理论上可以。
4．对日化产品作细菌/真菌防腐挑战，采用单一菌种10-6细菌浓度，2~3种真菌10-5进行挑战是否合理？
根据产品的性能，功效以及所含防腐剂的最小抑菌浓度确定。
5．目前我国化妆品防腐挑战与美国CTFA的方法区别在哪里？哪一种方法更为严格？
CTFA的方法初始的霉菌和细菌的接种量分别为10000cfu/g（ml）和1000000cfu/g（ml）（CFU为菌落单位），要求在第7天时霉菌降低90%，细菌降低99.9%，并且在28天内菌数持续下降。
国内参照CTFA加菌防腐挑战性试验，初始接种细菌量1000000cfu/g（mL）
（1）第28天时，样品中含细菌或霉菌＞1000cfu/g（mL）该样品不能通过微生物攻击的挑战试验，表明样品的防腐体系不能有效地志到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。
（2）第28天时，样品中含细菌或霉菌在100cfu/g-1000cfu/g（mL），该样品有条件地通过挑战试验，即当产品中蛋白质或其他动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防霉体系可以使用，否则不能。
（3）第28天时，样品中含细菌或霉菌在10cfu/g-100cfu/g（mL），表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。
（4）从第7天起，样品中的细菌或霉菌＜10cfu/g（mL），说明该样品的防腐体系对微生物有特强的抑杀作用，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时很不容易被微生物污染。
6．对于密封性较好的产品，如喷雾剂瓶装，用何种微生物检测方法更能较客观地模拟实际使用过程中微生物污染的风险？