中国和美国的实验室也许能够找到几乎一样的SPF小鼠,却没人敢保证可以在上海和纽约的宠物店买到同样的“脏鼠”?似乎干净的小鼠都是一致的,而污染的小鼠却各有各的疾病。试想如果将这些“脏鼠”作为模式生物,不稳定的性状和难以重复的实验数据的定会令人头疼。因此稳定的---SPF小鼠对于科研筒子们来说至关重要。
SPF级动物房系统
为了保证小鼠的健康和疾病预防,一般外来小鼠必须经过隔离和净化才能进入如上图所示的SPF级动物房内生活。原来小鼠过上养尊处优的生活也是蛮不容易的呢!
隔离和净化目的:疾病防疫,防止鼠群感染
作为实验动物,实验前必须要确定健康无病,一般国内外最广泛使用的即SPF级,指体内无特定的微生物和寄生虫存在的动物,实际上在指无传染病的健康动物。为了避免实验小鼠群体被感染疾病,保持鼠群的健康,必须对外来小鼠做好疾病预防工作。
1、什么是隔离?
将进出境或国内调运的有关动物在检疫机关指定的场所内,于隔离条件下进行饲养,并在其生长期间进行检验、检测和处理的一项措施,通过隔离检疫可以避免或减少前期微生物风险预评中的漏检问题,更为有效的控制有害生物的输入或输出。
隔离环境:以隔离器为主体及其它附属装置组成的饲养系统,是独立通风饲养系统、进入的全新风洁净度达100级,无菌并维持正压状态,一切物品都要严格灭菌后经传递窗送入,操作时,工作人员只能通过隔离器上的橡胶手套来进行饲养或实验。
隔离器系统
隔离的步骤:
按规定,凡进口小鼠,必须在隔离室进行检疫观察饲养1个月,隔离结束后,根据实验需求继续国内配送小鼠或转入净化、代繁部门。
隔离分为两种:
①输入隔离:进口小鼠
②输出隔离:出口小鼠
小鼠进入隔离器隔离,一个月内,按照出入境及外方检疫要求安排微生物检测,出具检测报告,以备出口单证使用
2、什么是净化?
针对于外来小鼠需要进入无菌动物房,由于各种原因如接触到外界环境,小鼠可能被病原体感染,为了保证小鼠健康,干净净地顺利进入动物房,必须经过净化这一步。如下:
净化目前的技术主要是:体外受精--胚胎移植(IVF-ET)技术
体外受精(InVitroFertilization,IVF)和胚胎移植(EmbryoTransfer,ET)
IVF-ET技术基本原理:小鼠自身虽然可能被感染,但是小鼠的精子或卵细胞在体内是干净无菌,借用体外受精这项辅助生殖技术,将雄性小鼠精子和雌鼠的卵细胞交配得到受精卵后,再“借腹生子”移植到代孕小鼠,得到您需要更多的SPF级小鼠。
随着基因修饰的小鼠大量涌现,我们却经常面临着小鼠数目不够,如从国外代购的小鼠只有4-5只,或者友情赠送2只转基因小鼠,这样的数量很多时候无法满足我们实验的需求,IVF技术既可以满足小鼠净化,又可以获得更多转基因小鼠。
下面我们以这类基因修饰的小鼠为例,假设只提供雄鼠为例,介绍净化步骤:
注意,净化基因修饰小鼠有几种情况:
①如果提供的是雄性小鼠,一般2-3只,一般得到的是杂合子,周期:2-3个月,
如果还需要得到纯合子,周期更长,大概5-6个月
②如果提供雄性(2-3只)和雌性小鼠(10只以上),获得纯合子,周期:2-3个月
体外受精技术优点:
目前小鼠体外受精、胚胎移植技术已经是相当成熟,有时只需要一只雄鼠,超排技术获得大量的卵后,就能进行体外受精和胚胎移植,既可节省动物,也可加速生物净化节奏。
特别是针对基因编辑小鼠:大多数的转基因、敲除或者单基因突变的品系多半呈现生育和哺育幼仔能力低下,IVF-ET技术既可达到净化目的,又加速种群的繁殖。
鉴于此,您完全不用再担忧您的小鼠不够干净或者数目不够,只要经过了隔离或者净化,您的小鼠就有资格进入动物房进行试验了,就不怕得不到可靠的实验数据了。