北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心
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目前，检测抗病毒类药物残留的常用方法有高效液相色谱法、气相色谱法和液相色谱-串联质谱法等。其中，气相色谱法需要对目标物进行衍生化处理，操作过程相对繁琐、易引入杂质、重复性相对较差；由于大部分抗病毒类药物无较强的紫外和荧光吸收，故在高效液相色谱法检测的前处理过程中也需要进行衍生化操作，不利于多残留分析，方法烦琐、干扰较多；液相色谱-串联质谱具有较强的定量与定性分析能力，已成为兽药残留检测的首选方法。然而已报道应用液相色谱-串联质谱技术对抗病毒类药物的检测大多采用传统离线固相萃取的净化方式，或缺乏样品净化步骤。动物源性食品基质较为复杂，不经净化步骤容易对目标物造成干扰，对仪器造成污染；离线固相萃取的净化方式操作复杂、用时久且试剂消耗量大。
本研究采用在线固相萃取技术将样品前处理与仪器分析实现在线联用，提高样品分析的自动化程度，简化前处理程序，提高检测效率，减少传统离线固相萃取中产生的人为误差。目前，鲜见在线固相萃取技术应用于鸡肉与鸡蛋中多种抗病毒类药物检测的报道，本研究采用SparkHolland公司的全自动在线固相萃取-液相色谱系统，应用串联质谱法结合同位素内标校正，方法简便快速、灵敏度高、稳定性好，适用于鸡肉和鸡蛋中5种抗病毒类违禁药物的批量检测。
Symbiosis（Pico）在线固相萃取-液相色谱系统荷兰SparkHolland公司；TripleQuad6500三重四极杆串联质谱仪美国SCIEX公司；3K15高速冷冻离心机德国Sigma公司；ElmasonicP300H超声波清洗仪德国Elma公司；MS3-旋涡混合器德国IKA公司。
称取5.00g搅碎的鸡肉和鸡蛋样品，置于50mL聚丙烯离心管中，加入100μL内标混合中间溶液和10mL1.0%甲酸-乙腈溶液，涡旋混合1min，超声提取20min，9500r/min离心5min，上清液过0.22μm聚醚砜微孔滤膜，待测。
MCX在线固相萃取柱（10mm×1mm）；色谱分析柱：XBridgeC18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相A为0.1%甲酸溶液；流动相B为乙腈；柱温40℃，进样量50μL；经过在线固相萃取净化的样品直接注入色谱分析柱进行色谱分离。色谱分离程序见表1。
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根据《关于2023年部分节假日安排的通知》：BNCC将于2023年4月29日至5月3日放假调休，共5天。4月23日（星期日）、5月6日（星期六）上班。
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