动物实验失败是很多科研小伙伴的一大痛点,实验不易,使出千方百计,即使头发浓密,也要且行且珍惜。
Hello,大家好,我叫小白,是一只平平无奇的实验室小白鼠,我有好多兄弟姐妹,小黑(黑鼠)、小灰(褐鼠)、小肉(裸鼠),还有几位有着洋气外文名的族人,NOG、NCG/NOG/NSG,看了下面这个图,相信一定分得清了。
卓越的天资让我们家族成为少数模式生物之一。今日我们就是要澄清一些误会,列了几宗罪状,希望主人们引以为戒。
■第一宗罪:给药体积不是你想给多少就给多少
小白:以腹腔给药为例,建议的最佳体积在5mL-10mL/kg,算下来100-200μL左右(PS:敢情您打1mL是为了少喂点水么?),很多时候,这些液体里还有很大比例的DMSO等毒性溶剂,是药三分毒,况且它还只是个和(huo)药的。
萌Cece建议:小鼠单次腹腔给药最佳体积5mL-10mL/kg,在溶解度允许情况下适当减少给药体积,用DMSO配制的母液时,对于正常小鼠或大鼠,建议DMSO的终浓度不要大于10%;对于裸鼠或体弱小鼠或大鼠,建议DMSO的终浓度尽量不要超过2%;对于正常小鼠,如果给药频率超过一天三次,建议DMSO的终浓度尽量不要超过5%。也建议把动物的周龄/月龄考虑在内,酌情调整。
■第二宗罪:有明显肉眼可见的颗粒进行腹腔给药小白:主人对小伙伴的身体进行了“深入”地探索后发现,肠道附近有多处“蛋花”样的沉积物,或固体颗粒。
萌Cece建议:优先建议选择能溶解澄清的方案,当然确实有一些产品不溶于水,但还是会用生理盐水/PBS溶解成混悬状态或沉淀给药的报道,这种情况要慎重,一方面可借助研钵或超声的方式将固体粉末研磨/超声成尽可能的小颗粒,给药体积也要尽可能小,调整合理的给药频次和剂量,强烈建议做预实验。
■第三宗罪:连续多天用同一管稀释液给药
小白:曾经有位主人,用玉米油给我的小伙伴进行腹腔给药,我眼见那管玉米油溶好的药物都搁好多天了,似乎还有些细小的不明物,小伙伴没扛过一周就去了。主人说小伙伴是因为感染死的,还说文献里都是骗人的。
萌Cece建议:玉米油、橄榄油、花生油和矿物油比较容易受污染,有研究论证,长期腹腔给药会导致动物腹膜炎症,其中花生油和矿物油引起较严重的腹膜炎症,玉米油和橄榄油较轻(减少巨噬细胞),一方面,建议分装密封保存,新鲜配置,另一方面优先采用灌胃的给药方式,如需腹腔注射,参照我们官网的建议,周期、给药频次、单次给药体积都需谨慎设置。详情可参考MCE官网的信息。
■第四宗罪:每天给药多次,有机溶剂总比例高
小白:腹腔给药用5%DMSO配置,就打100μL,咋就快瘫痪了呢,主人很困惑。本小白也很困惑,主人,您一天打6次咋不说?
萌Cece建议:我们以雨蛙素(Ceruletide)这个产品为例吧。雨蛙素用于急性胰腺炎模型是需要隔一小时给一次药,一天给药5-7次,如果用DMSO配置,需要将DMSO终浓度降到很低很低,重要的是,雨蛙素本身水溶性非常好,这种情况首先建议用生理盐水/PBS现配给药的。友情提醒,遇到雨蛙素这种产品,以及联合用药的情况,要按照比例和频次及时、灵活调整给药溶剂。
■第五宗罪:用药剂量太高
小白:主人用高出肿瘤模型用药的剂量直接用于关节炎模型。
萌Cece建议:优先参考文献中同类动物模型的剂量信息,如没有,建议多做几组剂量做比较。
■第六宗罪:过于粗暴
小白:肌注打穿腿,灌胃戳破食管,腹腔戳进内脏。害,天冷时给药前加热一下吧。
最后,鼠固有一死,或重于泰山,或轻于鸿毛,望主人们善待我们。
——自你们温柔可爱的,善解人意的,
具有奉献精神且无怨无悔的小白鼠
参考文献
1.PatriciaVTurner,etal.AdministrationofSubstancestoLaboratoryAnimals:RoutesofAdministrationandFactorstoConsider.JAmAssoc
LabAnimSci.2011Sep;50(5):600-13.
3.HaizhongHuo,etal.ErastinDisruptsMitochondrialPermeabilityTransitionPore(mPTP)andInducesApoptoticDeathofColorectalCancerCells.PLoSOne.2016;11(5):e0154605.
4.AntonioBruni,etal.Ferroptosis-inducingagentscompromiseinvitrohumanisletviabilityandfunction.CellDeathDis.2018May22;9(6):595.
5.ElisendaAlsina-Sanchis,etal.IntraperitonealOilApplicationCausesLocalInflammationwithDepletionofResidentPeritonealMacrophages.MolCancerRes.2021Feb;19(2):288-300.
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