摘要：从句容市某规模化养鸡场采集京红一号蛋鸡的血清样品，检测不同时期的禽流感H5N1Re-11、Re-12和H7N9H7-Re2母源抗体水平和抗体消长规律，确定禽流感三价灭活疫苗（H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9Re-2株）的首次免疫在15～21日龄、二免在45～50日龄、三免在105～110日龄。本试验通过免疫前后抗体的测定帮助鸡场制定科学免疫程序，并且通过不同厂家疫苗的试验选择较为合适的疫苗，为预防蛋鸡高致病性禽流感疫病提供科学依据。
关键词：禽流感；疫苗；免疫；抗体；监测
禽流感（AvianInfluenza，AI），主要是由正黏病毒科的A型流感病毒所引起的传染病，流行范围广，传播速度快，病死率高，亚型多，变异快，其中H5和H7亚型对养禽业和人类身体健康危害严重，被世界动物卫生组织（OIE）列入A类动物疫病，我国列为一类动物传染病。2017年发生人感染禽流感事件，危害到人类公共卫生。近几年全国多地有禽流感疫情发生，防控形势严峻。2017年以来H7N9流感变异毒株给我国家禽养殖业带来了严重的影响和经济损失。国内外禽流感防控实践表明，疫苗免疫是防治禽流感的关键措施之一。为探索本地禽流感疫苗免疫的最佳免疫程序，筛选免疫质量较好的禽流感疫苗，笔者做了以下试验。
一、材料与方法
1.1材料
1.1.1检测试剂禽流感H5N1Re-11、H5N1Re-12抗原均由青岛易邦生物工程有限公司提供，批号为190066100、190066300，H7N9H7-Re2抗原由哈尔滨维科生物技术有限公司提供，批号为2019007。
1.1.2疫苗3个不同厂家的禽流感油乳剂灭活苗见表1。
1.1.3试验动物试验动物是由句容市某规模化养鸡场提供的京红一号鸡苗200只。
1.2方法
1）参照《高致病性禽流感诊断技术》GB/T18936-2003标准，通过血凝（HA）和血凝抑制试验（HI）的方法检测H5、H7亚型抗体。以完全抑制四单位（4HAU）抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。HI效价≥4log2个滴度判断为合格，群体合格率达70%以上达标。
2）根据试验目的，将试验鸡随机分为A、B、C、D四组，每组50只，在同等条件下饲养。雏鸡分别于1、7、14、21日龄采血，监测其母源抗体。15日龄时对A、B、C三组进行3个不同厂家禽流感三价疫苗首次免疫，剂量为0.5mL，D组为空白对照组；45日龄时再将A、B、C三组平均分成A1、A2、B1、B2、C1、C2六组，A1、B1、C1进行二免，疫苗品种和剂量与一免相同，A2、B2、C2不免。分别于第一次免疫后第2周、3周、4周、5周，第二次免疫后第2周、4周、6周、8周翅膀静脉采血，对每组采集20份全血进行分离血清，之后分别进行H5N1Re-11、H5N1Re-12、H7N9Re-2免疫抗体监测。
3）红细胞悬液的制备。采集3只健康成年公鸡的血液，加入盛有抗凝剂的离心管中。用PBS液洗涤血细胞，每次以2,000r/min离心10min，弃去上清液，加入新的PBS液反复冲洗后再离心，重复3次，最后一次用PBS液配成1%的红细泡悬液，备用。
二、结果与分析
2.1母源抗体消长规律
通过对雏鸡母源抗体检测，1日龄雏鸡H5N1Re-11、H5N1Re-12、H7N9Re-2平均效价为7log2个滴度左右；在7日龄降到6log2个滴度左右；在14日龄降到5log2个滴度左右；在21日龄降到4log2个滴度左右。随着日龄的增长，母源抗体逐步下降。根据资料显示抗体效价在4～6log2个滴度才具有保护性。所以将15日龄作为首免日龄。具体结果见表2。
2.2一免后抗体消长规律
首免后2周，H5N1Re-11、H5N1Re-12、H7N9Re-2的禽流感抗体开始上升，首免后4周，不同毒株的抗体平均效价均达到6log2个滴度以上。从3组抗体消长规律来看，产生H5N1Re-11的抗体最好的是A组，高峰时抗体效价最高（A组）和最低（C组）相差1.05log2个滴度；产生抗H5N1Re-12的抗体最好的是A组，高峰时抗体效价最高（A组）和最低（B组）相差0.9log2个滴度；产生抗H7N9Re-2的抗体最好的是A组，高峰时抗体效价最高（A组）和最低（C组）相差1.05log2个滴度。三个毒株的抗体均是A组最高，不同厂家禽流感三价苗产生禽流感抗体效价差异不显著。具体结果见表3～5。
2.3二免后抗体消长规律
二免后2周，不同毒株的抗体平均效价均达到8log2个滴度以上，从3组抗体消长规律来看，产生H5N1Re-11的抗体最好的是A1组，高峰时抗体效价最高（A1组）和最低（C1组）相差1log2个滴度；产生抗H5N1Re-12的抗体最好的是A1组，高峰时抗体效价最高（A1组）和最低（C1组）相差1.05log2个滴度；产生抗H7N9Re-2的抗体最好的是A1组，高峰时抗体效价最高（A1组）和最低（B1组）相差1log2个滴度。三个毒株的抗体均是A组最高，不同厂家禽流感三价苗产生禽流感抗体效价差异不显著。具体结果见表6～8。
三、讨论
重组禽流感H5+H7三价疫苗因不同厂家疫苗抗原含量、生产工艺、免疫佐剂以及保存运输等方面的原因，会导致疫苗质量存在一些差异，从而造成免疫后H5和H7亚型免疫抗体水平略有差异。本试验中，从免疫后产生的抗体来看，3个厂家H5+H7三价灭活苗差异不显著，都符合规定。鸡场可以通过经济成本、疫苗效果、操作便利等方面综合考虑选择适合本场的疫苗。
HI抗体水平的高低是评估禽流感疫苗保护效果的一个重要因素。在实际生产中，常用血清学方法替代免疫攻毒法来衡量疫苗接种后的免疫力。通常认为疫苗免疫后鸡群特异性抗体水平越高，鸡群抵抗相应病毒感染的能力越强。因此，免疫前后持续的抗体检测是当前高致病性禽流感免疫防控工作中的重要环节。另外，由于禽流感病毒血清型较多，变异性较强，不同亚型之间又不能完全保护，有条件的鸡场建立抗体效价监测的同时进行病原学监测，针对当前本地流行的疫情来选择血清型和毒株相同的疫苗，定期开展家禽重大疫病的流行病学调查和疫苗的免疫效果评估，为鸡场选择适合本场的疫苗品种，这样才能更有效地避免禽流感疫病的发生。