本申请要求依据35u.s.c§119(e)于2016年9月27日提交的美国临时专利申请62/400,304的优先权，其内容通过引用方式全部并入本申请。
本发明公开涉及一种组合物，其包含吡喹酮(例如s-吡喹酮或r-吡喹酮)或其类似物和最初从五味子(schisandrachinensis)中分离的提取物或化合物的组合。本文还公开了预防和治疗寄生虫病的方法。本文进一步公开了提高吡喹酮或细胞色素p450酶其他底物的生物稳定性的方法。
背景技术：
血吸虫病是热带地区最普通的寄生虫病之一，主要发现于发展中国家，例如非洲、亚洲、加勒比和南美的一些国家。目前，全世界约2亿人感染了血吸虫病，其中大多数受感染人口生活在缺乏必要医疗基础设施来对抗这种疾病的国家。这些国家由于缺乏财政资源，在实施大规模预防措施以减少血吸虫病传播方面面临更多挑战。
血吸虫(schistosoma)属的血吸虫是血吸虫病的主要原因。一旦传播到宿主，寄生虫可以在血管，肠道和肝脏中产卵并沉积大量的卵。卵在宿主体内中的沉积可导致严重的健康问题，例如病变、纤维化、门静脉血压高和尿血等。此外，血吸虫病可能引起免疫紊乱。
在过去的几十年中，数个化合物被用来治疗血吸虫病。其中，吡喹酮(“pzq”)，作为r和s对映体的外消旋混合物，是这种疾病最流行并且几乎唯一的治疗方法。
尽管使用pzq进行治疗具有无可否认的安全性和有效性，但由于其溶解性差，因此需要极高的剂量才能在靶器官处到达必要的浓度。此外，pzq的苦味在施药过程中经常引起恶心和呕吐。
因此，需要一种更有效的药物或者药物组合物用来治疗血吸虫病或其他寄生虫病。
技术实现要素：
r-pzq，具有r构型的pzq的对映体之一，对血吸虫的治疗效果更高，苦味低于s-pzq。meisteretal.,antimicrobialagentsandchemotherapy,58(9),5466-72(2014)；meyeretal.,plos.negl.trop.dis.,3(1):e357(2009)。但是尽管r-pzq有更高的治疗效果和更低的毒性，由于受试者体内酶，例如cyp3a4，的降解或代谢，r-pzq治疗仍然受到化合物生物利用度低和生物稳定性低的限制。
五味子提取物是cyp3a4或其他靶向r-pzq的酶的有效底物，可作为cyp3a4和其他酶的潜在竞争性抑制剂。
为了提高pzq和/或r-pzq的生物利用度、溶解度和毒性特征，申请人证明，五味子(schisandrachinensis)提取物可以出乎意料地提高pzq和/或r-pzq在受试者中的生物利用度、生物稳定性和治疗效果。因此，本发明提供了一种用于治疗和/或预防受试者寄生虫病的药物组合物，其包含pzq和/或r-pzq以及最初从五味子(schisandrachinensis)中分离的提取物或化合物。在一实施方案中，五味子(schisandrachinensis)提取物包含最初从五味子(schisandrachinensis)中分离的化合物。在另一实施方案中，从五味子(schisandrachinensis)中分离出的化合物包括五味子素a(schisandrina)、五味子素b(schisandrinb)、五味子素c(schisandrinc)、五味子醇a(schisandrola)、五味子醇b(schisandrolb)、五味子酯a(schisantherin)或其组合。
在一方面，所述寄生虫病易于用pzq和/或r-pzq治疗。在另一实施方案中，所述寄生虫病是血吸虫病。在一实施方案中，pzq包括r-pzq和s-pzq。在一实施方案中，r-pzq包含r-pzq化合物或其衍生物或其类似物。在另一实施方案中，pzq和/或r-pzq为每千克受试者质量约1至约200之间、约200至约400之间、约400至约600之间、约600至约800之间、或约800至约1000mg的pzq和/或r-pzq。在另一实施方案中，pzq和/或r-pzq为每千克受试者质量至少约50mg。在一方面，在所述药物组合物中，所述五味子(schisandrachinensis)提取物为每千克受试者质量约1至约200之间、约200至约400之间、约400至约600之间、约600至约800之间或者约800至约1000mg之间的五味子(schisandrachinensis)提取物。
在另一方面，所述药物组合物是口服悬浮液、片剂、喷雾剂、胶囊、洗剂、凝胶或泡沫的形式。在另一实施方案中，在所述药物组合物中，pzq(或r-pzq)和五味子(schisandrachinensis)提取物的质量比至少为1:100、1:10、1:5、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、5:1、10:1或者100:1。在另一实施方案中，pzq(或r-pzq)与五味子提取物的质量比为1:1或2:1。
在一方面，所述药物组合物还包含粘合剂、调味剂、润滑剂、流动剂、崩解剂、延迟剂和它们的组合。
在另一方面，所述药物组合物还包含抗菌成分、抗真菌成分、抗寄生虫成分或其组合。在一实施方案中，所述药物组合物包含药学上可接受的载体。在一方面，用所述药物组合物治疗的受试者是哺乳动物。在一实施方案中，所述受试者是人。
本发明内容还提供了治疗和/或预防受试者的寄生虫病的方法，其包括向受试者施用有效量的pzq(或r-pzq)和有效量的五味子(schisandrachinensis)提取物。在一实施方案中，所述五味子(schisandrachinensis)提取物包含从五味子中分离的化合物。在另一实施方案中，所述从五味子(schisandrachinensis)中分离的化合物包括五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a。
在一方面，通过所述方法治疗的寄生虫病易于用pzq(或r-pzq)治疗。在一实施方案中，所述寄生虫病是血吸虫病。在一实施方案中，所述方法使用的r-pzq包括r-pzq或其衍生物或其类似物。在另一实施方案中，pzq(或r-pzq)为每千克受试者质量约1至约200之间、约200至约400之间、约400至约600之间、约600至约800之间、约800至约1000之间。在另一实施方案中，pzq(或r-pzq)为每千克受试者质量至少约50mg。在一方面，在所述药物组合物中，所述五味子提取物为每千克受试者约1至约200之间、约200至约400之间、约400至约600之间、约600至约800之间或者约800至约1000之间。
在一方面，所述方法还包括施用包含抗菌成分、抗真菌成分、抗寄生虫成分或药物或其组合的组合物。
附图说明
图1为rac-pzq和r-pzq的化学结构。
图2为五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和五味子酯a的化学结构。
图3显示了为分别施用和不施用五味子素a(schisandrina)的大鼠r-pzq施药后的全血浓度。
详细说明
在阅读本说明书后，如何在各种替代实施方案和替代应用中实现本发明对于本领域技术人员来说是显而易见的。然而，本文并未描述本发明的所有实施方案。应当理解，这里给出的实施方案仅作为示例而非限制性实现。因此，各种替代实施方案的详细描述不应当被理解为限制本发明的范围或广度。
在公开和描述本发明之前，应当理解以下描述并不限于具体的组合物、制备所述组合物的方式或其用途，这些方面都是可以改变的。还应当理解的是，本文使用的术语仅用于描述特定的方面，而非限制性的。
定义
除非另有定义，否则本文所用的所有技术或科学术语的含义与本发明所述领域技术人员通常理解的含义相同。
在本说明书和随后的权利要求中，将参考许多术语，这些术语应被定义为具有以下含义：
这里使用的术语仅用于描述特定的实施方案，并不意图限制本发明。在这里所用的“一”、“一个”和“所述”也包含复数形式，除非上下文另有明确说明。
术语“包括/包含(comprisingorcomprises)”旨在表示组合物和方法包括所列举的要素(elements)，但不排除其他要素。当用于定义组合物和方法时，“基本上由…组成”意味着排除对组合具有任何重要意义的其他元素。例如，基本上由本文定义的要素组成的组合物不排除不会实质上影响要求保护的发明的基本和新颖特征的其他要素。在另一实施方案中，基本上由本文定义的要素组成的组合物不排除痕量污染物或惰性载体。“由…组成”是指排除超过痕量的其他成分和所述的实质方法步骤。由这些转型术语(transitionterms)中每个定义的实施方案均在本发明的保护范围内。
“药物组合物”旨在包括活性成分与惰性或活性载体的组合，使得该组合物适用于体外、体内或离体的诊断和治疗。
术语“药学上可接受的载体”(或媒介)，其可与术语生物相容的载体或媒介互换使用，是指试剂、细胞、化合物、材料、组合物和/或剂型，其不仅与治疗上施用的细胞和其他药剂相容，而且在合理的医学诊断范围内，适用于与人及动物的组织接触而没有过多的毒性、刺激、过敏反应或与合理的益处/风险比相称的其他并发症。适用于本发明公开的药学上可接受的载体包括液体、半固体(例如凝胶)和固体材料(例如细胞支架和基质、管板和本领域已知的在本文中详尽描述的其他此类材料)。这些半固体和固体材料可以被设计成抗体内降解的(不可生物降解)或可被体内降解的(可生物降解、可生物侵蚀)。可生物降解的材料可以进一步为生物可再吸收的或生物可吸收的，即它可以溶解并吸收到体液中(例如水溶性植入物)，或者通过转化为其他材料或分解后以自然途径的形式排出。
术语“患者”、“受试者”、“个体”等在本文中可被互换使用，并且是指适用于本文所述的方法的任何动物或细胞，无论是体外还是原位。在优选实施方案中，患者、受试者或个体为哺乳动物。在一些实施方案中，所述哺乳动物为小鼠、大鼠、豚鼠、非人类灵长动物、狗、猫或驯养动物(如马、牛、猪、山羊、绵羊)。在特别的优选实施方案中，患者、受试者、个体为人。
术语“治疗(treatingortreatment)”是指在受试者例如人中治疗本文所述的疾病或病症。本发明公开的治疗包但不限于：(i)抑制疾病或病症，即阻止其发展；(ii)缓解疾病或病症，及引起疾病消退；(iii)减缓疾病的进展；和/或(iv)抑制、缓解或减缓疾病或病症的一种多种症状的进展。例如，寄生虫病的治疗包括但不限于消除病原体和/或由病原体引起的感染、缓解感染、抑制感染、减少或消除感染寄生虫病的至少一种症状等。
“分别”施药是指通过不同途径同时或基本上同时施用至少两种活性成分。
术语“同时”施药是指通过相同途径、同时或基本上同时施用至少两种活性成分。
本文所用的术语“治疗剂”是指治疗和/或预防。通过抑制、缓解或消除疾病症状而达到治疗效果。
术语“治疗有效量”或“有效量”是指在施药时足以产生所需效果的药剂的量。例如，有效量的组合物可以是足以治疗、控制、缓解或改善有关寄生虫疾病的有关病症的量。治疗有效量的药剂可以根据所治疗的病原体、其严重程度以及待治疗患者的年龄、体重等而不同。本领域技术人员能够根据这些和其他因素确定合适的量。组合物还可以与一种或多种另外的治疗化合物组合施用。在本文所述的方法中，治疗化合物可以施用于具有疾病或病症的一种或多种体征或症状的受试者。
如本文所述，术语“酶”是指催化化学反应的任何蛋白质。酶的催化功能构成了它的“活性”或“酶活性”。酶通常根据其催化功能的类型进行分类，例如肽键的水解。例如，细胞色素p450是可以代谢受试者体内的目标化合物的酶之一。
如本文所用，术语“底物”是指酶在其上发挥其催化活性以产生产物的物质(例如化合物)。例如cyp酶有许多底物，如cyp1a2、cyp2c19、cyp2c9、cyp2d6、cyp2e1和cyp3a4。
cyp2d6底物的非限制性实例包括：托莫西汀、地昔帕明、右美沙芬、依利格鲁司他(eliglustat)、奈比洛尔、去甲替林、奋乃静、托特罗定、文拉法辛、阿米替林、恩卡胺、丙咪嗪、美托洛尔、普罗帕酮、普萘洛尔、曲马多和曲米帕明。
cyp2c19底物的非限制性实例包括s-美芬妥英、奥美拉唑、安定、兰索拉唑、雷贝拉唑和伏立康唑。
cyp2c9底物的非限制性实例包括塞来昔布、格列美脲、苯妥英、甲苯磺丁脲和华法林。
cyp2c8底物的非限制性实例包括瑞格列奈、孟鲁司特、吡格列酮和罗格列酮。
cyp2b6底物的非限制性实例包括安非他酮和依法韦伦。
cyp1a2底物的非限制性实例阿洛司琼、咖啡因、度洛西汀、褪黑素、雷美替胺、他司美琼、茶碱、替扎尼定、氯氮平、吡非尼酮和雷莫司琼。
术语“抑制剂”是指阻断、降低、抑制或压制酶活性的物质。对于本发明公开中，抑制剂包括但不限于可逆的、不可逆的、竞争性或非竞争性的抑制剂。在一实施方案中，抑制剂为cyp抑制剂，其包括但不限于cyp1a2抑制剂、cyp2b6抑制剂、cyp2c8抑制剂、cyp2c9抑制剂、cyp2c19抑制剂、cyp2d6抑制剂、cyp2e1抑制剂和cyp3a4抑制剂。
cyp1a2抑制剂的非限制性实例包括：胺碘酮、阿扎那韦、西咪替丁、环丙沙星、西酞普兰、克拉霉素、地尔硫卓、依诺沙星、红霉素、雌二醇、氟伏沙明、干扰素、异烟肼酮康唑、甲氧西林、咪拉地尔、替加色罗。cyp2b6抑制剂的非限制性实例包括三胺硫磷和噻氯匹啶。cyp2c8抑制剂的非限制性实例包括阿那曲唑、依泽替米贝、二甲苯氧庚酸、孟鲁司特、尼卡地平、磺吡酮和甲氧苄氨嘧啶。
cyp2c9抑制剂的非限制性实例包括：胺碘酮、阿扎那韦、西咪替丁、氯吡格雷、复方新诺明、地拉夫定、双硫仑、依法韦仑、非诺贝特、氟康唑、氟尿嘧啶、氟西汀、氟伐他汀、氟伏沙明、吉非罗齐、伊马替尼、异烟肼、伊曲康唑、酮康唑、来氟米特、洛伐他汀、甲氧沙林、甲硝唑、美西律、莫达非尼、萘啶酮酸、炔诺酮、诺氟沙星、奥美拉唑、避孕药、帕罗西汀、保泰松、丙磺舒、舍曲林、磺胺甲噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺类药物、他克林、替尼泊苷、噻氯匹啶(ticlodipine)、替拉那韦、醋竹桃霉素、伏立康唑、扎鲁司特、齐留通、或大蒜(alliumsativum)提取物、佛手柑素(bergamottin)提取物、鬼爪草(harpagophytumprocumbens)提取物和枸杞(lyciumbarbarum)提取物。
cyp2e4抑制剂的非限制性实例包括：双硫仑和卡瓦胡椒(pipermethysticum)的提取物。
cyp3a4抑制剂的非限定性实例包括：胺碘酮、安普那韦、阿瑞吡坦、阿扎那韦、博赛泼维、西咪替丁、环丙沙星、克拉霉素、环孢菌素、达那唑、地拉夫定、地尔硫卓、依法韦伦、红霉素、乙炔雌二醇、依泽替米贝、氟康唑、氟西汀、氟伏沙明、孕二烯酮、伊马替尼、茚地那韦、异烟肼、伊曲康唑、酮康唑、甲基强的松龙、米贝地尔、咪康唑、米非司酮、奈法唑酮、奈非那韦、尼卡地平、硝苯地平、炔诺酮、诺氟沙星、诺氟西汀、奥昔康唑、泊沙康唑、泼尼松、奎宁、雷诺嗪、利托那韦、罗红霉素、沙奎那韦、舍曲林、特拉匹韦、泰利霉素、醋竹桃霉素、维拉帕米、伏立康唑、扎鲁司特、齐留通以及大蒜(alliumsativum)提取物、阿密茴(ammivisnaga)提取物、印度苦楝树(azadirachtaindica)提取物、升麻(cimicifugaracemosa)提取物、鬼爪草(harpagophytumprocumbens)提取物、白毛茛(hydrastiscanadensis)提取物、柚皮素(naringenin)提取物、人参(panaxginseng)提取物、西洋参(panaxquinquefolius)提取物、马钱子(strychnosligustrina)提取物和钩藤白毛杨(uncariatomentosa)提取物。
术语“疾病”是指生物体(如植物、哺乳动物和人)或其任何组成部分的正常状态受到损害，其中断或改变生物体的性能或功能。“寄生虫病”是指由寄生虫引起或传播的疾病。寄生虫病的实例包括：弓形虫病、疟疾、非洲锥虫病、南美锥虫病、利什曼病、血吸虫病、阿米巴病、贾第虫病、华支睾吸虫病、后睾吸虫病、肺吸虫病、姜片虫病、淋巴丝虫病、盘尾丝虫病、麦地那龙线虫病、鞭虫病、粪类圆线虫病(stronglyoidiasis)、毛圆线虫病(trichostrongyliasis)、毛滴虫病和绦虫病。
在一个实施方案中，寄生虫病是血吸虫病。在另一个实施方案中，寄生虫病是血吸虫引起的。
在一些实施方案中，寄生虫是一种绦虫，其为一种生活在哺乳动物的肠道中的扁平的分段蠕虫。在感染期间，活绦虫幼虫被分组在囊肿中。一旦进入消化道，幼虫就会长成一只非常大的成年绦虫，导致宿主出现症状。绦虫可引起胃肠道感染。例如囊尾蚴病是一种涉及人体内幼虫绦虫的疾病。绦虫包括猪绦虫(taeniasolium)、牛绦虫(taeniasaginata)、短膜壳绦虫(hymenolepisnana)、犬绦虫(dipylidiumcaninum)和带状囊虫(taeniataeniaeformis)。
术语“施用(administering)”或“施药(administration)”药剂给受试者包括任何将化合物引入或递送给受试者以实现其预期功能的途径。施用可以通过任何合适的途径，包括口服、鼻内、肠胃外(静脉内、肌肉内、腹膜内或皮下)或局部施药。施用包括自行施药和由他人施用。
术语“提取物”可用于指粉末形式的目标化合物、液体形式的目标化合物、或粉末或液体形式的任何一种或任何目标化合物的组合。技术人员应当理解，术语“提取物”可用于在其分离之前、同时或之后的目标化合物。
术语“分离”和“纯化”可以互换使用。在一些实施方案中，“分离”可用于指从天然化学环境中取出的提取物。
术语“类似物”是指化合物中的一个或多个独立原子或官能团被不同原子或不同官能团取代，通常会产生具有类似性质的化合物。
术语“衍生物”是指通过将另一分子或原子连接到起始化合物而由类似的起始化合物形成的化合物。此外，根据本发明的衍生物包括由前体化合物通过添加一个或多个原子或分子或通过组合两种或更多种前体化合物形成的一种或多种化合物。
术语“药学上可接受的载体”是指本领域常规使用的载体，以促进生物活性剂的储存、施用和/或愈合作用。
pzq和r-pzq
吡喹酮(“pzq”)或2-(环己基羰基)-1,2,3,6,7,11b-六氢-4h-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮作为一种驱虫剂。研究表明pzq增加了寄生细胞膜对钙离子的渗透性，从而引起寄生虫的收缩。pzq可进一步导致寄生虫外皮的空泡化和崩解。
pzq也被称为bay-8440或msc-1028703a，对应c19h24n2o2,是由r-pzq和s-pzq组成的外消旋混合物(“rac-pzq”)。rac-pzq和r-pzq的化学式见图1。
pzq的制备描述于us4362875中，其他合成方法描述于cn102093346、us2013289275、cn103570710、cn103638884、cn103739601、cn105237532和cn105294679，其通过引用并入本文。pzq可以通过破坏钙离子通道来控制寄生虫的生长，这有利于随后的免疫攻击和之后的寄生虫清除。因此，pzq被用来治疗由多种类型的内/胃肠和外部寄生虫感染引起的疾病，包括包虫病、囊尾蚴病、血吸虫病、支睾吸虫病、肺吸虫病和姜片虫病。pzq是血吸虫病的常见治疗方法，其具有一些例如高剂量需求和苦味。
目前，pzq是治疗多种寄生虫病的主要药物化合物，包括但不限于包虫病、囊尾蚴病、血吸虫病、华支睾吸虫病、肺吸虫病或姜片虫病，或由绦虫引起的胃肠道感染，包括犬绦虫(dipylidiumcaninum)或带状囊虫(taeniataeniaeformis)。在一实施方案中，寄生虫病为血吸虫病。特别的，pzq已被用来治疗血吸虫物种引起的感染，例如湄公血吸虫(schistosomamekongi)、日本血吸虫(schistosomajaponicum)、曼氏血吸虫(schistosomamansoni)和埃及血吸虫(schistosomahematobium)，以及由肝吸虫、华支睾吸虫(clonorchissinensis)/麝后睾吸虫(opisthorchisviverrini)引起的感染。pzq目前正在用于治疗囊尾蚴病、神经囊尾蚴病(ncc)和疟疾的临床试验。pzq还可用于治疗可用抗蠕虫药、抗血吸虫药和抗线虫药治疗的健康病症。此外，pzq可以用于兽医学中，例如用于狗去除绦虫，以及与双羟萘酸噻嘧啶和非班太尔组合用于去除钩虫、蛔虫和鞭虫。此外，pzq可用于猫去除绦虫，并且还与双羟萘酸噻嘧啶组合用于去除各种类型的钩虫和蛔虫。pzq可以消除人类、雪貂、鸟类、南美栗鼠、老鼠、大鼠、仓鼠、沙鼠和豚鼠中的绦虫，以及去除爬行动物中的绦虫和吸虫。
pzq的施用经常会伴随着轻微和短暂的不良反应，包括加剧(severity)、心神不安、头痛、头晕、有无恶心的腹部不适、体温升高以及荨麻疹。事实上，其中的一些症状可能是由寄生虫感染本身导致。因为pzq是药物肝代谢酶的底物，例如细胞色素p450，与增强酶活性的化合物或试剂一同施用会导致pzq血浆水平的降低。
增强肝代谢酶的活性的试剂包括但不限于：抗癫痫药(例如苯妥英、苯巴比妥和卡马西平)和地塞米松。在另一方面，降低药物肝代谢酶(细胞色素p450)活性的试剂可以升高pzq的血浆水平。可以降低肝代谢酶的活性的试剂包括但不限于：西咪替丁、酮康唑、伊曲康唑和红霉素。
在单独施用时，只有施药pzq的一半保持着其抗血吸虫的活性。不受理论约束，pzq在治疗血吸虫病时的功效因其在患者体内的低生物利用度而受到破坏。meyert,etal.,plosnegltropdis3(1):e357(2009)。此外，pzq众所周知的苦味，影响其在儿童患者中的使用，不能被传统办法所掩盖，如封装和包衣。de102005062270。
r-pzq是pzq的一种对映体和通过x射线测定的杀虫组分。meyert,etal.,plosnegltropdis3(1):e357(2009)。由于其较低的苦味，r-pzq适用于针对血吸虫的年轻患者和学龄患者。与s-pzq相比，r-pzq具有体内和体外更高的针对血吸虫的治疗效果和较低的苦味。meisteretal.,antimicrobialagentsandchemotherapy,58(9),5466–72(2014)；meyeretal.,plos.negl.trop.dis.,3(1):e357(2009)。此外，r-pzq相比s-pzq毒性更低，临床研究已表明使用r-pzq的治疗造成的不良反应少于标准治疗方案。sunetal.,drugdes.devel.ther.,10,2061-2068(2016)；wuetal.,am.j.trop.med.hyg.,45:345–349(1991)；xuetal.,chin.med.j.,107:771(1994)。r-pzq的制备描述于wo2016078765、wo2015055126、cn104327077、in201201148、wo2013127354、wo2013127356、wo2013060292、以及us4362875，其全部内容通过引用并入本文。
与pzq类似，r-pzq同样受其低生物利用度的限制，这是由于cyp3a快速立体选择性代谢至无活性的单羟基代谢产物r-trans-4-oh-pzq。wangetal.,biochem.pharmacol.,15,90,166-178(2014)；meisteretal.,antimicrobialagentsandchemotherapy,58(9),5466–72(2014)。一研究表明，在口服23.3mg/kg的r-pzq的2.67小时后，健康志愿者的cmax为0.16μg/ml，auc0→∞为每小时0.87μg*h/ml。limaetal.,br.j.clin.pharmacol.,2011,71:528–535。
用麝猫后睾吸虫(opisthorchisviverini)感染患者的另一研究表明，口服25mg/kg的r-pzq的5小时后，cmax为0.2μg/ml，而auc0→24h为每小时1.1μg*h/ml。meisteretal.,plosnegl.trop.dis.,2016,10(5):e0004700。
不受理论约束，限制抗r-pzq的酶的活性可以提高患者r-pzq的生物利用度。竞争性抑制是预防或限制抗r-pzq的酶活性的一种方式。
在竞争性抑制中，抑制剂和靶向底物竞争酶的活性位点。当抑制剂与活性位点结合时，其将阻断酶与底物的结合，从而抑制底物的酶消化。因此施用作为竞争性抑制剂的r-pzq靶向酶的底物可以促进宿主内r-pzq的生物利用度。
五味子(schisandrachinensis)提取物
申请人意外的发现五味子(schisandrachinensis)提取物可以抑制细胞色素p450(cyp)酶的活性，这些酶诱导化合物包括r-pzq的代谢。在一个实施方案中，五味子提取物包括从五味子中分离的化合物。在另一个实施方案中，从五味子中分离的化合物包括五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b、五味子酯a或其组合。上述化合物的结构式如图2所示。
cyp是一类酶，其靶向外源和内源化合物作为酶促反应的底物。在本发明公开的一方面，五味子提取物抑制cyp酶的活性。
本文包含的化合物-例如五味子(schisandrachinensis)提取物-可以抑制本公开内容的cyp酶。在一个实施方案中，化合物在抑制一种cyp酶方面比另一种更具选择性。术语“选择性”是指化合物抑制一种cyp的ic50值小于另一种cyp酶的ic50值。
如本文所用，术语“ic50”是指抑制剂(例如抗体或抗体片段)在最大响应和基线之间的一半试验中抑制反应的抑制浓度。在一个实施方案中，ic50是指将cyp酶的活性降低、抑制(suppresses,orinhibits)50％的cyp抑制剂的浓度。在一个实施方案中，ic50是指将cyp酶(例如cyp3a4)的酶活性降低、抑制(suppresses,orinhibits)50％的五味子(schisandrachinensis)提取物的浓度。在一个实施方案中，本发明化合物在抑制一种cyp酶的选择性方面比另一种cyp每具有至少1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、100倍、1000倍。在一个实施方案中，本发明的化合物在抑制一种cyp酶方面的选择性至少是另一种cyp酶的5倍。
五味子(schisandrachinensis)提取物的ic50为每千克受试者质量约0.01mg至约200mg、约200mg至约400mg、约400mg至约600mg、约600mg至约800mg或约800mg至约1000mg。在一个实施方案中，五味子提取物的ic50为每千克受试者质量至少0.01mg、0.1mg、2mg、5mg、10mg、20mg、30mg、50mg、70mg、100mg、150mg、200mg、250mg、500mg、1000mg、2000mg、5000mg或10000mg。
本文所述的化合物，例如五味子(schisandrachinensis)提取物，可以与另一种cyp酶抑制剂，可为可逆的、不可逆的、竞争性的和非竞争性的抑制剂，组合使用。cyp酶抑制剂包括但不限于：cyp1a2抑制剂、cyp2b6抑制剂、cyp2c8抑制剂、cyp2c9抑制剂、cyp2c19抑制剂、cyp2d6抑制剂、cyp2e1抑制剂和cyp3a4抑制剂。
cyp1a2抑制剂的非限制性实例包括胺碘酮、阿扎那韦、西咪替丁、环丙沙星、西酞普兰、克拉霉素、地尔硫卓、依诺沙星、红霉素、雌二醇、氟伏沙明、干扰素、异烟肼酮康唑、甲氧沙林、米贝地尔和替加色罗。
cyp2b6抑制剂的非限制性实例包括塞替派(thiopeta)和噻氯匹啶(ticlodipine)。cyp2c8抑制剂的非限制性实例包括阿那曲唑、依泽替米贝、吉非贝齐、孟鲁司特、尼卡地平、磺吡酮和甲氧苄啶(trimethoprim)。
cyp2c9抑制剂的非限制性实例包括胺碘酮、阿扎那韦、西咪替丁、氯吡格雷、复方新诺明、地拉夫定、双硫仑、依法韦伦、非诺贝特、氟康唑、氟尿嘧啶、氟西汀、氟伐他汀、氟伏沙明、吉非罗齐、伊马替尼、异烟肼、伊曲康唑、酮康唑、来氟米特、洛伐他汀、甲氧沙林、甲硝唑、美西律、莫达非尼、萘啶酸、炔诺酮、诺氟沙星、奥美拉唑、避孕药、帕罗西汀、保泰松、丙磺舒、舍曲林、磺胺甲噁唑、磺胺苯吡唑(sulfaphenazole)、磺胺类药物、他克林、替尼泊苷(teniposide)、噻氯匹啶(ticlodipine)、替拉那韦、醋竹桃霉素、伏立康唑、扎鲁司特、齐留通，或大蒜(alliumsativum)提取物、佛手柑素(bergamottin)提取物、鬼爪草(harpagophytumprocumbens)提取物和枸杞(lyciumbarbarum)提取物。
cyp2c19抑制剂的非限制性实例包括西咪替丁、西酞普兰、地拉夫定、依法韦仑、非氨酯(felbamate)、氟康唑、氟西汀、氟伐他汀、氟伏沙明、吲哚美辛、异烟肼、酮康唑、兰索拉唑、莫达非尼、奥美拉唑、奥卡西平、丙磺舒、噻氯匹啶(ticlodipine)、托吡酯(topiramate)、以及大蒜(alliumsativum)提取物和鬼爪草(harpagophytumprocumbens)提取物。
cyp2e1抑制剂的非限定性实例包括双硫仑和卡瓦胡椒(pipermethysticum)提取物。
cyp3a4抑制剂的非限定性实例包括胺碘酮、安普那韦、阿瑞匹坦、阿扎那韦、博赛泼维、西咪替丁、环丙沙星、克拉霉素、环孢菌素、达那唑、地拉夫定、地尔硫卓、依法韦仑、红霉素、乙炔雌二醇(ethinylestradiol)、依泽替米贝、氟康唑、氟西汀、氟伏沙明、孕二烯酮、伊马替尼、茚地那韦、异烟肼、伊曲康唑、酮康唑、甲基强的松龙、米贝地尔、咪康唑、米非司酮、奈法唑酮、奈非那韦、尼卡地平、硝苯地平、炔诺酮、诺氟沙星、诺氟西汀、奥昔康唑、泊沙康唑、泼尼松、奎宁、雷诺嗪、利托那韦、罗红霉素、沙奎那韦、舍曲林、特拉匹韦、泰利霉素、醋竹桃霉素、维拉帕米、伏立康唑、扎鲁司特、齐留通，以及大蒜(alliumsativum)提取物、阿密茴(ammivisnaga)提取物、印度苦楝树(azadirachtaindica)提取物、总状升麻(cimicifugaracemose)提取物、harpagphytum提取物、水葡萄(procumbens)提取物、白毛茛(hydrastiscanadensis)提取物、柚皮素(naringenin)提取物、人参(panaxginseng)提取物、西洋参(panaxquinquefolius)提取物、马钱子(strychnosligustrina)提取物和钩藤白毛杨(uncariatomentosa)提取物。
药物组合物
在另一方面，本发明涉及用于治疗和/或预防受试者寄生虫病的药物组合物，其包含pzq(例如r-pzq)和五味子(schisandrachinensis)提取物或源于五味子(schisandrachinensis)的化合物。在一个实施方案中，五味子提取物包含从五味子中分离的化合物。在另一个实施方案中，五味子提取物包含五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b、五味子酯a。在进一步的实施方案中，组合物包含有效量的五味子提取物，以降低或抑制对pzq和r-pzq的酶活性。
本发明的药物组合物或组合物可以以各种形式的固体食品或液体食品存在，例如片剂、泡腾颗粒剂或粉末、泡腾片剂、液体、可分散和/或可溶片剂、可分散粉末、悬浮液、密封小袋、预混糖浆、果冻、甘油、咀嚼片、颗粒或胶囊(例如硬胶囊)、液体饮料和食品例如汤、果汁、茶饮、牛奶、发酵乳饮料、豆浆、可可饮料和果冻饮料、半固体食品例如布丁或酸奶、面包、面条例如乌冬面、甜食例如曲奇、巧克力、糖果或薄脆饼，以及涂抹酱例如拌饭料、黄油或果酱等。此外，药物组合物或组合物也可以是保健食品或治疗食品的形式。对于其形式没有特别的限制，优选的实例包括能够连续摄取的形式，例如片剂、咀嚼片、颗粒或胶囊(比如硬胶囊)，也包括甜食、汤、饮料和液体食品。
寄生虫病易于被本发明公开的组合物或药物组合物治疗。在一实施方案中，所述寄生虫病包括包虫病、囊尾蚴病、血吸虫病、华支睾吸虫病、肺吸虫病或姜片吸虫病。在另一实施方案中，所述寄生虫病是血吸虫病。在进一步的实施方案中，寄生虫病包括由绦虫引起的胃肠道感染，包括犬绦虫(dipylidiumcaninum)或带状囊虫(taeniataeniaeformis)。
所述组合物或药物组合物包含pzq、r-pzq或其类似物。众所周知，药物组合物中活性化合物的有效剂量取决于预期的施药途径和其他医生通常已知的例如患者年龄和体重等因素。剂量还取决于待治疗的疾病。例如，剂量决定于本发明公开的药物组合物靶向的特定寄生虫病。
在一实施方案中，所述组合物或药物组合物包含每千克受试者约1至约200、约200至约400、约400至约600、约600至约800或约800至约1000mg的pzq或r-pzq。在另一实施方案中，所述组合物包含每千克受试者约1至约1000、约10至约500、约20至约250、约30至约200或约40至约100mg的pzq或r-pzq。在另一实施方案中，pzq或r-pzq的剂量为每千克受试者至少约50mg。在另一实施方案中，所述组合物或药物组合物包含的pzq或r-pzq，其剂量小于10000、100、80、50、30、20、10、5或1mg每千克受试者。
所述组合物或药物组合物包含五味子(schisandrachinensis)提取物。如上所述，五味子提取物在组合物中的剂量取决于预期施药途径和其他因素例如患者年龄和体重，以及组合物中pzq或r-pzq的量。在一实施方案中，五味子(schisandrachinensis)提取物的剂量为至少0.1mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、50mg/kg、70mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg、250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg、2000mg/kg或5000mg/kg受试者的质量。在一些实施方案中，五味子(schisandrachinensis)的剂量为每千克受试者质量约1至约200、约200至约400、约400至约600、约600至约800或约800至约1000mg的五味子(schisandrachinensis)提取物。
所述五味子(schisandrachinensis)提取物包含五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a。因此，所述组合物或药物组合物包含五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a的剂量为至少0.1mg、1mg、2mg、5mg、10mg、20mg、30mg、50mg、70mg、100mg、150mg、200mg、250mg、500mg、1000mg、2000mg、5000mg或10000mg每千克受试者的质量。在另一实施方案中，所述组合物或药物组合物包含五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a的剂量为约1mg至约200mg、约200mg至约400mg、约400mg至约600mg、约600mg至约800mg或约800mg至约1000mg每千克受试者的质量。在一些实施方案中，所述组合物或药物组合物包含五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a的剂量为约1mg至约10000mg、约10mg至约7000mg、约100mg至约5000mg、约200mg至约3000mg、约500mg至约2000mg和约700mg至约1500mg每千克受试者的质量。
在一方面，所述药物组合物是口服悬浊液、片剂、喷雾、或胶囊、乳液、凝胶或泡沫的形式。
在另一方面，所述pzq(如s-pzq或r-pzq)和所述五味子(schisandrachinensis)提取物的质量比为至少1:10000、1:1000、1:100、1:10、1:5、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、5:1、10:1、100:1、1000:1或10000:1。在一实施方案中，所述pzq和所述五味子(schisandrachinensis)提取物的质量比为1:1或2:1。在另一实施方案中，pzq和五味子(schisandrachinensis)提取物的质量比为至少1:3、1:5、1:10或1:100。
本发明公开的组合物或药物组合物的其他的适合的抗寄生虫药物包括磺甲硝咪唑(tinidazole)、甲硝唑、美拉胂醇、依洛尼塞、利福平、两性霉素b、喷他脒、葡萄糖酸琥珀酸钠、葡甲胺锑酸盐、氟康唑、青蒿琥酯、奎宁、奎尼丁、氯喹、阿托伐醌-氯胍(atovaquone-proguanil)、蒿甲醚-苯芴醇、甲氟喹、强力霉素(doxycycline)、克林霉素、巴龙霉素、阿托伐醌、硝唑尼特、阿奇霉素、烟曲霉素、巴龙霉素、二氯散(diloxanide)、塞克硝唑、奥硝唑、双碘喹啉、二氯散糠酸酯、克林霉素、阿托伐醌、阿奇霉素、重氮氨苯咪(diminazen)、台盼蓝(trypanblue)、奥沙奎宁(oxamniquinine)、氯硝柳胺、阿苯达唑、甲苯咪唑、噻苯咪唑、噻嘧啶、乙胺嗪、伊佛霉素、司拉克丁、多拉菌素和阿维菌素。在另一实施方案中、其他抗寄生虫病药物包括用于治疗血吸虫的药物，包括但不限于硝硫氰胺、蒿乙醚、蒿甲醚、氯二甲酚、海恩酮、硫蒽酮、甲氯西泮、尼立达唑(niridazole)、奥替普拉和奥沙尼喹(oxamniquine)。
在一方面，所述药物组合物包含一种选自粘合剂、调味剂、润滑剂、流动剂、崩解剂、延迟剂及其组合的药剂。在一实施方案中，所述粘合剂包括淀粉、改性淀粉、纤维素、改性纤维素、啤酒酵母、蔗糖、右旋糖(dextrose)、乳清、磷酸二钙或其组合。在另一实施方案中，所述调味剂包括干肝、肝提取物、干酪、干酪产品、天然香料、人造香料、乳风味产品、大豆调味产品、啤酒酵母或其组合。在进一步的实施方案中，所述润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、淀粉、改性淀粉、改性纤维素或其组合。在又一实施方案中，所述流动剂包括二氧化硅、改性二氧化硅、气相二氧化硅、滑石或其组合。在另一实施方案中，所述崩解剂包括交联羧甲基纤维素钠、羟基乙酸淀粉钠、淀粉、改性淀粉或其组合。在一些实施方案中，所述延迟剂包括硬脂酸、硬脂酸盐、硬脂酸镁、聚乙二醇、淀粉、改性淀粉、甲基丙烯酸酯聚合物或其组合。
本领域技术人员容易理解的是，任何合适的药学上可接受的脂质体都可以用作本发明的组合物的载体。这种脂质组合物对许多微生物具有活性，类似于上述更详细讨论的本发明其他组合的活性。另外，这些组合物可以如上文更详细讨论的各种常规和众所周知的方式施用。
在另一方面，所述药物组合物进一步包含抗菌成分、抗真菌成分、抗寄生虫成分或其组合。在一方面，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体。
用于施药的药学上可接受的载体包括或基本上包含或进一步包含无菌、水或非水溶液、悬浮液或乳剂。非水溶剂的非限制性实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射的有机酯如油酸乙酯。水性载体的非限制性实例包括水、醇/水溶液、乳剂或悬浮液，包括生理盐水和缓冲介质。注射用载体的非限制性实例包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或固定油。活性剂或治疗成分通常与赋形剂混合，其在药学上可接受并与活性成分相容。合适的赋形剂的非限制性实例包括水、生理盐水、右旋糖、甘油以及乙醇，或其组合。静脉输液载体包括但不限于液体和营养补充剂、电解质补充剂例如基于林格氏葡萄糖的补充剂等。还可以存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。
在一方面，所述受试者为哺乳动物。在一实施方案中，所述受试者为人。
在一实施方案中，所述药学组合物为注射用配方。
在另一实施方案中，所述组合物包含药学上可接受的赋形剂。可接受的赋形剂为无毒的、有助于施用的，并且不会对要求保护的组合物的疗效产生不利影响。这些赋形剂可以是本领域技术人员通常可得到的任何固体、液体、半固体或气体赋形剂。
剂量与施药
如本文所述，所述药物组合物以有效剂量施用。所述有效剂量决定于施用方式、正在治疗的具体病况以及期望的结果。它还取决于病况的阶段、受试者的年龄和身体状况、(若有)同步治疗的性质以及医生熟知的类似因素。对于治疗应用而言，它的量足以达到医学上期望的结果。
pzq或r-pzq的剂量取决于受试者的种类、健康状况、温度或其他身体或生理状况。通常地，本发明中pzq或r-pzq的剂量为每天受试者体重约1mg/kg至约200mg/kg、约200mg/kg至约400mg/kg、约400mg/kg至约600mg/kg、约600mg/kg至约800mg/kg或约800mg/kg至约1000mg/kg，包括其之间的所有值和范围，包括端点。在一实施方案中，所述剂量为每天约10mg/kg至200mg/kg。在另一实施方案中，所述剂量为每天约200mg/kg至400mg/kg。
在一实施方案中，所述pzq或r-pzq的剂量不超过每天约1000mg/kg。在另一实施方案中，所述pzq或r-pzq的剂量为每千克受试者质量至少约50mg。在另一实施方案中，所述组合物或药物组合物包含pzq或r-pzq，其剂量小于100、80、60、50、30、20、10、5或1mg每千克受试者质量。在一些实施方案中，所述组合物或药物组合物包含pzq或r-pzq的剂量为每千克受试者质量约20mg至约60mg。
五味子(schisandrachinensis)提取物的剂量为受试者质量至少0.1mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、50mg/kg、70mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg、250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg、2000mg/kg或5000mg/kg。在一些实施方案中，五味子(schisandrachinensis)的剂量为每千克受试者质量约1至约200、约200至约400、约400至约600、约600至约800或约800至约1000mg的五味子提取物。
在本发明的一方面，本文所述的药物组合物的施用是脉动的(pulsatile)。在一实施方案中，所述组合物或药物组合物以每1小时至每24小时施用，例如，每1小时、每2小时、每3小时、每4小时、每5小时、每6小时、每7小时、每8小时、每9小时、每10小时、每11小时、每12小时、每13小时、每14小时、每15小时、每16小时、每17小时、每18小时、每19小时、每20小时、每21小时、每22小时、每23小时或每24小时。在一实施方案中，所述组合物或药物组合物每1天、每2天、每3天、每4天、每5天、每6天、每7天、每8天、每9天或每10天施用。
所述五味子(schisandrachinensis)提取物包括五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a。因此，所述组合物或药物组合物包含五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a的剂量为每千克受试者质量至少0.1mg、1mg、2mg、5mg、10mg、20mg、30mg、50mg、70mg、100mg、150mg、200mg、250mg、500mg、1000mg、2000mg、5000mg或10000mg。
在另一实施方案中，所述组合物或药物组合物包括五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a的剂量为受试者质量约1mg/kg至约200mg/kg之间、约200mg/kg至约400mg/kg之间、约400mg/kg至约600mg/kg之间、约600mg/kg至约800mg/kg之间或约800mg/kg至约1000mg/kg之间。在一些实施方案中，所述组合物或药物组合物包括五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a的剂量为每千克受试者约1mg至约10000mg之间、约10mg至约7000mg之间、约100mg至约5000mg之间、约200mg至约3000mg之间、约500mg至约2000mg之间和约700mg至约1500mg之间。
以使用各种施药途径。总的来说，本发明的药物组合物可以使用医学上可接受的任何施药方式来实施，意指在不产生临床不可接受的副作用的情况下，产生有效的活性成分水平的任何方式。
施药方式包括口服、直肠、外用(topical)、鼻腔、皮内或肠胃外(parenteral)途径。术语“肠胃外的”包括皮下、静脉内、肌肉内或灌注。静脉内或肌肉内途径不是很适合于长期治疗和预防。但是，在紧急情况下它们可能是首选。预防性治疗首选口服，因对患者以及施药计划的方便性。
适用于口服施药的组合物可以作为独立单元，例如胶囊、片剂和锭剂存在，各独立单元含有预定量的活性剂。其他的组合物包含水性液体中的悬浮液及非水性溶液如糖浆、酏剂或乳剂。
肠胃外施药的制剂包括无菌水溶液或非水溶液、悬浮液和乳剂。非水溶剂的实例有丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油，和可注射的有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳剂或悬浮液，包括生理盐水和缓冲介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或固定油。静脉内载体包括液体和营养补充剂、电解质补充剂(例如基于林格氏葡萄糖的补充剂)等。还可存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。其他形式施药可能导致较低的剂量，例如静脉内施药。如果在应用剂量时受试者的反应不足，可以在患者耐受能力允许的情况下使用更高的剂量(或通过不同的，局部的施药途径有效提高剂量)。为了达到合适的化合物的系统水平，预计每天使用多种剂量。
其他传送系统可以包括延时释放、缓释或持续释放递送系统。这些系统可以避免重复施用本发明的药物组合物，增加受试者和医师的便捷性。多种类型的释放传送系统对本领域技术人员来说是已知并可用的。它们包括聚合物基系统，例如聚乙丙交酯(poly(lactide-glycolide))、共聚草酸酯(copolyoxalates)、聚己内酯、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚羟基丁酸和聚酸酐。含有药物的前述聚合物的微胶囊在例如美国专利号为5075109中描述。递送系统还包括以下非聚合物系统：脂质包括甾醇如胆固醇，胆固醇酯和脂肪酸，或中性脂肪如甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯；水凝胶释放系统；硅橡胶系统(sylasticsystems)；肽基系统；蜡涂层；使用常规粘合剂和赋形剂的压制片剂；部分融合植入物等。
在一实施方案中，所述药物组合物以延时释放、缓释或持续释放递送系统施用。在一实施方案中，将包含本发明药物组合物的延时释放、缓释或持续释放递送系统直接插入到肿块(tumor)中。
在施药时，本发明的药物制剂以药学上可接受的量和药学上可接受的组合物施用。这些制剂可以常规地含有盐、缓冲剂、防腐剂、相容的载体和任选的其他治疗剂。当在药物中使用时，盐应该是药学上可接受的，但非药学上可接受的盐可以以方便地用于制备其药学上可接受的盐，并且不排除在本发明的范围之外。这些药理学上和药学上可接受的盐包括但不限于由下列酸制备的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。并且药学上可接受的盐可以制备成碱金属盐或碱土金属盐，例如钠盐，钾盐或钙盐。
治疗方法
本发明还提供了治疗和/或预防受试者寄生虫病的方法，包括给受试者施用有效剂量的pzq或r-pzq和有效剂量的五味子(schisandrachinensis)提取物。在一实施方案中，所述五味子(schisandrachinensis)提取物包括从五味子中分离的化合物。在另一实施方案中，从五味子中分离化合物包括五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和/或五味子酯a或其组合。
在一实施方案中，所述寄生虫病是血吸虫病。在另一实施方案中，所述寄生虫病是由血吸虫引起的。
鉴于cyp对pzq的酶活性，本发明公开的方法还包括向受试者施用有效量的cyp抑制剂。cyp抑制剂包括但不限于cyp1a2抑制剂、cyp2b6抑制剂、cyp2c8抑制剂、cyp2c9抑制剂、cyp2c19抑制剂、cyp2d6抑制剂、cyp2e1抑制剂或cyp3a4抑制剂。
cyp1a2抑制剂的非限制性实例包括：胺碘酮、阿扎那韦、西咪替丁、环丙沙星、西酞普兰、克拉霉素、地尔硫卓、依诺沙星、红霉素、雌二醇、氟伏沙明、干扰素、异烟肼酮康唑、甲氧西林、咪拉地尔、替加色罗。cyp2b6抑制剂的非限制性实例包括三胺硫磷和噻氯匹啶(ticlodipine)。cyp2c8抑制剂的非限制性实例包括阿那曲唑、依泽替米贝、二甲苯氧庚酸、孟鲁司特、尼卡地平、磺吡酮和甲氧苄氨嘧啶。
cyp2c9抑制剂的非限制性实例包括：胺碘酮、阿扎那韦、西咪替丁、氯吡格雷、复方新诺明、地拉夫定、双硫仑、依法韦仑、非诺贝特、氟康唑、氟尿嘧啶、氟西汀、氟伐他汀、氟伏沙明、吉非罗齐、伊马替尼、异烟肼、伊曲康唑、酮康唑、来氟米特、洛伐他汀、甲氧沙林、甲硝唑、美西律、莫达非尼、萘啶酮酸、炔诺酮、诺氟沙星、奥美拉唑、避孕药、帕罗西汀、保泰松、丙磺舒、舍曲林、磺胺甲噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺类药物、他克林、替尼泊苷、噻氯匹啶(ticlodipine)、替拉那韦、醋竹桃霉素、伏立康唑、扎鲁司特、齐留通，或大蒜(alliumsativum)提取物、佛手柑素(bergamottin)提取物、鬼爪草(harpagophytumprocumbens)提取物和枸杞(lyciumbarbarum)提取物。
cyp2e4抑制剂的非限制性实例包括：双硫仑和卡瓦胡椒(pipermethysticum)提取物。
cyp3a4抑制剂的非限定性实例包括：胺碘酮、安普那韦、阿瑞吡坦、阿扎那韦、博赛泼维、西咪替丁、环丙沙星、克拉霉素、环孢菌素、达那唑、地拉夫定、地尔硫卓、依法韦伦、红霉素、乙炔雌二醇、依泽替米贝、氟康唑、氟西汀、氟伏沙明、孕二烯酮、伊马替尼、茚地那韦、异烟肼、伊曲康唑、酮康唑、甲基强的松龙，米贝地尔、咪康唑、米非司酮、奈法唑酮、奈非那韦、尼卡地平、硝苯地平、炔诺酮、诺氟沙星、诺氟西汀、奥昔康唑、泊沙康唑、泼尼松、奎宁、雷诺嗪、利托那韦、罗红霉素、沙奎那韦，舍曲林，特拉匹韦、泰利霉素、醋竹桃霉素、维拉帕米、伏立康唑、扎鲁司特、齐留通，以及大蒜(alliumsativum)提取物、阿密茴(ammivisnaga)提取物、印度苦楝树(azadirachtaindica)提取物、总状升麻(cimicifugaracemose)提取物、harpagphytum提取物、水葡萄(procumbens)提取物、白毛茛(hydrastiscanadensis)提取物、柚皮素(naringenin)提取物、人参(panaxginseng)提取物、西洋参(panaxquinquefolius)提取物、马钱子(strychnosligustrina)提取物和钩藤白毛杨(uncariatomentosa)提取物。
在另一实施方案中，本发明公开的方法进一步包含施用有效量的其他抗寄生虫药。合适的抗寄生虫药物包括但不限于磺甲硝咪唑、甲硝唑、美拉胂醇、依洛尼塞、利福平、两性霉素b、喷他脒、葡萄糖酸琥珀酸钠、葡甲胺锑酸盐、氟康唑、青蒿琥酯、奎宁、奎尼丁、氯喹、阿托伐醌-氯胍(atovaquone-proguanil)、蒿甲醚-苯芴醇、甲氟喹、强力霉素、克林霉素、巴龙霉素、阿托伐醌、硝唑尼特、阿奇霉素、烟曲霉素、巴龙霉素、二氯散、塞克硝唑、奥硝唑、双碘喹啉、二氯散糠酸酯、克林霉素、阿托伐醌、阿奇霉素、重氮氨苯嘧、台盼蓝、奥沙尼喹宁、氯硝柳胺、阿苯达唑、甲苯咪唑、噻苯咪唑、噻嘧啶、乙胺嗪、伊佛霉素、司拉克丁、多拉菌素和阿维菌素。在另一实施方案中，其他抗寄生虫病药物包括用于治疗血吸虫的药物，包括但不限于硝硫氰胺、蒿乙醚、蒿甲醚、氯二甲酚、海恩酮、硫蒽酮、甲氯西泮、尼立达唑、奥替普拉和奥沙尼喹。在另一实施方案中，所述方法还包括向受试者施用有效量的抗菌成分、抗真菌成分、抗寄生虫成分或其组合。
在一实施方案中，pzq和/或r-pzq以及五味子提取物分别使用。在一实施方案中，pzq(包括s-pzq和r-pzq)与五味子提取物同时施用。在一实施方案中，pzq(包括s-pzq和r-pzq)与五味子提取物顺序施用。
施用后pzq(包括s-pzq和r-pzq)的生物利用度可以在五味子提取物的存在下提升。在一实施方案中，在施用五味子提取物之前施用pzq(和/或r-pzq)。在一实施方案中，在施用五味子提取物之后施用pzq(和/或r-pzq)。在一实施方案中，在施用五味子提取物之前、同时和/或之后施用pzq(和/或r-pzq)。
在一些实施方案中，在施用五味子提取物之前的1分钟至24小时之间，施用pzq和/或r-pzq。在一些实施方案中，在五味子提取物之前的不到1分钟、不到2分钟、不到5分钟、不到10分钟、不到30分钟、不到1小时、不到2小时、不到5小时、不到12小时、不到24小时、不到1天、不到2天、不到3天、不到4天、不到5天、不到6天或不到7天，施用pzq和/或r-pzq。
在一些实施方案中，在施用五味子提取物之后的1分钟至24小时之间，施用pzq和/或r-pzq。在一些实施方案中，在施用五味子提取物之后不到1分钟、不到2分钟、不到5分钟、不到10分钟、不到30分钟、不到1小时、不到2小时、不到5小时、不到12小时、不到24小时、不到1天、不到2天、不到3天、不到4天、不到5天、不到6天或不到7天，施用pzq和/或r-pzq。
在一实施方案中，五味子提取物或pzq(例如r-pzq)通过静脉内、皮下、口服或腹膜内施药。在一优选的实施方案中，五味子提取物或pzq(例如，r-pzq)在被寄生虫感染的器官和/或组织的近侧(例如在体腔附近或在相同的体腔内)施用。在一实施方案中，将五味子提取物或pzq(例如，r-pzq)直接施用于供养感染器官和/或组织的血管中。在一实施方案中，五味子提取物或pzq(例如r-pzq)是全身施用的。在另一实施方案中，五味子提取物或pzq(例如r-pzq)通过微导管、植入装置或植入剂型施用的。
对本文描述的组合物和方法敏感的寄生虫病包括但不限于痢疾、腹泻贾第虫病、腹泻、隐孢子虫病、毛滴虫病、疟疾、弓形虫病、肺炎、南美锥虫病、昏睡病、黑热病、白喉杆菌病、包虫囊肿、绦虫病、囊尾蚴病、血吸虫病、华支睾吸虫病、肺吸虫病、钩虫病、蛔虫病、寸白虫感染、粪类圆线虫病、旋毛虫病、鞭虫病、麦地那龙线虫病、罗阿丝虫病(loiasis)、盘尾丝虫病、丝虫病、内脏幼虫迁移、虱子病、蝇蛆病、疥疮、蜱麻痹和蜘蛛叮咬。在一实施方案中，寄生虫病包括包虫病、囊尾蚴病、血吸虫病、华支睾吸虫病、肺吸虫病或姜片吸虫病。
在一些实施方案中，所述寄生虫病包含由绦虫引起的胃肠道感染，包括犬绦虫或带状囊虫。在另一实施方案中，所述寄生虫病包括血吸虫病。
提高生物稳定性或治疗效果的方法
在另一方面，本发明涉及到提高pzq在受试者体内生物稳定性或治疗效果的方法。如上文所述，提高pzq(或r-pzq)的生物稳定性或体内浓度可以增强包含pzq的药物组合物的治疗效果。在一实施方案中，pzq的体内浓度包括血液或组织浓度。提高pzq在受试者体内的生物稳定性或治疗效果的方法包括向受试者施用有效剂量的包含五味子提取物的组合物。在一实施方案中，五味子提取物包括从五味子中分离的化合物。在另一实施方案中，五味子提取物包括五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b或五味子酯a或其组合。
pzq作为一种驱虫剂可以被用于治疗由寄生虫引起的疾病或感染。例如血吸虫病、华支睾吸虫病、后睾吸虫病、绦虫感染、囊尾蚴病、包虫病和其他吸虫感染。但是在本发明中，pzq的治疗效果不限于治疗寄生虫病。出乎意料的是，五味子提取物可以在施用后提高受试者体内pzq的生物利用度、水平、浓度或其他药代动力学参数。因此本发明提供了提高pzq(或r-pzq)的治疗用途或药效的方法，其包括治疗寄生虫病。
已给出五味子提取物对cyp酶的抑制作用，本发明公开内容还提供了抑制cyp酶的酶活性或提高cyp酶底物的生物利用度或治疗效果的方法或组合物。通过cyp系统的药物代谢已成为几种药物-药物相互作用发生的重要决定因素，这导致药物毒性、药理作用降低和药物不良反应。药物的效果可以通过其在体内的新陈代谢而显著影响。对于快速代谢的药物，可能很难维持其在体内的有效治疗剂量，使药物通常必须更频繁地、更高剂量地施用和/或以持续释放制剂施用。
在各种类型的cyp酶中，cyp1a2、cyp2c19、cyp2c9、cyp2d6、cyp2e1和cyp3a4在药物代谢中有特别显著的作用。大量施用药物的灭活是由于cyp3a4同工酶在胃肠道中的广泛代谢。因此，通过抑制cyp的生物利用度或酶活性，本发明还提供了提高作为cyp酶对象的药物、蛋白质或任何生物活性剂的治疗效果或体内水平的方法。该方法包括向受试者施用有效量的包含五味子提取物的组合物。施用包含五味子提取物的组合物可防止cyp底物的降解，并在其充当治疗剂时促进底物的药代动力学性质。
cyp1a2底物的非限制性实例阿洛司琼、咖啡因、度洛西汀、褪黑素、拉莫酮、塔西莫酮、茶碱、替扎尼定、氯氮平、吡非尼酮和拉莫司琼。
在一实施方案中，所述pzq和所述五味子提取物分别、同时和/或顺序施用。在另一实施方案中，所述五味子提取物在施用pzq之前、同时或之后施用。在另一实施方案中，所述五味子提取物在施用pzq后不到1分钟、不到2分钟、不到5分钟、不到10分钟、不到30分钟、不到1小时、不到2小时、不到5小时、不到12小时、不到24小时、不到1天、不到2天、不到3天、不到4天、不到5天、不到6天或不到7天施用。在另一实施方案中，所述五味子提取物在施用pzq之前不到1分钟、不到2分钟、不到5分钟、不到10分钟、不到30分钟、不到1小时、不到2小时、不到5小时、不到12小时、不到24小时、不到1天、不到2天、不到3天、不到4天、不到5天、不到6天或不到7天施用。
在一实施方案中，所述cyp酶的底物和所述五味子提取物是分别、同时和/或顺序施用。在另一实施方案中，所述五味子提取物在施用底物之前、同时或之后施用。在另一个实施方案中，所述五味子提取物在施用底物后不到1分钟、不到2分钟、不到5分钟、不到10分钟、不到30分钟、不到1小时、不到2小时、不到5小时、不到12小时、不到24小时、不到1天、不到2天、不到3天、不到4天、不到5天、不到6天或不到7天施用。在另一实施方案中，所述五味子提取物在施用底物之后不到1分钟、不到2分钟、不到5分钟、不到10分钟、不到30分钟、不到1小时、不到2小时、不到5小时、不到12小时、不到24小时、不到1天、不到2天、不到3天、不到4天、不到5天、不到6天或不到7天施用。
所述五味子的提取物可以以各种方法施用。在一实施方案中，所述五味子提取物通过静脉内，皮下，口服或腹膜内施药。在一实施方案中，所述五味子提取物包括五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b或五味子酯a或其组合。在另一实施方案中，所述五味子提取物剂量为受试者质量0.1mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、50mg/kg、70mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg、250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg、2000mg/kg或5000mg/kg。
试剂盒部分
在一方面，本发明涉及用于治疗寄生虫病的试剂盒，其包含pzq(如r-pzq)和五味子提取物。
在一实施方案中提供了用于治疗患者寄生虫病的试剂盒，其包含治疗有效量的pzq(如r-pzq)和治疗有效量的五味子提取物。
在一实施方案中，所述五味子提取物包括从五味子中分离的化合物。在另一实施方案中，所述从五味子中分离出化合物包括五味子素a、五味子素b、五味子素c、五味子醇a、五味子醇b和五味子酯a。
在一实施方案中，所述寄生虫病对pzq(如r-pzq)敏感。在另一实施方案中，所述寄生虫病包括包虫病、囊尾蚴病、血吸虫病，支睾吸虫病、肺吸虫病和姜片虫病。在进一步的实施方案中，所述寄生虫病包括由绦虫引起的肠胃道感染。在一实施方案中，所述绦虫包含猪绦虫、牛绦虫、短膜壳绦虫、犬绦虫和带状囊虫。
在一实施方案中，所述试剂盒还进一步包含用于治疗寄生虫病的用法说明。在另一实施方案中，所述试剂盒包含了用于剂量说明和/或施用本发明的药物组合物的说明。
工作实例
下列实施例仅作说明目的，不应解释为要求保护的发明的限制。本领域的技术人员可以使用各种替代技术和方法，同样允许成功地执行预期的发明。
实施例
动物：
药物
新制备的r-pzq(99.6％)和五味子素a(95％)在3％的羟甲基纤维素钠(cmc-na，300-800)中，用于体内试验。
为了研究五味子素a对r-pzq药代动力学的体内作用，实验前将大鼠首先禁食10-14小时，然后将其随机分为8组(第1组、第2组、第3组、第4组、第5组、第6组、第7组和第8组)，每组6只大鼠。给大鼠口服施用五味子素a，剂量分别为0、10、20、40、80、100、160和200mg/kg。施用五味子素a5分钟后，以31mg/kg的剂量给所有大鼠口服r-pzq。使用肝素化管通过颈静脉分别在5分钟、15分钟、0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时和24小时收集血液样品，并在4℃和8,000g下离心6分钟，然后储存在-80℃下用于后续分析。
使用lc-ms/ms定量r-pzq
将来自大鼠的血浆匀浆用5倍体积的含有200ng/ml甲苯磺丁脲的甲醇预处理以沉淀蛋白质，然后在4℃，14000g下离心5分钟。将离心血浆的上清液注入lc-ms/ms进行分析。使用tq5500质谱仪(appliedbiosystems)和acquityuplc系统(waters)。使用流动相改性剂(流动相a：99.9％水和0.1％甲酸，流动相b：99.9％乙腈和0.1％甲酸)从acquityuplcbehc181.7μm(50mm×2.10mm)柱上洗脱r-pzq和甲苯磺丁脲(内标，is)。流速为0.5ml/min。药代动力学参数通过1.6.2软件(appliedbiosystems)计算。所有的结果都表示为平均数±s.d。
表1：单剂量口服r-pzq(31mg/kg)后，施用和不施用不同剂量的五味子素a大鼠的r-pzq的药动力学参数
本文说明性描述了的本发明内容可以在缺少本文未具体公开的任何要素或限制的情况下适当地实施。因此，例如，术语“包括”，“包含”和“含有”应当被广泛地理解而不受限制。另外，这里使用的术语和表达仅作描述的术语而非限制，并且无意使用这些术语和表达来排除所示和所描述的特征的任何等同物或其部分，而应认识到在其在所要求保护的范围内可以进行各种修改。
因此，应当理解，尽管已通过优选实施方案和可选特征公开了本发明，但是本领域技术人员可以采用本文公开的内容的修改、改进和变化，并且这些修改、改进和变化被认为是在本发明公开的范围内。本文提供的材料、方法和实施例是优选实施方案的代表，仅为示例性的，而非意在限制本发明公开的范围。
本发明在本文中被广泛和一般描述了。落入本发明范围的每个较窄的方面与亚属也是本发明的一部分。这包括本发明的一般描述、附带条件或否定限制从该属中排除的任何主题，无论是否在本文中具体描述了去除的材料。
另外，在根据马库什群组描述本发明的特征或方面的情况下，本领据地技术人员将认识到，本发明也因此以马库什组的任何单个成员或成员子组的形式描述。
本文所提及的出版物、专利申请、专利及其他参考文献都通过引用整体明确地并入本文，其范围与其单独引用相同。如与本文发生冲突则以本说明书，包括定义为准。