本发明涉及分析检测，尤其是涉及一种贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc特征图谱构建方法。
背景技术：
1、贯众为乌毛蕨科植物单牙狗脊woodwardiaunigemmata(makino.)nakai.的干燥根状茎，习称“狗脊贯众”，春秋两季采挖，削去叶柄，除去须根及泥土，洗净，晒干；或趁鲜切片，晒干。具有清热解毒，止血，敛疮生肌的功效。贯众标准汤剂是由药材经炮制后按固定的制备工艺而成的冻干粉；贯众配方颗粒是贯众药材经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。贯众为较常用中药，入药始载于《神农本草经》，具有清热解毒、驱虫等功效。历代本草所记载的贯众形态、生境、产地表明，贯众原植物品种甚多。文献记载我国曾用作贯众的原植物多达11科18属58种。艾铁民等调查结果表明，80年代有27种植物被用作贯众的药源植物。《中药大辞典》中记载贯众的原植物有7种，杨纯瑜等通过调查整理出贯众原植物达到38种，其中18种广泛作为贯众收购入药。甚至《中国药典》对贯众原植物的规定也有过多次变动，1977年版收载绵马贯众和紫萁贯众2种，1995年版后仅收录绵马贯众一种，2010年版开始又增加紫萁贯众。可见，贯众类药材极为复杂。
2、林永强等通过采用uplc-ms/ms检测混淆品单牙狗脊贯众的抗感冒颗粒方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为0.02％甲酸的乙腈-0.02％甲酸溶液，梯度洗脱，质谱采用电喷雾正离子模式(esi+)，多反应监测(mrm)定量分析，可用于检测抗感冒颗粒中单牙狗脊贯众的使用情况。马秉智等采用uplc指纹图谱方法测定了9个不同产地的单牙狗脊蕨样品，以乙腈-水梯度洗脱，建立了不同产地单牙狗脊蕨的uplc指纹图谱，并进行了相似度比较，进一步对其中的山奈素-3-0-l鼠李糖基进行归属。
4、因此，为对贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒进行的更好的质量控制，构建了贯众的特征图谱方法，达到科学鉴别贯众及其制剂的目的。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc特征图谱构建方法，本发明构建的贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc特征图谱方法稳定，可靠，可以对贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的质量进行控制。
2、一种贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc特征图谱构建方法，包括：
3、a)将贯众原料采用溶剂溶解，得到待测液；
4、b)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到贯众原料的uplc特征图谱；
5、所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.1％磷酸，梯度洗脱。
6、本发明提供的一种贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc特征图谱构建方法首先取贯众原料，溶剂溶解，得到待测液。所述溶剂优选为70％甲醇。
7、本发明采用上述提取溶剂色谱峰信息量大，效果好。
8、具体为将贯众原料采用溶剂溶解，提取，放冷，摇匀，滤过，即得。
10、其中，所述贯众原料的质量g和溶剂的体积ml的比优选为(0.1～0.5)：(50～100)；更优选为0.1：50。
11、所述贯众原料为贯众药材、贯众饮片、标准汤剂、配方颗粒。本发明对其不进行限定，上述原料皆可通过本发明的方法进行质量控制和定性检测。
12、本发明还包括制备参照物溶液：分别取原儿茶酸，采用70％甲醇溶解，得到参照物溶液；
13、将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定，得到参照物的色谱图；并根据参照物的色谱图对贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc特征图谱的成分进行定性测定。
14、流动相a为乙腈，流动相b为0.1％磷酸，梯度洗脱。
15、本发明所述梯度洗脱优选具体为：
16、0～5min，a相：6％、b相：94％；
17、5～10min，a相：6％～15％、b相：94％～85％；
18、10～25min，a相：15％～25％、b相：85％～75％；
19、25～40min，a相：25％～26％、b相：75％～74％。
20、本发明在上述洗脱梯度下基线分离好，各个峰分离度好，基线平稳。
21、1.6μm，2.1×150mm；柱温35℃。
22、本发明色谱柱在上述35℃条件下色谱峰对称、分离度好。
23、流动相流速优选为0.3ml/min。
24、本发明发现流速0.3ml/min下各色谱峰分离较好，峰形较对称，作为最优选方案。
25、本发明检测波长优选为250nm或260nm。
26、其中贯众药材饮片的检测波长为250nm、标准汤剂的检测波长为260nm、配方颗粒的检测波长为260nm。
27、本发明人发现，在上述波长下色谱信息丰富，各成分均有较好吸收，响应值适中，各峰分离度较好，基线平稳。
28、本发明进样量为1μl。
29、本发明的有益效果是，一个液相色谱条件下，以指纹图谱控制贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的物质群，以原儿茶酸对指纹图谱进行定位；能够大大降低检测的成本，实现定性检测。
30、采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc特征图谱的相似度进行评价，得到由11个特征峰构成的贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc标准特征图谱，其中峰1为原儿茶酸。
34、2.10(峰2)、4.41(峰3)、4.51(峰4)、5.70(峰5)、5.86(峰6)、6.01(峰7)、6.36(峰8)、8.39(峰9)、8.68(峰10)、8.81(峰11)。
35、质量判断标准：取贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒样品，按上述同法操作，得到贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱，采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012版对贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒标准特征图谱和样品特征图谱进行分析，相似度大于0.90。
36、采用本发明所提供的方法能有效的监控不同批次贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的质量，使其质量稳定，方法具有精密度高、重现性好等特点，有利于全面监控产品的质量。
38、本发明新建的特征图谱方法，可以检测贯众及其标准汤剂中极性较大的成分。且供试品制备方法简单容易操作，指认特征峰相对较多。可对甘遂、贯众及其制剂进行准确、可靠的特征图谱检测。对贯众及其制剂的真实性和质量的一致性以及稳定性均可有效地加以检测和控制。为有效控制和较全面评价贯众标准汤剂的质量提供依据。确保贯众及其标准汤剂质量的均一、稳定。
39、本发明提供了一种贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc特征图谱构建方法，包括：a)将贯众原料采用溶剂溶解，得到待测液；b)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到贯众原料的uplc特征图谱；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.1％磷酸，梯度洗脱。本发明采用高效液相色谱法，选用乙腈-0.1％磷酸为流动相进行梯度洗脱，以原儿茶酸为参照物，建立了贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒uplc特征图谱，重复性、精密度好，方法稳定，可靠，可以对贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的质量进行控制。