1、鸡球虫病(CoccidiosisinChicken)鸡球虫病是鸡常见且危害十分严重的寄生虫病，它造成的经济损失是惊人的。据统计，美国在19511960年因禽球虫病损失4700万美元；英国每年在养鸡业上至少要花费550万英镑（其中大约有一半系用防治球虫病的药费）。从世界范围来看，鸡球虫病每年能造成6000万至1.2亿美元的损失。我国虽无精确的统计，但从局部零散的资料来看，每年因鸡球虫病造成的经济损失，数目也是相当可观的。尽管现代在防治、营养、管理和遗传学方面取得了很大的进展，鸡球虫病仍然是最普遍的鸡病之一。因而，目前用于药物预防的费用，在美国已超过9000万美元，全世界将超过3亿美元。（一）
2、、病原鸡球虫是一种原虫，分类学上隶属于原生动物亚界，顶器门，孢子虫纲，真球虫目，艾美耳科，艾美耳属。世界各国已经记载的鸡球虫种类共有13种之多，即1.堆型艾美耳球虫（Eirneriaacervulina），2.布氏艾美耳球虫（E.brunetti），3.哈氏艾美耳球虫（E.hagani），4.巨型艾美耳球虫(E.maxima)，5.变位艾美耳球虫(E.mivati)，6.和缓艾美耳球虫（E.mitis），7.毒害艾美耳球虫(E.necatrix)，8.早熟艾美耳球虫(E.praecor)，9.柔嫩艾美耳球虫（E.tenella），10.E.beachi，11.E.johnsoni，12.E
3、.tyzzeri和13.E.sporadica。前述19种为大多数学者所公认，1013种的独立性不少学者认为是可疑的。我国何承德、张朝聘(1959)报道西安市发现巨型艾美耳球虫和和缓艾美耳球虫；甘肃(1960)记载兰州市有柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫及和缓艾美耳球虫；熊大仕、林昆华(1965)报告北京存在柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫和哈氏艾美耳球虫6种；北京农业大学兽医系寄生虫学教研组(1977)报道北京地区除上述6种外，还有毒害艾美耳球虫；上海市农业科学院(1978)报告上海市危害鸡较严重的有柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和
4、变位艾美耳球虫4种；陈淑玉等(1978)报道华南地区以柔嫩艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫最为常见；白启(1981)报道广州地区鸡球虫有9个种，即柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、变位艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫和哈氏艾美耳球虫，作者还报道兰州除上述9种外，还存在等孢属球虫；任熙宇等(1990)报道江苏省鸡球虫种类有为大多数学者所公认的9种。1989年史天卫等对上海地区鸡球虫的初步调查，结果发现有以下6种，即柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和变位艾美耳球虫。王善志
7、面的观测。王世钧等（1980）报道了齐齐哈尔市郊区和富裕县城区鸡球虫种类有早熟艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫和等孢属球虫未定种（IsospOrasp.）。左仰贤等(1986)对云南省不同地理条件的8个地、州的8个县、市的鸡进行了调查，结果发现有9种球虫:即柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、变位艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫和鸡等孢球虫Isosporagallinac）。鸡等孢球虫，调查结果发现有1.6%的感染率。虽然Levine(1973)，Pelferdy(1974)等怀疑此种不是鸡的真寄生虫.而是
9、缓艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫和等孢属球虫（Isosporasp.）。陈刚等(1990)报道了于1989年35月，用粪检法对西宁地区成年鸡进行了球虫种类的调查，共查到艾美耳属球虫6种，即柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫和布氏艾美耳球虫，一种艾美耳属未定种及一个等孢属卵囊。根据现有虫种调查资料的初步汇总，9种鸡的艾美耳属球虫在我国均存在，其中6种分布较广，虫种和分布情况如下。1.堆型艾美耳球虫分布于北京、乌鲁木齐、兰州、广州、山东、广西、昆明、陕西、福州、银川、上海、云南。2.布氏艾美耳球虫分布于兰州、广州、广西、云南。3.哈氏艾美耳球虫分布于北京、
10、乌鲁木齐、兰州、广州、山东。4.巨型艾黄耳球虫分布于北京、山西、乌鲁木齐、兰州、广州、黑龙江、山东、广西、昆明、陕西、福州、云南、银川、上海。5.和缓艾美耳球虫分布于山西、北京、乌鲁木齐、兰州、广州、黑龙江、山东、广西、昆明、陕西、福州、云南、银川。6.变位艾美耳球虫分布于兰州、广州、广西、陕西、云南、上海。7.毒害艾美耳球虫分布于北京、乌鲁木齐、兰州、广州、黑龙江、山东、广西、昆明、陕西、云南、银川、上海。8.早熟艾美耳球虫分布于北京、乌鲁木齐、兰州、广州、黑龙江、广西、昆明、陕西、云南、银川、上海。9.柔嫩艾美耳球虫分布于北京、乌鲁木齐、兰州、广州、江苏、黑龙江、山东、广西、昆明、陕西、福
11、州、云南、银川、上海。另外，在兰州、广州、齐齐哈尔、陕西、云南、银川等地的鸡粪中查出等孢属球虫，少数作者定名为拉氏等孢球虫（Isosporalacazei），到目前还没有可靠证据能证明其为鸡的寄生性球虫（黄兵，1990年）。由于现代交通的发展和国际间来往的频繁，尤其是鸡及其产品作为重要的家畜品种和贸易对象，这就会使任何一种鸡球虫都可能成为世界性的。现把我国发现的9种球虫的形态特点分述如下。1.堆型艾美耳球虫EimeriaacervulinaTyzzer，1929寄生部位:通常寄生于于十二指肠和空肠的上皮细胞内，个别情况下可延及小肠后部。形态:卵囊中等大小，卵圆形，其量度最大的为22.5u
23、成绩。柔嫩艾美耳球虫韩志华等进行了柔嫩艾美耳球虫（Eimeriatenella）细胞培养的观察。作者在鸡肾细胞内培养结果发现:子孢了接种后第2天已全部钻进细胞呈现出轻微收缩运动，表面折光透明。第34天，被侵害的细胞部分明显膨胀。第5天观察到第1代裂殖体，排列成菜花状，并释放大量裂殖子，裂殖子呈放射状排列。第6天出现第2代裂殖体。第7天已形成大小配子体。第9天见到卵圆形的卵囊。3次试验结果相同。子孢子发育成卵囊后，肾细胞开始衰老变形，部分细胞脱落，有些形成空泡。细胞培养中发育成的卵囊，孢子化后接种1日龄来航鸡。接种后第6天，雏鸡排血便。第7天进行粪检，发现柔嫩艾羹耳球虫卵囊。另外作者还指出，经
24、41培养9天的孢子化卵囊不能感染雏鸡。吕文顺等(1984)，用体外脱囊的球虫子孢子5l0410l04个接种911日龄鸡胚的尿囊腔中，进行柔嫩艾美耳球虫在鸡胚培养中内生性发育史的研究。观察结果表明，球虫在绒毛尿囊膜(CAM)细胞内完成了无性世代和有性世代两个发育阶段，出现第1、2、3代裂殖体和大配子体和小配子体以及卵囊，像在鸡肠黏膜上皮细胞内一样完成全部内生发育史。成熟的卵囊最早出现于144h，然后逐渐增多，到192h不仅在CAM上可见到密集的大量卵囊，在尿囊液和尿酸盐沉淀物中也可以获得集聚成堆的卵囊。培养获得的卵囊在形态学上完全符合柔嫩艾美耳球虫的特征。卵囊经孢子发育完成后仍具有感染雏鸡的能力
25、，并可经鸡胚连续传代。李泳等(1985)用电子显微镜观察了柔嫩艾美耳球虫配子生殖的全过程，描述了雄配予体和雌配子体生殖过程超微结构的变化。雄配子体经过核分裂，细胞质膜内陷切割细胞质，细胞核迁移，支链淀粉粒形成，鞭毛体突起，配子躯干和鞭毛形成，最后雄配子成熟，离开雄配子体残余。雌配子体经过内质网折叠，形成大量的内质网池，产生壁形成体和，雌配子从不规则的椭圆形发展到卵圆形，受精后，卵囊壁形成，壁形成体消失。张振岚等(1990)对柔嫩艾美耳球虫内生阶段超微结构变化进行了研究。观察结果，发现裂殖生殖过程是裂殖子或滋养体的核经多次分裂后彤戚多核体或称新生裂殖体。新形成的核被有双层膜，每个核具有一个明显的
26、核仁。初生裂殖体从切面上看，有许多由单个限制膜构成的裂缝或裂隙，似乎把多核体分成许多块；有些裂隙或裂缝与裂殖体表面的限制膜相连，似乎由表面的限制膜内陷而形成。在这些裂隙处和在多核体的表面一样也可形成囊状突起，并逐渐延长而形成裂殖子。新生裂殖子脱离母体时，其后端形成一电子密度增强的环，谓之后极环。成熟的裂殖子的形态有细条形到矮胖形，日不同代之间无明显差异。它们均被有一层由外膜和内膜复合体构成的表皮，以及类锥体、极环、微线粒、棒状体和膜下微管构成的顶端复合体。配子生殖过程是小配子细胞较大配子细胞小，被一层限制性单位膜，细胞核经多次分裂后形成多核体与裂殖生殖过程中形成的多核体的区别在于这些新形成的核
27、均定位于配予细胞的周边，无核仁，有多个染色质团块，核质在边缘区域较浓，随后染色质向外侧集结，周边核延长并向表面隆起而形成小配子的“芽体”。在核不断向外延伸过程中，可能有一线粒体也伴随外移，因在成熟的小配子前部有一个长椭圆形而内多嵴的线粒体紧靠着核。一个成熟的小配子主要由一个长条形而电子致密的核和一个长椭圆形的线粒体构成。在其前端或顶器附着有3根鞭毛，而胞质含量很少。初生大配子细胞有一个大的核和一个呈颗粒状的浓染的核仁，被有一层限制性单位膜，胞浆内有大量内质网和线粒体，但很少或几乎没有脂肪颗粒和多糖颗粒，这两种成分在随后的发育中逐渐增多起来。大配子细胞进一步发育，胞浆中出现许多成囊颗粒(WFB
28、)，高倍镜下，这些颗粒呈明暗交替的条带状结构。每个WFB颗粒均位于一围膜泡内，散布在胞浆基质中，据此很容易与新生裂殖体及小配子细胞相区别。随着大配子细胞进一步发育，除大量卵圆形的多糖颗粒增加外，另一特征就是在胞浆的边缘区域出现多个圆形致密而均匀的，但大小不等的成囊颗粒I(WFBI)，它的出现标志大配子的成熟。当合子的外层限制膜分离开来，形成一环绕的胚膜，其本身又被覆一层新的限制膜时，标志卵囊形成的开始。WFB颗粒物质可能被输送到膜I和胰之间的区域内，随着此外层的逐渐形成胞浆内WFB逐渐减少或消失，原先所在的部位有时留下空泡。在外层形成的同时，可观察到合子的限制膜又经多次复制而形成膜、膜和本身
29、的限制膜。WFB颗粒物质就可能被输送到膜和膜之间的区域内。WFB和WFB分别构成卵囊壁的内外层最初在形态上呈现不均匀状态，且厚度上也不一致，后经进一步融合、浓缩而构成电子致密度高的外层和电子致密度稍低的内层。翁亚彪等(1992)进行了柔嫩艾美耳球虫配子形成阶段的超微结构的观察，结果发现，小配子体的发育是在盲肠上皮细胞核上方进行。发育早期，核经多次分裂成数个小核，小核无核仁，染色质边聚，并移至小配子体边缘，延长并向带虫空泡突起，成为小配子的核。同时，中心粒变为基体，鞭毛从基体发出。小配子具有3根鞭毛。大配子体的发育则是在盲肠上皮细胞核的下方进行。早期大配子呈圆形或椭圆形，外被限制膜，膜周围有许多
30、细丝状的微绒毛物。这些微绒毛状物横切面呈小点状，纵切面呈丝状，并与大配子相连。大配子内有两种成囊颗粒，成囊颗粒质地均匀致密，强嗜饿酸性；成囊颗粒由细丝状物盘曲、折叠而成。成熟的大配子内含多量的多糖颗粒、一些小管、酯类包含体和半透明空泡，核位于中央。朱彦鹏、华兰英(1991)报道了柔嫩艾美耳球虫的早熟培育及其免疫原性试验。作者从我国河北省的柔嫩艾美耳球虫虫株中发现了132144h成熟的早熟虫株，随后进行了早熟虫株的培养，并对其致病力和免疫原性作了研究。结果发现:（1）在整个早熟培育过程中，感染250030000个卵囊的鸡均来呈现柔嫩艾美耳球虫病的任何临诊症状，剖检时除个别鸡的盲肠特膜上出现极轻微
31、的粘膜肥厚和偶见小点出血外，未发现其他病理变化。(2)分别接种第22代和第23代早熟培育虫株卵囊2104个的试验鸡，接种后既未出现任何临诊症状，亦未发生死亡。而分别接种原始虫株卵囊5103和ll04个的试验鸡，在接种后第5和第6天分别死亡2只和4只。剖检见盲肠病变记分均达到4分。说明早熟培育的虫株的致病力远比原始虫株低。(3)早熟培育的虫株免疫接种的鸡，于接种后的第17天，口服攻击感染原始虫株的孢子化卵囊5104个，根据免疫接种后和攻击感染后试验鸡的死亡和盲肠病变记分来评价，证明早熟培育虫株已完全丧失了免疫原性。作者认为采用旱熟培育达到使球虫株的潜隐期逐渐缩短或使其致病力减弱的目的并非十分困难
32、，但为保持早熟虫株原来的免疫原性却不是很容易的，尚需进行更深入的研究。翁亚彪等(1992)应用单卵囊分离技术获得纯种柔嫩艾美耳球虫纯种（广州株）卵囊，进行柔嫩艾美耳球虫早熟虫株的选育。试验结果表明，对该虫株进行8代的早熟选育，获得了一个潜隐期为120h的早熟虫株。以此早熟虫株感染雏鸡，感染量为每只10万个孢子化卵囊，临诊上不出现症状和病变；感染量提高到20万个时，也仅见盲肠粘膜有少量出血点。这表明该早熟虫株的致病力已明显降低。每只雏鸡经口免疫接种该虫株5000个孢子化卵囊，7天后用8万个原代孢子化卵囊攻击，免疫鸡不发病，剖检见盲肠不呈现病变。说明该早熟虫株具有良好的免疫原性。谢明权等(1992
33、)用12种脱囊液进行厂柔嫩艾美耳球虫子孢子脱囊比较试验，脱囊温度均为40。结果说明:0.25%胰酶加0.75%，胆盐脱囊4560min，子孢子脱囊率达85%97%；0.25%胰酶加5%鸡胆汁脱囊7590rnin，脱囊率达65%95%；0.25%胰酶加5%猪胆汁，脱囊7590rmn，脱囊率为91%96%；0.25%胰酶加5%猪胆汁，脱囊90min至105min，脱囊率达51%75%，0.25%胰酶加10%猪肝汁，脱囊90min，脱囊率达89%97%。其余的脱囊液如0.25%胰酶加5%OP-10；0.25%胰酶加5%十二烷基苯磺酸钠；0.25%胰酶加10%十二烷基苯磺酸钠；0.25%胰酶加10%
38、，在40水溶中孵育2h，子孢予脱囊率可达92.6%。鉴于鸡胆汁产量小，曾用牛、羊胆汁进行试验，结果证明，子孢子脱囊率分别达70.6%和65.4%，还不如鸡胆汁效果。用1%胰酶加5%鸡胆汁脱囊的子孢子对鸡有感染力。将子孢子接种于鸡胚尿囊腔中，在40下孵化7天，子孢子在绒毛尿囊膜细胞中完成了全部内生性发育，最后形成第2代卵囊。经检查，卵囊形成后不仅局限在绒毛尿囊膜细胞内，也可游离到尿囊液中。张勤等(1980)应用柔嫩艾美耳球虫（保定株）进行了鸡胚传代致弱培育的研究。其研究内容包括(1)鸡胚内的发育；(2)鸡胚传代株的建立和第35代鸡胚传代株的致病力；(3)免疫原性的测定。结果表明柔嫩艾美耳球虫（保
39、定株）经鸡胚传38代后，又通过小鸡繁殖了一次，接着连续通过鸡胚传到47代。在传代过程中观察了柔嫩艾美耳球虫在鸡胚内发育的各阶段，随着传代次数的增加，柔嫩艾美耳球虫在鸡胚内的卵囊产量和回收卵囊的孢子形成率随传代经过逐渐增高，终于显示出对鸡胚的良好“适应”。在鸡胚内传了35代的柔嫩艾美耳球虫鸡胚传代株跟未经传代的原始虫株比较，传代株对鸡胚和小鸡的致病力，尤其是对小鸡的致病力显著地降低了。投给104个鸡胚传代株卵囊的小鸡经3周后以6104个未经传代的原始虫株攻击，显示出有高度的保护作用。自Long(1965)首次完成用脱囊的柔嫩艾羹耳球虫子孢子，感染鸡胚成功之后，国内外的学者相继用他的方法或略加
40、改进，成功地进行了多种鸡艾美耳球虫的鸡胚培养。但Long的方法获得的子孢子悬浮液中，粪渣等杂质较多，虽然对鸡胚的感染影响不大，但不适于进行球虫免疫学、组织培养和生化分析。因此提纯有活力的球虫子孢子，是进行上述试验研究的基础。田广孚、田增义(1989)进行了柔嫩艾美耳球虫子孢子的提纯试验。作者崩DEAE纤维素(DF52)柱层析柔嫩艾美耳球虫子孢子的粗提悬浮液，纤维素柱高5cm，直径2cm，pH8.0甘氨酸缓冲液作为洗脱液。流速为4ml/min，每个集份10ml，16集份以后再未观察到子抱子。子孢子回收率为62.94%。纯化后的子孢子悬浮液杂质极少，达到了纯化的目的。显微镜下可看到纯化后的子孢子蠕
41、动。蒋建林等(1994)用改进的DEAE-Cellulose52柱层法纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子。纤维素柱高5cm，管的直径1.6cm，洗脱液为pH8.0Tris-Hel等渗缓冲液，流速为1ml/min，得到了极纯的子孢子，且子孢子运动性好，回收率在63%以上。作者认为子孢子之所以能用DEAE-Cellulose52来纯化，是因为子孢子的运动和电荷差异摆脱了DE-52的离子交换吸附，并且体积小，能通过纤维素形成的筛网，而卵囊、卵囊壁、孢子囊、孢子囊壁及其他一些有机物却被纤维素网挡住和离子交换吸附上去了，于是只有子孢子被洗脱下来。翁亚彪等(1992)通过经口感染的方法，使每只鸡感染10万个柔
42、嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，然后观察感染鸡的血细胞的变化。结果发现感染鸡的红细胞数于感染后第4天开始降低，第5天降到147.35万/mm3（感染前为296.09万/mm3），笫6天后逐渐回升，第10天时恢复到感染前的水平。凝血细胞数在感染前为2.60万/mm3，感染后第5、6天有所减少，分别为2.06万/mm3和2.19万/mm3。白细胞总数感染前为3.38万/mm3，感染后第4天开始升高，第8天高达4.05万/mm3，第10天后逐日回降。在白细胞分类中，异嗜性白细胞的比例感染前为24.6%，感染后第5天增至31.7%；而淋巴细胞感染前为64.4%.感染后第5天则下降到54.5%；嗜酸性白细胞感染
43、前为0.2%，感染后第4天开始增加，第10天时增至7.7%；嗜碱性白细胞为l.5%，单核细胞为5.9%，感染前后没有明显的变化。濒死鸡的红细胞数为82万/mm3，与感染前相比，降低了72.3%，表明柔嫩艾美耳球虫病鸡的致死原因主要是失血过多。濒死期白细胞总数为3.85万/mm3，显著高于存活鸡的2.75万/mm3，这与在许多疾病中，动物在濑死时白细胞数通常下降的现象有所不同。谢明权等(1993)用纯化的孢子化的柔嫩艾美耳球虫卵囊（威斯康星株）和裂殖子，经用C-50超声波粉碎机处理后，进行了水解氨基酸和游离氨基酸的测定。结果发现柔嫩艾美耳球虫卵囊有6种游离氨基酸（天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、苏氨
45、数量变化。(c)第代成熟裂殖体数量变化。结果表明:(1)鸡血清培养蒸在113种指标上均高于另外3种血清，而猪血清培养基均低于别的血清；(2)含5%血清与10%血清培养基在这3个指标上无显著差异；(3)予孢子在接种后4h，穿透细胞的数目达到高峰，此后有所下降。作者认为采用细胞培养技术作抗球虫药筛选，可首先选用鸡血清作培养基成分。段嘉树、张秀云(1992)报道了次氯酸钠处理对柔搬艾美耳球虫卵囊活力的影响，用10%和20%的次氯酸钠溶液对收集的新鲜柔嫩艾美耳球虫卵囊液，分别处理10min和20min.然后用常规方法彻底清洗后放在2.5%重铬酸钾溶液中，置29温度下培养48h，观察卵囊孢子发育率。以生
46、物统计结果表明各处理组间无显著差异。有人对柔嫩艾美耳球虫的致病力进行过研究，如黄兵等(1994)从现场采集分离获得的纯种柔嫩艾美耳球虫，孢子化后，分别以每只鸡感染1万、5万、10万和20万个的不同剂量，人工感染1013日龄的伊莎公鸡，感染后7天结束试验，最后以平均增重、死亡率和病变记分作致病力的判定指标。试验结果显示柔嫩艾美耳球虫致病力很强，感染10万个孢子化卵囊的死亡率为50%；感染20万个的死亡率达75%；感染5万个孢子化卵囊的平均增重极显著低于不感染对照组(P0.01)。4个不同感染剂量的肠道病变记分为2.753.92。汪明等(1994)也报道了柔嫩艾美耳球虫致病力的试验。作者采用单卵囊
47、分离技术从鸡场的混合卵囊中提纯出柔嫩艾美耳球虫。卵囊孢子化后，按每只5万、7.5万、10.5万和20万个的不同感染量人工感染14日龄的AA肉鸡。结果致死率分别为10%、20%、40%和50%。试验说明柔嫩艾美耳球虫是致病力很强的一种球虫。有人研究抗球虫药对柔嫩艾美耳球虫的影响，如张振岚等(1991)报道了尾卡巴嗪l.2510-4能引起柔嫩艾美耳球虫裂殖生殖阶段的滋养体或初生裂殖体及裂殖子的线粒体、内质网等膜结构系统和核异常变化。1.6810-4磺胺喹恶啉对裂殖生殖阶段的影响主要表现为核膜的增生复制等一系列核的异常变化；对配子生殖阶段的影响表现为型和型卵囊壁形成颗粒(WFB，WFB)的异常变化。
48、810-5盐霉素对上皮内淋巴细胞(IEL)中的子孢子及黏膜中成熟裂殖子的影响表现为表皮的分离或破裂及胞浆内微线粒和多糖颗粒等的轮廓模糊。谢明权等(1994)应用3种聚醚类抗生素和7种化学合成的抗球虫剂作用于柔嫩艾美耳球虫的裂殖子30min，然后用Hanks平衡盐溶液洗去药物再接种1011日龄的鸡胚。2.5天后收集鸡胚中的卵囊，以卵囊生成数判断药物的效果。结果证明，除氨丙啉外，其余的抗球虫剂对裂殖子是有效的。各种药物的最低浓度，拉沙菌素、盐霉素、莫能霉素、杀球灵(Diclazuril)、常山酮为10ug/ml；氯苯胍、乙羟喹酯（Decoquinate）为l00ug/ml；氯吡醇(Clopido
49、l)为500ug/ml和尼卡巴嗪为1000ug/ml可以降低裂殖子的活力，但不明显。当拉沙菌素、盐霉素、莫能霉素、杀球灵、常山酮、氯苯胍的剂量分别提高到350、150、120、200、500和700ug/ml时，可以杀死裂殖子。作者还进行了药物作用方式的比较，一种是如前述的药物直接作用于裂殖子，然后接种于鸡胚；另一种是先将子孢子接种于鸡胚后3天，当柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖体发育时，从尿囊腔注入药物。结果发现10ug/ml的常山酮对上述两种方法均有很好的抗球虫效果。10ug/ml的杀球灵或100ug/ml的氯苯胍直接作用于裂殖子时，显示出很好的效果，但在第二种方法中则未显示抗球虫效力。尼卡巴嗪在
50、以上两种投药方法均无效。作者提出鸡胚是球虫进行体外培养的模型，然而有些药物需在鸡体内转化后方能发挥作用，故鸡胚模型作为筛选抗球虫药是有一定价值的，但真正确定药物剂量和最终确定弃留，最好在鸡体中作鉴别。球虫的抗药性是生产中的课题，国内外不少的寄生虫学者都很注意。我国对这问题近年来也有些研究资料。秦泽云等(1992)应用国内不同地区分离到的柔嫩艾美耳球虫进行了对氯苯胍和克球粉的抗药性检测。每只2周龄雏鸡感染6104个孢子化卵囊，以美国默克公司的抗球虫指数(ACI)作为判断标准。ACI大干160，判为无抗药性；介于160和120之间的，判为有部分抗药性；小于120的则判为具有抗药性。结果表明，克球粉
51、1.2510-4对3株柔嫩艾美耳球史的抗球虫指数分别为182、141和l83，说明克球多对其中一株柔嫩艾美耳球虫已具有部分抗药性。氯苯胍6.6l0-5对3株柔嫩艾美耳球虫的抗球虫指数分别为120、68和193，这表明其中2株已对氯苯胍产生抗药性，比推荐用量3.3l0-5高出一倍已无抗球虫作用。试验结果说明国内存在球虫抗药性问题，有必要作进一步调查。孔繁瑶等(1994)对我国12个省、区的15株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的抗药性进行了调查研究.，文中提出“最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)和相对盲肠卵囊产量(ROP)3项参数指标为综合判定球虫对药物的抗药性（或敏感性）
52、，具体判定标准为，+:轻度抗药；+:中度抗药；+:严重抗药；-:敏感。(1)POAA=（感染用药组GSR-感染不用药对照组CSR）/（不感染不用药对照组GSR-感染不用药对照组CSR）100%。GSR=笼末重/笼初重。POAA50%:有抗药性；50%:无抗药性。(2)RLS=（感染不用药对照组平均病变记分-感染用药组平均病变记分）/（感染不用药对照组平均病变记分）100%。RLS50%:无抗药性；50%:有抗药性。(3)ROP=感染用药组平均卵囊百万数/感染不用药组平均卵囊百万数100%。ROP15%:有抗药性；15%:无抗药性。作者通过15株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的敏感性检测，首次
53、实验证实柔嫩艾美耳球虫的抗药性在我国12个省、区普遍存在。试验提出的结论是:(1)实验证实柔嫩艾美耳球虫对莫能霉素、氨丙啉、克球粉和氯苯胍（均用推荐剂量）的抗药性在我国l2个省、区普遍存在。(2)不用地区虫株的抗药谱不同，抗性程度亦不同。多数虫株对2种或2种以上的抗球虫药有复合抗药性。(3)8株柔嫩艾美耳球虫对杀球灵（Diclazuril）均无抗药性。(4)研究制订了比较适用的检测球虫抗药性的判定方法和标准，即以POAA、RLS和ROP3项参数指标综合判定球虫对药物的抗药性（或敏感性）。作者在讨论中提到，对于现场鸡球虫的抗药性，币同研究者所采用的抗药性划定指标和标准不尽相同。国外采用的判定标
54、准包括(1)卵囊产量:用药组的每克粪便的卵囊数50000，判为有抗药性；或用药组的卵囊总数大于或等于感染不用药对照组的5%，判为有抗药性；或当使用2倍推荐量药物时仍有卵囊产生者判为有抗药性。(2)病变评分:用药组的病变计分比感染不用药对照组减少不足50%者为有抗药性。(3)增重:用药组增重低于不感染不用药对照组增重的75%，划为有抗药性；或用药组增重不显著高于感染不用药对照组为有抗药性，高于感染不用药对照组但低于不感染不用药对照组为有部分抗药性。(4)最适抗球虫活性百分率小于或等于50%，判为有抗药性。(5)粪便评分:用药组平均粪便计分大于或等于感染不用药对照组50%，判为有抗药性。(6)抗球
55、虫指数:如果抗球虫指数小于120，判为有抗药性；介于121159之间，判为有部分抗药性。由于药物在实用条件下不可能完全排除卵囊产生，且目前还没有一种药物（除杀球灵外）在养禽场按规定浓度使用时能完全阻止卵囊产生，所以，若以卵囊产量为标准判定球虫的抗药性，很可能产生抗药性虫株比率增高的后果。试验观察，某些虫株在用药情况下虽仍有一定量的卵囊产生，但不影响增重，且有少量虫体的存在还会有益于鸡免疫力的产生，所以，如固有卵囊排放而判为有抗药性并否定药物效用似亦欠妥；但另一方面，如用药后虽增重正常，但有大量卵囊产生，则存在着病原散播、污染环境的潜在威胁，故增重与卵囊产量二者应作为两个药效指标综合评定。有鉴于
56、此，作者建议以最适抗球虫活性百分率、相对卵囊产量和病变记分减少率3项指标综合判定球虫的抗药性，并拟制了判定标准。李渌等(1986)报道了蒽环类抗生素80334对柔嫩艾美耳球虫作用后裂殖体阶段超微结构的观察。作者观察到用药后，药物对球虫裂殖体起作用，导致裂殖体的自身裂解。同时，在后期大量的白细胞位于盲肠的固有膜层，寄生有虫体的宿主细胞破裂死亡，巨噬细胞向虫体逼近并吞噬。证明80334对球虫有很好的防治效果。对照组，观察到的是密集的，正在发育过程中的裂殖体，大而清晰，巨噬细胞没机会同裂殖体接触，所以就没有上述情况出现。曾明华、沈咏舟(1991)对疑似对氨丙啉和氯甲吡啶酚产生耐药性的柔嫩艾美耳球虫虫
57、株（安徽株）进行了研究。试验研究用的敏感虫株是由上海农业科学院畜牧兽医研究所球虫病组提供，试验用药物氨丙啉（上海红卫兽药厂），氯甲吡啶酚（南京农业大学药理组提供），以球虫引起的死亡率、病变记分、盲肠内容物中的卵囊数、增重率、饲料利用率和抗球虫指数为药效判定指标。试验结果可见，在使用推荐剂量的药物时，接种柔嫩艾美耳球虫敏感株和疑似耐药株，其上述各项指标均有显著差异，从而说明作者从鸡场分离的柔嫩美耳球虫株对氨丙啉和氯甲吡啶酚都产生了耐药性。从实际情况来看，该鸡场应用该两种抗球虫药已有5年以上，由于球虫长期接触这些低浓度药物而产生了耐药性。所以尽管在饲料中添加上述抗球虫药，仍然会因球虫病而造成大批雏
58、鸡发病和死产。（三）、流行情况世界上几乎每一个国家都有鸡球虫病发生，可以说，只要有鸡，就有球虫存在(邹莹，1988)。鸡球虫在我国的分布情况，也证实了这一点。我国从南到北，从东到西均有鸡球虫存在，每年都有球虫病爆发的报道，只有程度上的不同。造成经济损失的大小随各地兽医技术力量的不同而不同，可惜我国无全面精确的统计。我国公开报道的文献，鸡球虫病几乎皆集中在柔嫩艾美耳球虫病和毒害艾美耳球虫病。诚然这两种艾美耳球虫病确是鸡的9种艾美耳球虫中致病力最强的，常引起显著的临诊症状，并导致大批鸡只发生死亡，易为人们所认识和重视。巨型艾美耳球虫病和堆型艾美耳球虫病临诊表现较轻微，死亡率不如上述两种球虫病高，在
59、生产中容易被忽视。据调查，我国华北地区雏鸡爆发柔嫩艾美耳球虫病大多是在36周龄，少数是在2周龄或95日龄（张守发等，1990）。毒害艾美耳球虫病发生在6周龄以上的鸡。曾在北京地区发现110日龄的大中雏发生毒害艾美耳球虫病，死亡率高达10%15%。球虫病的发生季节，一般在每年的49月，而以67月最为严重。我国地域跨度大，球虫病的发生季节，南北方会有所不同。密闭式大规模集约化鸡舍，则长年都可发生。但在温度高、湿度大的季节发病较厉害。鸡球虫的感染率有人作过调查，如左仰贤等(1986)对云南的312只鸡进行球虫调查时，发现有252只鸡感染球虫，总的感染率为80.8%，其中2060日龄鸡感染率为84.1
60、%，90120日龄鸡感染率为83.9%，11.5年的鸡感染率为57.6%。张宝祥等(1986)报道，陕西省400份鸡粪样检查结果，发现感染率为74.75%，感染强度平均为37600个卵囊/1g粪便，范围在1001440000个/1g粪便。调查还发现2月龄以下的雏鸡感染率和感染强度均比成年鸡要高得多。从上可见，鸡球虫在我国的鸡群中的感染率是很高的。（四）、防治迄今为止。国内外对鸡球虫病的防治主要是依靠药物。使用的药物有化学合成的和抗生素两大类，从1936年首次出现专用抗球虫药以来，已报道的抗球虫药达40余种（邹莹，1988），现今广泛使用的不下20种左右。我国养鸡生产上使用的抗球虫药品种，包括进