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血液检查
心丝虫
诊断心丝虫既简单又复杂,是动物寄生虫学中的主要研究对象。感染后尽早确诊寄生虫,帮助及时治疗是研究的重点。
原虫寄生虫
还有其他寄生虫也可能感染各类血细胞。
如,肝簇虫由蜱虫叮咬传播,尤其是斑点钝眼蜱和血红扇头蜱。注意美洲肝簇虫仅存在于北美洲,由斑点钝眼蜱携带。肝簇虫可见于多形核白细胞表面以及骨骼肌中。
其他原虫,如犬巴贝氏虫,则通过血红扇头蜱叮咬传播。犬巴贝氏虫可见于犬红细胞内。
心丝虫诊断
l直接血液检查(载玻片上滴一滴血镜检)。
l改良Knott’s检测(检查血液离心后沉淀物)
l浓缩过滤检测(图一)。
图一:经浓缩过滤并染色后,10x(上)及40x(下)的犬心丝虫微丝蚴。
酶联免疫吸附试验(ELISA)法,如SNAP心丝虫检测仪或SNAP4DxPlus检测,方便在诊所内检测抗原或抗体。适用于血涂片镜检中未找到循环微丝蚴证据时(检测时缺乏繁殖的雌虫),无论患宠有无心丝虫临床症状。
由于快速且经济的特点,寄生虫抗原测试使用最为广泛。但需注意无论检测结果如何,再次确认通常都将使用一种以上的方法。
白细胞层检测步骤详解
1.毛细采样管内吸入全血,确保一端密封。
2.放入微量血细胞比容离心机,转速1500rpm离心5分钟。
3.离心后的毛细管放于显微镜下,低亮度下4x物镜观察白细胞层与血浆之间是否有微丝蚴活动。
4.必要时可在白细胞层处折断毛细管,将血浆滴在载玻片上。加入一滴亚甲基蓝染液,一滴生理盐水并盖上玻片。10x物镜低亮度到中等亮度下辨认微丝蚴。
原虫血涂片检查
临床上观察染色后的血涂片,很容易就能诊断单细胞寄生虫。急性感染的动物的血样是评估的最佳样本。需要更为精准的诊断时(如检测巴贝氏虫),可借由血清诊断或诊断实验室服务辅助。
可使用以下一种染液染色。
l姬姆萨
lQuik-Dip染液(mercedesmedical.com)。
lDip-Quick染液(jorvet.com)。
鉴定血液内原虫的黄金标准是姬姆萨染色,但迪夫快速染色,以及革兰氏三步染色法也在临床中使用普遍,诊断结果同样令人满意。
姬姆萨血涂片染色步骤详解
1.风干血涂片。
2.在甲醇中固定5分钟,再次风干。
3.使用姬姆萨染液染色(染液与蒸馏水比例为1:20)。
4.静置30分钟。
5.用自来水小心冲洗玻片。
6.风干后显微镜下观察。
注:染色后寄生虫细胞质呈蓝色,细胞核呈洋红色。
尿液检测
几种局限于泌尿系统的寄生虫,如肾膨结线虫(Dioctophymarenale)和皱襞毛细线虫(Pearsonemaplica)。确诊此类寄生虫感染,最容易的方法是辨认尿液中的虫卵。
膀胱穿刺采尿并检查样本尿沉渣是否存在虫卵。为避免污染,更推荐膀胱穿刺而非收集自主排出的尿样。检测前应保持样本完整,避免接触昆虫、花粉或其他外界杂质等。
尿沉淀法步骤详解
1.将5-10ml尿液倒入离心管中;转速1500-2000rmp离心5分钟。
2.弃置上清液,用管尖内0.5ml沉淀物作为检测样本。
3.使用木棍或吸管重新混匀样本,滴一滴于载玻片上。
4.盖上盖玻片,显微镜下观察虫卵。
注:作者在镜检前用Sedi-Stain(bd.com)染色沉淀物,效果良好。