本发明属于兽用药物技术领域，具体涉及复合维生素B注射液及其制备方法。
背景技术：
目前，复合维生素B注射液在制备过程中，通常使用吐温-80作为助溶剂且工艺复杂，如中国发明专利(公开号CN1879626A)公开了一种复合维生素B注射液及制备方法：(1)将维生素B1加到注射用水中，搅拌使溶解；(2)将维生素B6溶解于注射用水中，与步骤(1)的溶液混匀，加入氯化铵甲酰甲胆碱，使溶解；(3)将烟酰胺溶于注射用水中，加入无水维生素B2-5′-磷酸钠搅拌使溶解；(4)将右旋泛酸钠、乙二胺四乙酸二钠溶于注射用水，混匀，与步骤(3)制得的溶液混匀；(5)将吐温－80溶于注射用水，与步骤(2)、(4)制得的溶液混匀，调节pH，加水至1000ml。
另外，现有复合维生素B注射液中多使用维生素B2-5′-磷酸钠提供维生素B2成分，但维生素B2-5′-磷酸钠的成本和投料量较高，加大了生产者的原料成本。
技术实现要素：
为了解决复合维生素B注射液制备过程中工艺复杂以及维生素B2-5′-磷酸钠带来的生产成本高的问题，本发明提供一种成本廉价、高效、质量稳定、符合兽药质量标准的复合维生素B注射液及其制备方法。
本发明采用以下技术方案：
复合维生素B注射液，每1000mL注射液的组成为：9.8～10.02g维生素B1、0.98～1.02g维生素B2、0.98～1.02g维生素B6、14.7～15.3g烟酰胺、0.49～0.51g右旋泛酸钠、0.05～0.15gEDTA-2Na、20～40mL三乙醇胺，余量为注射用水。
优选地，每1000mL注射液的组成为：10g维生素B1、1g维生素B2、1g维生素B6、15g烟酰胺、0.5g泛酸钠、0.1gEDTA-2Na、30mL三乙醇胺，余量为注射用水。
复合维生素B注射液的制备方法，包括以下内容：
步骤1：将三乙醇胺加入到60％处方量的注射用水中，注射用水的pH值达到11.2～11.7，加维生素B2，充分搅拌至溶解，得溶液一；
步骤2：依次将处方量的维生素B1、维生素B6、烟酰胺、右旋泛酸钠和EDTA-2Na加入至20％处方量的注射用水中，搅拌至溶解，得溶液二；
步骤3：将溶液二加入到溶液一中，得混合溶液，将混合溶液的pH值调至3.8～5.2，加入余量注射用水；
步骤4：过滤，灌装，高压蒸汽灭菌20min，即得。
优选地，步骤1中加入三乙醇胺后的注射用水的pH值为11.4。
优选地，将步骤3中所述混合溶液的pH值调至4.5。
本发明具有以下有益效果：
1、实现维生素B2代替维生素B2-5′-磷酸酯钠。虽然在水中维生素B2-5′-磷酸酯钠的溶解度大于维生素B2，但维生素B2-5′-磷酸酯钠的成本和投料量较维生素B2高。本发明用维生素B2原料代替了原处方中维生素B2-5′-磷酸酯钠，节约了原料成本。
2、减少有机溶剂的用量。吐温-80作为助溶作用频繁应用于复合维生素B注射液中，本发明的复合维生素B注射液中不含吐温-80，减少了处方中有机溶剂的用量，也能保证产品质量稳定。
3、减少工艺步骤，工艺更简单。与现有技术相比，本发明制备过程更简单。
4、本发明制备的复合维生素B注射液能减轻注射疼痛感，减少动物应激反应。这是因为助溶剂三乙醇胺不仅能使维生素B2充分溶解，还能在使用制剂时，减轻注射造成的疼痛。
附图说明
图1为复方维生素B注射液的四个处方在影响因素高温和光照下的结果图。从左至右依次为处方1(0d)、处方2(0d)、处方3(0d)、处方4(0d)、处方4高温5d、处方4高温10d、处方4光照5d、处方4光照10d。
具体实施方式
下面结合具体实施实例来进一步描述本发明。但是应理解所述实例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
实施例1
每1000mL复合维生素B注射液的组成为：9.8g维生素B1、0.98g维生素B2、0.98g维生素B6、14.7g烟酰胺、0.49g右旋泛酸钠、0.05gEDTA-2Na、20mL三乙醇胺，余量为注射用水。
上述复合维生素B注射液的制备，包括以下内容：
步骤1：将助溶剂三乙醇胺加入到60％处方量的注射用水中，所得注射用水的pH值为11.2，加维生素B2，充分搅拌至溶解，得溶液一；
步骤2：依次将处方量维生素B1、维生素B6、烟酰胺、右旋泛酸钠和EDTA-2Na加入至20％处方量的注射用水中，搅拌至溶解，得溶液二；
步骤3：将溶液二加入到溶液一中，加入余量注射用水，得混合溶液，将混合溶液的pH值调至4.5；
步骤4：用0.22μm滤膜过滤，灌装，高压蒸汽灭菌20min，即得。
实施例2
每1000mL复合维生素B注射液的组成为：10.02g维生素B1、1.02g维生素B2、1.02g维生素B6、15.3g烟酰胺、0.51g右旋泛酸钠、0.15gEDTA-2Na、40mL三乙醇胺，余量为注射用水。
步骤1：将助溶剂三乙醇胺加入到60％处方量的注射用水中，所得注射用水的pH值为11.7，加维生素B2，充分搅拌至溶解，得溶液一；
实施例3
每1000mL复合维生素B注射液的组成为：10g维生素B1、1g维生素B2、1g维生素B6、15g烟酰胺、0.5g右旋泛酸钠、0.1gEDTA-2Na、30mL三乙醇胺，余量为注射用水。
步骤1：将助溶剂三乙醇胺加入到60％处方量的注射用水中，所得注射用水的pH值为11.4，加维生素B2，充分搅拌至溶解，得溶液一；
实施例4不同处方的复合维生素B注射液的制备
根据助溶剂的不同分为四个处方，每个处方每1000mL注射液的原料组成见表1。
表1不同处方中原料的种类和用量
4.1复合维生素B注射液的制备
上述四个处方的复合维生素B注射液按照实施例3的制备方法进行制备。
4.2复合维生素B注射液的质量考察
(1)性状
四个处方制备的复合维生素B注射液均为黄色带绿色荧光的澄明或几乎澄明的液体。
(2)pH值
通过pH计测定，四个处方制备的复合维生素B注射液的pH值在范围3.8～5.2内。
(3)有效成分含量测定
①维生素B1
精密量取制得的注射液适量(相当于维生素B150mg)，用水稀释成50mL，加盐酸2mL，煮沸，立即滴加硅钨酸试液4mL，继续煮沸2分钟，用80℃恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液(1→20)20mL，分次洗涤，再用水10mL洗涤一次，最后用丙酮洗涤两次，每次5mL，在80℃干燥至恒重，精密称定，所得沉淀重量与0.1939相乘，即得供试量中含有C12H17ClN4OS·HCl的重量。
②维生素B2
避光操作。精密量取制得的注射液适量(相当于维生素B210mg)，置1000mL棕色容量瓶中，加10％醋酸溶液2mL与14％醋酸钠溶液7mL，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在444nm的波长测定吸光度，按C17H20N4O6的吸收系数(E1％1cm)为323，计算，即得。
(4)影响因素考察
目的：考察制剂的合理性与生产工艺及包装条件
考察内容：外观性状、pH值、有效成分含量。
表2不同处方制产品的考察结果
实施例5临床应用
5.1试验用药物
分别为按照实施例3制备的复合维生素B注射液和市场购买的复合维生素B注射液(河南普旺生物工程有限公司，规格：10mL)。
5.2试验动物
随机挑选有消化不良、厌食、被毛粗乱症状的约10kg的保育猪33头。
5.3试验方法
将33头保育猪随机分成3组，每组11头。第1、2组分别给猪肌注射实施例1处方四制备的复合维生素B注射液和市场购买的复合维生素B注射液，注射量：2mL/头；第3组为空白对照，同量肌注生理盐水。每组每日治疗2次，连续治疗2d。
5.4观察指标
临床症状：每天观察和记录各组饮食、粪便、精神等临床症状。
5.5疗效评定标准
无效：与治疗前症状一致
有效：精神状态差，不爱运动，食欲好转。
痊愈：精神状态好，被毛光亮，活泼，呼吸、食欲恢复正常。
5.6结果
结果显示实施例3制备的复合维生素B注射液和市售的复合维生素B注射液两个治疗组临床效果没有显著性差异(P>0.05)，两个治疗组与空白对照组之间有显著性差异(P<0.05)，结果表明，维生素B2和维生素B2-5’-磷酸酯钠作为复合维生素B注射液的主要原料在临床效果上没有显著性区别，但性价比上前者比后者更有优势。
以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，仅仅用以解释本发明，并非限制本发明实施范围，对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书中所公开的技术内容，通过置换或改变的方式轻易做出其它的实施方式，故凡在本发明的原理及工艺条件所做的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。