原虫病实验室诊断技术

浸湿的棉花的小培氏皿,将抹片标本面向下,架于皿上静置一小时左右,取下待干,再用甲醇固定,后按姬氏染色法染色检查。粪便内原虫检查家畜粪便内可检查到的寄生原虫有球虫、组织滴虫、隐孢子虫、贾第鞭毛虫、毛滴虫和结肠小袋纤毛虫等。球虫和隐孢子虫的检查应取新鲜排出的粪便,按蠕虫虫卵检查的方法进行检查(见蠕虫病实验室诊断技术),即可查到其卵囊。

利用实验室技术检查病料诊断原虫病的方法。寄生于家畜的原虫,其寄生部位各异,根据其寄生部位的不同,其采用的病料和检查的方法也各异。

在血液中可查到的病原原虫,马有巴贝斯虫和锥虫,牛、羊有巴贝斯虫、泰勒原虫、锥虫,猪有巴贝斯虫和锥虫,家禽有锥虫、住白细胞虫、疟原虫、血变虫等。

血液内的原虫,可采血直接检查,一般用压滴法直接镜检或制成厚或薄的血液抹片,染色检查。必要时可先进行集虫法处理。

是采取较大量的血液,并加抗凝离心沉淀。血液中的锥虫或感染有巴贝斯虫的红细胞,均较正常红细胞为轻,而聚集于管底的红细胞沉淀的表层,采取表层沉淀制成血涂抹片,染色后显微镜检查。

此法适用于血液中锥虫的检查,在载玻片上滴一滴生理盐水,采血一滴与生理盐水相混,覆以盖玻片,即可放在显微镜下检查。冬季应适当的给载玻片加温或用显微镜载物台保温设备,在镜下红细胞间可见到活动的虫体。

本法适用于血液寄生的伊氏锥虫、巴贝斯虫、泰勒原虫、住白细胞虫、血变虫、疟原虫等的检查。采血一滴,于洁净载玻片的一端,按常规推制成血片,待干,甲醇固定,而后用姬氏染色法或瑞氏染色法染色。染色后在显微镜下检查。

寄生于家畜生殖道的原虫有马媾疫锥虫和牛的胎儿毛滴虫。

检查材料主要采取公马的尿道和母马的阴道刮取物,应用长柄锐匙插入尿道或阴道,刮取病料混入适量的生理盐水,也可用长柄镊子,镊取一小块消毒纱布,用生理盐水浸湿,插入尿道或阴道中擦试,取出后,将纱布上附着的虫体,洗入无菌生理盐水中,将其离心沉淀后,取沉淀物检查。在病畜出现皮下浮肿或丘疹症状时,则可用消毒注射器,插入浮肿部皮下,注射器内先吸入少量2%柠檬酸钠溶液以防混入的血液凝固,而后抽取淋巴液,检查。以上病料均可用压滴法或抹片染色检查。

牛胎儿毛滴虫存在于患病母牛的阴道与子宫分泌物,公牛的包皮鞘或流产出胎儿的羊水,羊膜和第四胃内容物中。可将直径1厘米的玻璃管插入母牛阴道,用橡皮洗耳球接于一端,抽吸其粘液,公牛则可用加温至30~35℃的生理盐水,用注射针筒注入包皮腔,按摩腔外再将冲洗液收集入广口瓶中,在流产胎儿则解剖并收集其第四胃内容物。将收集物制成压滴标本,或离心沉淀后吸取沉渣做压滴标本或抹片,显微镜下检查。在做染色标本检查时,多采用甲醛蒸气固定法,即将检查材料,涂于载玻片使成一薄层。用置有20%甲醛浸湿的棉花的小培氏皿,将抹片标本面向下,架于皿上静置一小时左右,取下待干,再用甲醇固定,后按姬氏染色法染色检查。

家畜粪便内可检查到的寄生原虫有球虫、组织滴虫、隐孢子虫、贾第鞭毛虫、毛滴虫和结肠小袋纤毛虫等。

这些虫除包囊期外,多数具有运动性,因此可以直接采取粪便,在载玻片上与生理盐水混匀成一薄层,勿干,直接放显微镜下检查,常可见虫体在运动,欲观察静止的虫体,可在粪抹片上,滴加稀碘液,虫体即停止运动并着色。

有些原虫寄生于动物体的不同组织内,在死后剖检时,按其寄生部位,取一小块组织,做抹片,触片固定后制成切片。此外泰勒原虫病可选取肿大的体表淋巴结,取淋巴穿刺物。弓形虫病可采取腹水进行检查。

有些原生动物病,在畜体内虫体较少,直接检查难以发现,可根据虫体的寄生宿主和传染途径的特点,采取带有虫体的病料,按一定的途径,接种于易感动物,观察其发病情况,确定其存在。

试验动物可选用小鼠、大鼠、豚鼠、兔或犬,但以小鼠易感性强,发病快。可采取病畜的适量抗凝血液,立即注射于小鼠腹腔,接种后小鼠常在2~3天后即可在外周血液中查到锥虫,连续观察一个月。

马媾疫锥虫对实验动物的感染比较困难,仅可将含虫病料悬液,接种于公家兔的睾丸实质中,如有锥虫存在,经1~2周后,兔的阴囊、阴茎、睾丸等部发生水肿,并在水肿液中可检出虫体。

以病牛的阴道分泌物或包皮冲洗液为病料,接种于妊娠豚鼠的腹腔内,接种后20天内可使豚鼠发生流产,并在流产胎儿的胎盘和消化道内见有虫体。

以可疑病畜的肺、淋巴结、脑、脾或肝组织,注射于小鼠的腹腔内,一般在4~5天后小鼠发病,死后剖检,有大量腹水。并在腹水内见有滋养体。

将可疑感染有孢子虫动物的粪便,收集其卵囊,饲喂小鼠。5~7天后即可将小鼠剖杀。取出小肠肠段做病理切片检查肠粘膜表面有无虫体寄生。

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