本发明属于畜牧药物制剂领域，具体涉及一种宠物用伊维菌素吡喹酮咀嚼片及其制备方法。
背景技术：
目前，我国对犬寄生虫病的防治原则仍为“预防为主，防治结合”。用药物杀灭犬肠道内寄生虫是一项极其重要的防治措施。驱虫药物要选用高效广谱、使用方便的药物。蛔虫的有效治疗药物：左旋咪唑、甲苯咪唑、芬苯达唑和伊维菌素；绦虫的有效治疗药物：吡喹酮、丙硫苯咪唑、氯硝柳胺、甲苯咪唑；钩虫的有效治疗药物：噻嘧啶、硫苯咪唑。另外，宠物用驱虫药还有氟普尼尔、双羟萘酸噻嘧啶、吡喹酮、依西太尔和双甲脒等。
伊维菌素(ivermectin，ivm)，是一种广谱、高效、低毒的大环内酯类抗寄生虫药，在极低剂量具有较强的杀虫活性，且一次投药可同时有效驱杀畜禽的多种体内外寄生虫，包括：心丝虫、胃肠道线虫、肺线虫和蜱、螨、虱子、蚤类等体外寄生虫，是目前世界上最为优良，使用最广的一类高效抗寄生虫药，在兽医临床上应用十分广泛。伊维菌素对体内外寄生虫主要是体内线虫和节肢动物具有良好的驱杀作用。其驱虫作用机理在于促进突触前神经元释放γ—氨基丁酸(gaba)，从而打开gaba介导的氯离子通道。伊维菌素对无脊椎动物神经和肌肉细胞位于gaba介导位点附近的谷氨酸介导的氯离子通道也具有选择性和高亲和力，从而干扰神经肌肉间的信号传递，使虫体松弛麻痹，导致虫体死亡或被排出体外。线虫的抑制性中间神经元和兴奋性运动神经元是其作用部位，而节肢动物的作用部位是神经肌肉接头。
吡喹酮(praziquantel，pzq)为杂环吡嗪异喹啉衍生物，毒性低、疗效高、疗程短，具有广谱抗血吸虫和抗绦虫作用，对绦虫、华支睾吸虫、肺吸虫、姜片吸虫、肝片吸虫效果显著。对各种绦虫的成虫具有极高的活性，对幼虫也具有良好的活性。吡喹酮对绦虫的准确作用机理尚未确定，可能是其与虫体包膜的磷脂相互作用，结果导致钠、钾与钙离子流出。在体外体浓度的吡喹酮似可损伤绦虫的吸盘功能并兴奋虫体的蠕动，较高浓度药物则可增强绦虫链体(节片链)的收缩(在极高浓度时为不可逆收缩)。此外，吡喹酮可引起绦虫包膜特殊部位形成灶性空泡，继而使虫体裂解。对血吸虫和吸虫，吡喹酮可能由于增加钙离子流进虫体而直接杀死寄生虫，随后形成灶性空泡并被吞噬。
综上所述，在当前我国宠物寄生虫混合感染比较严重的情况下，研制出一种价格低廉、适口性好的犬用复方驱虫药，可为我国宠物犬的体内外寄生虫感染提供一种有效防治手段。
技术实现要素：
本发明的目的是将治疗动物线虫及体外寄生虫的伊维菌素与治疗绦虫感染的吡喹酮联合，研制出一款宠物犬专用咀嚼片，扩大临床抗虫谱，为我国宠物临床提供一种安全有效、质量稳定可控、使用方便的制剂。伊维菌素吡喹酮咀嚼片作为固体制剂，相比溶液剂主成分更稳定，同时方便宠物主人给药，可用于有效防治宠物犬类消化道寄生虫感染。
为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：
一种宠物用伊维菌素吡喹酮咀嚼片，是以伊维菌素和吡喹酮为有效成分的兽用咀嚼片。
所述咀嚼片中包括下述质量百分含量的活性成分：伊维菌素0.2-0.3％，吡喹酮6-8％。
所述咀嚼片中还包括以下辅料成分：黏合剂2-5％，崩解剂2-6％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂。
其中，所述伊维菌素的含量具体可为0.25％；所述吡喹酮的含量具体可为6.25％，所述黏合剂的含量具体可为2％、3％、5％，所述崩解剂的含量具体可为2％、4％、6％。
具体的，所述咀嚼片由下述1)—9)中任一所述的质量百分含量的物质组成：
1)伊维菌素0.25％，吡喹酮6.25％，黏合剂2.0％，崩解剂2.0％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂；
2)伊维菌素0.25％，吡喹酮6.25％，黏合剂3.0％，崩解剂4.0％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂；
3)伊维菌素0.25％，吡喹酮6.25％，黏合剂5.0％，崩解剂6.0％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂；
4)伊维菌素0.25％，吡喹酮6.25％，黏合剂2.0％，崩解剂4.0％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂；
5)伊维菌素0.25％，吡喹酮6.25％，黏合剂3.0％，崩解剂6.0％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂；
6)伊维菌素0.25％，吡喹酮6.25％，黏合剂5.0％，崩解剂2.0％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂；
7)伊维菌素0.25％，吡喹酮6.25％，黏合剂2.0％，崩解剂6.0％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂；
8)伊维菌素0.25％，吡喹酮6.25％，黏合剂3.0％，崩解剂2.0％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂；
9)伊维菌素0.25％，吡喹酮6.25％，黏合剂3.0％，崩解剂4.0％，抗氧剂0.02％，润滑剂1％，其余为赋形剂。
本发明中所述黏合剂可选自聚维酮k30(pvpk30)，使用前配制成质量浓度3％的水澄明溶液。
本发明中所述崩解剂可选自羧甲基纤维素钠(cmc-na)。
本发明中所述抗氧剂可选自二丁基羟基甲苯，使用时以质量浓度为1％的乙醇溶液加入。
本发明中所述润滑剂可选自硬脂酸镁。
本发明中所述赋形剂由乳糖和微晶纤维素组成，两者的质量比为(4-6)：1，具体可为4:1、5:1、6:1。
本发明还提供了上述宠物用伊维菌吡喹酮咀嚼片的制备方法。
所述宠物用伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备方法，包括下述步骤：
1)除抗氧剂和黏合剂外，其余原辅料均过65目筛，提前配制黏合剂pvpk30的水溶液，浓度为3％；
2)除润滑剂和抗氧剂外，所有物料等量递增混匀；
3)向混匀后的物料中加入适量黏合剂制软材，并喷洒抗氧剂的乙醇溶液；
4)将制好的软材在20目筛网中制粒，湿颗粒应大小整齐，色泽均匀，无长条；
5)将制好的湿颗粒平摊于托盘上，物料厚度不超过2cm，置于热风循环烘箱中，控制干燥温度在50～60℃左右，干燥后取出烘盘，冷却；
6)将干燥冷却好的颗粒用20目筛网整粒，制出大小均一的颗粒；
7)加入润滑剂，充分混匀，压片；
8)双铝膜塑封包装，印码，装箱。
本发明提供的宠物用伊维菌吡喹酮咀嚼片，其给药方案为内服，一次量，每10kg体重，犬1片(伊维菌素0.2mg/kg.bw.，吡喹酮5mg/kg.bw.)。其疗程可根据实际情况适当调整。
本发明的再一个目的是提供一种用于预防和/或治疗宠物犬的消化道寄生虫感染的药物组合物。
所述药物组合物的活性成分由伊维菌素和吡喹酮组成，其中，伊维菌素和吡喹酮的质量比为1：20-40，优选比例为1:25。
所述药物组合物还包括药学上可接受的载体，所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、黏合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
所述药物组合物可以制成注射液、悬浮剂、粉剂、片剂、颗粒剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明还提供了上述宠物用伊维菌吡喹酮咀嚼片和药物组合物的应用。
所述应用为宠物用伊维菌吡喹酮咀嚼片和药物组合物在制备预防和/或治疗犬类消化道寄生虫感染药物中的应用。
所述消化道寄生虫选自下述任意一种：线虫、绦虫、吸虫。
所述线虫包括蛔虫、钩虫、鞭虫。
所述蛔虫具体可为犬弓首蛔虫、狮弓蛔虫等，所述钩虫具体可为犬钩口线虫、狭头钩口线虫、巴西钩口线虫等。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1)将治疗动物线虫及体外寄生虫的伊维菌素与治疗绦虫感染的吡喹酮联合，扩大临床抗虫谱，减少给药次数。
2)本发明为一款宠物犬专用咀嚼片，口感风味佳，给药方便。
3)本发明的伊维菌素吡喹酮咀嚼片是采用湿法制粒压片而得，生产工艺简单，易于实现产业化。
附图说明
图1为各组犬只粪便中蛔虫虫卵计数结果图。
图2为各组犬只粪便中钩虫虫卵计数结果图。
图3为各组犬只粪便中绦虫虫卵计数结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
本发明提供了一种治疗宠物线虫、体外寄生虫及绦虫感染的复方咀嚼片，将伊维菌素与吡喹酮联合，扩大临床抗虫谱，为我国宠物临床提供一种安全有效、质量稳定可控、使用方便的制剂。
本发明的活性组分为伊维菌素和吡喹酮。伊维菌素对线虫和体表节肢动物驱杀效果好，临床应用剂量约为0.2mg/kg体重，吡喹酮对吸虫和绦虫作用较好，用药剂量为5mg/kg体重，因此按照此比例制成伊维菌素含量为0.2-0.3％(w/w)，吡喹酮含量为6-8％(w/w)，利用适宜的辅料制成宠物用咀嚼片，包括使用赋形剂、黏合剂、崩解剂、抗氧剂、润滑剂等辅料。
赋形剂：从淀粉、乳糖(一水)、微晶纤维素(mcc)、葡萄糖粉、蔗糖、甘露醇等辅料中筛选一种或两种作为填充剂，要求获得的片剂色泽均匀、光洁美观、无杂斑异物，可压性良好且其片重差异在规定范围之内。在筛选过程中，淀粉制备的片剂可压性差，微晶纤维素制备的片硬度不合格，而乳糖制备的片外观良好，但硬度过大，用糖粉和蔗糖制备的片光滑但极易吸潮，最终使用乳糖和微晶纤维素质量比4-6:1的混合物制备的片色泽均匀，表面光滑，且其硬度和溶出度均达到要求，因此选择乳糖和微晶纤维素复配作为赋形剂。
黏合剂：对淀粉、羟丙甲纤维素e5、聚乙稀吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠等常用黏合剂的乙醇或水溶液进行筛选，配成合适的浓度作为复方片剂的黏合剂。其评价指标包括黏合剂的用量、所制软材的挤出特性、复方片剂的脆碎度和硬度等。经筛选后选用聚维酮k30作为黏合剂。
崩解剂：从羧甲基淀粉钠(cms-na)、羧甲基纤维素钠、聚维酮k30、交联聚维酮(pvpp)、吐温80等常用崩解剂中筛选出一种或两种的混合物，作为复方片剂的崩解剂。其评价指标为片剂的崩解时限与溶出量。经筛选后选用羧甲基纤维素钠作为黏合剂。
抗氧剂：从常用抗氧化剂维生素e、丁基羟基茴香醚(bha)、二丁基羟基甲苯(bht)、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯等中筛选出与处方中其它成分无配伍禁忌的一种作为抗氧剂。经筛选后选用二丁基羟基甲苯(bht)作为抗氧化剂。
润滑剂：从常用硬脂酸镁、硬脂酸锌和滑石粉中筛选合适的润滑剂，要求与处方中其他成分无配伍禁忌。经筛选后选用硬脂酸镁作为润滑剂。
实施例1、伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备
本发明含有伊维菌素和吡喹酮的咀嚼片配方如下(100g)：
1)除抗氧剂和黏合剂外，其余原辅料均过65目筛；将黏合剂pvpk30配制成质量浓度为3％的水溶液；
3)向混匀后的物料中加入适量黏合剂制软材，并喷洒抗氧剂的乙醇溶液(质量浓度1％)；
7)加入润滑剂，充分混匀，压片。
实施例2、伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备
实施例3、伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备
实施例4、伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备
实施例5、伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备
实施例6、伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备
实施例7、伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备
实施例8、伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备
实施例9、伊维菌素吡喹酮咀嚼片的制备
1)除抗氧剂和黏合剂外，其余原辅料均过65目筛；将黏合剂pvpk30配制成质量浓度为1％的水溶液；
上述实施例1-9制备的片剂经质量检测，均符合要求。复方片剂的检查结果显示，其外观为白色，硬度介于60-80n之间，片重为0.80g，片重差异±3.12％，伊维菌素和吡喹酮的含量检测均在99.0％以上，其在45min的累积溶出度均大于90.0％。
实施例10、本发明制备的咀嚼片治疗犬体内寄生虫感染的临床疗效试验
1试验材料
1.1试验材料与试剂
麦克马斯特氏虫卵计数板，量筒(100ml)，塑料平皿，玻璃棒，烧杯(100ml)，一次性吸管，载玻片，盖玻片，氯化钠，60目尼龙筛网等。
1.2试验药物
受试药物：伊维菌素吡喹酮咀嚼片(批号为20170502，同实施例9制备的咀嚼片)，每片含伊维菌素2mg与吡喹酮50mg，由中国农业大学动物医学院研制，佛山东方澳龙制药有限公司生产。
对照药物1：害获灭(1％伊维菌素注射液)(批号为bb276/17)，无色透明略带粘稠的溶液，购自梅里亚动物保健有限公司。
对照药物2：爱普锐克(吡喹酮片)(批号为20170728)，规格：100mg，购自北京中农华威制药股份有限公司。
1.3试验动物
在某狗厂收集自然感染寄生虫的犬90只，将患病犬随机分为6组，分别为空白对照组、害获灭对照组、爱普锐克对照组、低剂量组、推荐剂量组(40只)和高剂量组。
试验动物需满足以下入选标准：临床表现有消化道寄生虫病症状，经镜检后确认同时感染线虫和绦虫两类寄生虫，且近期2个月内未使用任何抗寄生虫药物。
1.4试验仪器
光学显微镜上海光学仪器厂
电子天平奥豪斯仪器有限公司
2、试验方法
2.1试验前筛查
进入狗厂后，首先进行犬消化道蠕虫自然感染状况调查，筛选自然感染蠕虫的犬只。调查内容包括品种、年龄、性别、体重，临床症状，所感染寄生虫种类及其每克粪便中的虫卵数(eggspergram；e.p.g)。根据犬的临床症状，如消瘦、腹泻、粪便排虫情况等，逐只取犬清晨的新鲜粪便样品进行虫卵检查。确诊为蠕虫(包括犬弓首蛔虫、狮弓蛔虫、犬钩口线虫、毛首线虫、绦虫)感染，且最近两个月未使用任何抗蠕虫药物的犬作为试验用犬。试验犬于试验期间不使用其他抗寄生虫药物、血清或疫苗。符合上述条件的犬共计90只，包括2月龄以上各年龄阶段、品种的犬，雌、雄兼有。详细观察并记录每只犬的基本情况，包括品种、年龄、体重、临床症状、生活习性、饲养管理状况等。试验用犬的品种、数量及性别等情况见表1。
表1患犬基本情况
2.2试验分组及给药
根据《宠物用药物靶动物安全性试验指导原则》，筛选出符合条件的90只试验用犬，随机分为6组，分别为受试药物试验组(低、中、高剂量组)，对照药物组(1％伊维菌素注射液组和吡喹酮片组)以及空白对照组，除推荐剂量组40只动物外，其余每组10只。所有试验组进行一次给药，ivm给药剂量为0.2mg/kgb.w.，pzq给药剂量为5mg/kgb.w.。自制复方片剂和爱普锐克片经口服给药，害获灭注射液为皮下注射，空白对照组不给药。具体分组及给药见表2。
表2分组及给药剂量
在给药后第1-5天每天观察犬只饮食、饮水、精神状态及排虫情况，并分别在给药前0天和给药后第3、5、7、10、14、21天采集粪便样品进行镜检，记录给药后虫卵减少情况，判断是否治愈。
2.3镜检
在给药当天(第0d，给药前)和给药后第3、5、7、10、14、21天清晨分别收集每只犬的新鲜粪便，混合均匀后，用麦克马斯特氏计数法对粪便中的每种虫卵分别计数，计算每克粪便中虫卵数(e.p.g.)，记录结果。并计算每种虫卵减少率、虫卵相对减少率以及虫卵转阴率。各计算公式如下：
虫卵减少率％＝[(给药前虫卵数-给药后虫卵数)/给药前虫卵数]*100％
虫卵相对减少率％＝[(不给药组虫卵数-给药组虫卵数)/不给药组虫卵数]*100％
虫卵转阴率％＝(虫卵检查阴性动物数/受试动物数)*100％
2.4虫卵检查及鉴定方法
采集试验用犬新鲜粪便1g，加饱和食盐水10ml，用玻璃棒混匀后，用60目尼龙筛网过滤，滤液注入试管中，加饱和食盐水至试管充满，上面覆以盖玻片，并使液体与盖玻片接触，其间不留气泡，直立静置30min后取下盖玻片，覆于载玻片上在显微镜下观察。发现虫卵后进行虫卵鉴定，并用麦克马斯特氏法分别计算每只犬每种蠕虫的e.p.g.。
主要根据虫卵的大小、形态、颜色、卵壳的薄厚及光滑程度等，参照资料进行鉴定。
2.5虫卵计数方法
取新鲜粪便2g放入100ml烧杯中，先加入10ml饱和食盐水搅匀，再加饱和食盐水50ml，混匀后吸取粪液，注入计数室，置于显微镜台上，静置1-2min后，在目镜下计数，最后求两个刻室中虫卵数的平均数，乘以200即为每克粪便中的虫卵数(e.p.g.)。
2.6疗效判定标准
①治愈：寄生虫感染所致的临床症状(腹泻、消瘦、粪便形状改变或呕吐等)消失，粪便中蠕虫虫卵减少率≥90％，试验动物的体征恢复正常。
②有效：病情好转，粪便的性状接近正常(粪便基本成形)，粪便中蠕虫虫卵减少率>60％，动物的体征好转但未完全恢复正常。
③无效：用药后，动物病情无明显缓解甚至加重；粪便不成形，粪便中蠕虫减少率<60％，动物仍有腹泻、呕吐等临床表现。
3结果与分析
3.1临床观察
动物临床现象观察结果见表3。在给药及采样过程中，密切观察各试验组犬的精神状态、饮食欲及活动状态等临床症状，未发现明显的不适反应，且未见全身或局部过敏或刺激性反应，个别犬只的腹泻现象消失。
3.2粪便中虫卵检查结果
给药前和给药后3、5、7、10、14d受试犬只粪便的虫卵计数情况分别见表4至表8，虫卵减少率和相对虫卵减少率见表9，各类虫卵减少率、相对减少率及疗效判定结果见表10，虫卵转阴率见表11。给药后每只动物粪便中不同虫卵计数情况见表11。
由表可知，对于线虫，除低剂量组一只受试犬外，伊维菌素吡喹酮咀嚼片组(低、推荐和高剂量组)和害获灭组受试犬只在给药5d后，粪便中均已检测不到蛔虫、钩虫和鞭虫虫卵，虫卵减少率为100％，驱除率良好，临床疗效结果判定为治愈；对于绦虫，伊维菌素吡喹酮咀嚼片的驱除效果优于爱普锐克，除低剂量组一只受试犬外，伊维菌素吡喹酮咀嚼片组给药5d后均已检查不到虫卵，虫卵减少率为100％，临床疗效判定为治愈，而爱普锐克组5d时虫卵数最少，之后感染复发，虫卵数量上升，虫卵减少率为29.17％，临床疗效判定为无效。各组线虫和绦虫虫卵转阴率分别为：空白组0％和0％、害获灭组100％和0％、爱普锐克组0％和50％、低剂量组80％和57.1％、推荐剂量组100％和100％、高剂量组100％和100％。
综上所述，对犬线虫感染，推荐剂量下的受试药物和害获灭的虫卵减少率均为100％，驱除率良好，临床疗效判定为治愈；对于犬绦虫感染，推荐剂量下的受试药物的治愈率要高于爱普锐克，分别为100％和29.17％，临床疗效分别判定为治愈和无效。伊维菌素吡喹酮咀嚼片对线虫、绦虫和吸虫混合感染具有良好的驱除效果，可以有效治愈犬消化道寄生虫感染。
表3动物临床现象观察结果
表4各组犬只粪便中蛔虫虫卵计数结果
表5各组犬只粪便中钩虫虫卵计数结果
表6各组犬只粪便中鞭虫虫卵计数结果
表7各组犬只粪便中绦虫虫卵计数结果
表8各组犬只粪便中吸虫虫卵计数结果
表9各组犬只虫卵减少率和相对减少率结果
注：-表示无意义
表10各组犬只各类虫卵减少率及相对减少率结果
表11各组犬只虫卵转阴率
表11给药后每只动物粪便中不同虫卵计数情况
4、结论
由上述结果可知，虫卵减少率各组分别为：空白对照组-50％、害获灭组100％、爱普锐克组-47.5％、低剂量组47.06％、推荐剂量组100％、高剂量组100％。各组线虫和绦虫虫卵转阴率分别为：空白组0％和0％、害获灭组100％和0％、爱普锐克组0％和50％、低剂量组80％和57.1％、推荐剂量组100％和100％、高剂量组100％和100％。三种药物给药后均未见全身或局部过敏或刺激性反应，表明三种药物在推荐剂量下使用具有良好的安全性。
综上所述，对犬线虫感染，受试药物和害获灭的均为100％，具有良好的治疗效果；对于犬绦虫和吸虫感染，受试药物的治愈率要高于爱普锐克，分别为100％和29.17％。结果说明伊维菌素吡喹酮咀嚼片可有效治疗由线虫和绦虫感染的犬寄生虫病，且在推荐剂量下使用对患犬具有良好的安全性。