典型的抗体配方包含1、ADC;2、赋形剂(糖或盐);3、缓冲液;4、表面活性剂(吐温);5、其他(金属离子螯合剂)。下图仔细列举了14个ADC的制剂配方。
可以发现,即使相同的linker-payload,不同的抗体最终用的制剂buffer也会有差异。下面我们按照配方如何筛选、如何评价逐一介绍。
ADC制剂筛选过程及评价指标分析
3.1PH和缓冲buffer
已上市的14个ADC中,制剂PH在6.0-6.9之间的最多,达到7个;5.0-5.9和7.0-7.9之间的分别有3个;此外有一个PH值用的8。
在缓冲buffer种类选择时,以组氨酸盐最多,14个中有5个为组氨酸,3个磷酸盐,2个柠檬酸盐,2个琥珀酸盐,氨丁三醇、MES各一个。
那么问题来了,缓冲buffer种类繁多,能缓冲的PH范围也不尽相同,那以什么指标来评价哪种buffer是该ADC最合适的buffer呢?
通用做法是这样的,根据不同缓冲对的缓冲范围,从4.0-8.0设置pH梯度,配成临床打算用的ADC浓度(比如爱地希10mg/ml),25℃&40℃放置7天,分别于第0天,第1天,第3天,第7天观察、取样。肉眼观察澄清度情况、BCA检测浓度、SEC-HPLC检测纯度、DSC检查热稳定性等。
当确定好适宜pH范围后,可以选择该PH下的两种缓冲剂,比如适宜pH为6.0,就可以选择30mM组氨酸或者20mM柠檬酸作为制剂的缓冲剂,然后进行下一步的筛选。
3.2表面活性剂
表面活性剂主要通过降低表面张力来减少聚体的产生。14个ADC中,有7个用了0.01-0.02%(W/V)的吐温80,有3个用了0.01-0.02%(W/V)的吐温20,1个用了0.03%的吐温80,1个用了0.1%的吐温20,另外2个则未添加表面活性剂。
那么表面活性剂通常采用什么手段筛选,什么指标评价呢?
通常处理方法:在25℃下,将样品在轨道振荡器上以250-300rpm的速度水平搅拌8小时或更长,搅拌后,部分样品会产生聚集,溶液变浑浊。
参考检测方法:肉眼观察溶液澄清度,浓度测定,SEC-HPLC检测聚集体含量,浊度计检测浊度,HIAC自动液体颗粒计数器检测粒子数。
3.3赋形剂筛选
14个ADC制剂中,主要通过添加各种糖或者盐作为赋形剂。
设置不同的糖和盐时,组合和种类也非常多,可以先取10%的海藻糖,9%的蔗糖,5%山梨醇等作为初步筛选基础配方,如果要组合,则二者含量各自减半设置。4℃、25℃&40℃放置14天后,肉眼观察澄清度情况、BCA检测浓度、SEC-HPLC检测纯度、DSC检查热稳定性、CIEF检测酸碱峰含量变化等。
3.4冻干工艺
评价指标上,除了上述基础配方的评价指标外,需增加外观性质评价和含水量测试。
—小结—
参考文献:
[1]KavianiniaI.AnInsightintoFDAApprovedAntibody-DrugConjugatesforCancerTherapy[J].Molecules,2021,26.