摘要：本试验旨在研究饲粮添加不同水平的发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭产蛋性能、蛋品质、肠道消化酶活性及免疫功能的影响。选用35周龄龙岩山麻鸭750只，随机分为5组，每组6个重复，每个重复25只鸭。对照组饲喂基础饲粮，试验组分别在基础饲粮中添加2%、4%的发酵混合饲料和2%、4%的发酵酒糟。试验期3个月。结果表明：1、与对照组相比，饲粮添加2%和4%发酵酒糟显著升高了蛋鸭的日产蛋重(P＜0.05)，饲粮添加4%发酵酒糟显著降低了蛋鸭的料蛋比(P＜0.05)，饲粮添加4%发酵酒糟显著升高了鸭蛋中蛋清重和蛋黄颜色(P＜0.05)，饲粮添加4%发酵混合饲料和4%发酵酒糟显著降低了蛋鸭肌胃和腺胃pH(P＜0.05)，饲粮添加4%发酵混合饲料显著提高了蛋鸭空肠脂肪酶和糜蛋白酶活性(P＜0.05)，饲粮添加2%和4%发酵酒糟显著提高了蛋鸭空肠糜蛋白酶和胰蛋白酶活性(P＜0.05)，饲粮添加4%发酵酒糟显著升高了蛋鸭空肠黏蛋白；2、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的mＲNA相对表达量以及SIgA含量(P＜0.05)。综上所述，发酵酒糟对蛋鸭产蛋性能、蛋品质、肠道消化酶活性和免疫功能优于发酵混合饲料，且以4%的添加水平效果更好。
关键词:发酵饲料；蛋鸭；产蛋性能；消化酶活性；肠道免疫
近年来，抗生素的药物残留问题及其危害日益突出，禁用抗生素已是大势所趋。因此，研发饲用抗生素替代品成为动物营养领域的一个研究热点。发酵饲料是利用益生菌对饲料进行发酵得到的一种新型微生物类饲料，其在生产过程中微生物发酵可以产生大量有益于动物健康的代谢产物，具有提高饲料利用率、改善肠道健康等特点。因此，发酵饲料可以在一定程度上减少养殖过程中饲用抗生素的使用，从而降低养殖成本。目前，关于蛋鸭养殖中使用发酵饲料的信息很有限，研究发酵饲料在蛋鸭饲粮中的合理应用技术对蛋鸭健康养殖具有重要意义。
1材料与方法
1.1试验设计与饲养管理
试验在广东省农业科学院动物科学研究所原花都蛋鸭实验基地进行，试验选用35周龄的福建龙岩山麻母鸭750只，随机分为5个组，每组6个重复，每个重复25只鸭。试验鸭地面平养(水域面积∶陆地面积为1:3)。蛋鸭产蛋率在80%以上时开始正式试验，试验期间自由采食和饮水，每日光照16h，试验期为3个月。
1.2试验饲粮
试验采用玉米－豆粕型饲粮。实测玉米、小麦麸和豆粕的粗蛋白质含量，其余营养参数参照《中国饲料成分及营养价值表(2017年第28版)》配制饲粮，试验饲粮的营养水平参照本课题组研究结果确定，各组的营养水平保持一致，试验饲粮组成及营养水平见表1。对照组饲喂不含抗生素的基础饲粮，试验组分别在基础饲粮中添加2%、4%的发酵混合饲料和2%、4%的发酵酒糟。本试验所用的发酵饲料由新希望六和股份有限公司广东新区提供。其中，发酵菌液由乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌组成，活菌数分别为1×107、1×108和3×107CFU/g。发酵混合饲料是以玉米、豆粕、麸皮为底物，按质量比20:20:60比例混合后，以1000kg底物接种500kg发酵菌液厌氧发酵7d制备而成，烘干后其水分含量为10%，粗蛋白质含量为13%，pH为4.2；发酵酒糟是以酒糟为底物，以1000kg底物接种500kg发酵菌液厌氧发酵7d制备而成，烘干后其水分为10%，粗粗蛋白质含量为21%，pH为4.5。
1.3样品的采集与制备
试验鸭饲养3个月后，每重复选接近平均体重试验鸭2只，称活体重后，试验鸭颈部放血致死，剖开腹腔，取出内脏，分离出肌胃、腺胃、十二指肠、空肠和回肠，用于测定pH；另外，用手术刀分离10cm空肠中段，取空肠内容物。然后用预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)清洗后分成2段，一段空肠置于冰板上用载玻片快速刮取空肠黏膜，黏膜样和空肠段分别装入冻存管，于液氮速冻，-80℃保存备用。在产蛋高峰期每个月末，从每个重复栏选取4枚未破损蛋(接近平均蛋重)，共计120枚，做好标记，用于测定蛋品质指标。
1.4检测指标与方法
1.4.1产蛋性能
试验期间，所有栏试验鸭每天的给料量都保持一致，每天准确记录剩料量。以重复为单位，准确记录试验鸭每天的蛋重、产蛋数量、破蛋、畸形蛋数量和重量，统计产蛋率、平均蛋重、日产蛋重、料蛋比、破蛋率、畸形蛋率。
1.4.2蛋成分和蛋品质
蛋壳厚度用数显千分尺(MODEL-1061)测定蛋壳钝端、中部和锐端蛋壳厚度，取其平均值表示；蛋形指数采用游标卡尺(沪制01120028)量出其纵径和横径后计算比值表示;蛋壳强度、哈氏单位、蛋重和蛋黄颜色采用蛋壳强度仪(EFR-01，以色列)和全自动蛋品分析仪(ORKA，北京天翔飞域仪器设备有限公司)测定;蛋黄重采用精密电子分析天平(AL104)测定;蛋壳重为含有蛋壳膜的蛋壳在烘箱105℃烘干冷却后称重;蛋清重则通过蛋重减去蛋黄重和蛋壳重后计算得出。测定在鸭蛋采集后48h内完成，最后取各批次的蛋品质指标的平均值表示。
1.4.3胃肠道pH
屠宰结束分离出胃肠组织后，立即用pH90型直插式pH计测定肌胃、腺胃、十二指肠、空肠和回肠内容物pH，每个组织样测定3次，取平均值。1.4.4空肠消化酶活性和分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量
分别取空肠内容物和空肠黏膜0.3g，按质量比1:9加匀浆介质，匀浆，4℃下4000r/min离心10min，取上清液，分别用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定空肠内容物中淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶活性和SIgA含量。
空肠总RNA的提取采用TRIzol试剂(Invitro-gen，美国)提取，提取的总RNA用ND-1000紫外分光光度计(ThermoFisher，美国)在OD260/OD280下检测RNA的浓度和纯度。cDNA的合成采用cDNA合成试剂盒(TaKaRa，日本)两步法在实时荧光定量PCR仪(CFX96，BIO-RAD，美国)进行。第1步基因组DNA去除反应，反应体系为10μL，反应参数为42℃2min；第2步反转录反应，反应体系为20μL，反应参数为37℃15min，85℃5s，4℃保存。反应结束后样品转移至-80℃冻存待用。
参照Livak等的方法用2-ΔΔCT法定量目标基因的相对表达量，以β-肌动蛋白(β-actin)作为内参基因进行校准。
1.5统计分析
试验数据采用SASV8.1软件进行单因素方差分析(one-wayANOVA)，并采用Duncan氏法进行多重比较。结果用平均值与均值标准误(SEM)表示，统计显著性水平为P＜0.05。2结果
2.1发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭产蛋性能的影响
如表3所示，与对照组相比，饲粮添加2%和4%发酵酒糟显著升高了蛋鸭的日产蛋重(P＜0.05)，饲粮添加4%发酵酒糟显著降低了料蛋比(P＜0.05)。饲粮添加发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭产蛋率、平均蛋重、破蛋率以及畸形蛋率均无显著影响(P＞0.05)。
2.2发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭蛋成分和蛋品质的影响
如表4所示，与对照组相比，饲粮添加4%发酵酒糟显著升高了鸭蛋中蛋清重和蛋黄颜色(P＜0.05)。饲粮添加发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋形指数、蛋黄重、蛋壳重均无显著影响(P＞0.05)。
2.3发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭胃肠道的影响
pH和消化酶活性的影响如表5所示，与对照组相比，饲粮添加4%发酵混合饲料和4%发酵酒糟显著降低了蛋鸭肌胃和腺胃pH(P＜0.05)。饲粮添加发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭十二指肠、空肠和回肠pH均无显著影响(P＞0.05)。
如表6所示，与对照组相比，饲粮添加4%发酵混合饲料显著提高了蛋鸭空肠脂肪酶和糜蛋白酶活性(P＜0.05)，饲粮添加2%和4%发酵酒糟显著提高了蛋鸭空肠糜蛋白酶、胰蛋白酶活性(P＜0.05)。
2.4发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭空肠免疫细胞因子mRNA相对表达量和SIgA含量的影响
如表7所示，与对照组相比，饲粮添加4%发酵酒糟显著升高了蛋鸭空肠黏蛋白2(MUC2)、SIgA的mRNA相对表达量以及SIgA含量(P＜0.05)。饲粮添加发酵混合饲料和发酵酒糟对空肠白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素-α(IFN-α)的mRNA相对表达量均无显著影响(P＞0.05)。
3讨论
3.2发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭蛋品质的影响
3.3发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭胃肠道pH和消化酶活性的影响
3.4发酵混合饲料和发酵酒糟对蛋鸭肠道免疫功能的影响
4结论
在本试验条件下，发酵酒糟对蛋鸭产蛋性能、蛋品质、肠道消化酶活性和免疫功能优于发酵混合饲料，且以4%的添加水平效果更好。
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2020年已全面禁抗，我们之前经常在饲料中添加的抗生素进行促生长行为将是违法，否则面临巨额罚单。如何既能够促进动物生长又能够形成无抗养殖呢？其实中草药在促进畜禽养殖健康和生长、改善肉蛋奶品质大有可为，特别是将中草药发酵后效果提升4-28倍等好处，这个实施方案比你想象中效果更好，运用的没有不被效果折服的，值得尝试验证
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