英文名称:ClassicalSwineFeverVirus(CSFV)AntibodyTestKit(indirectELISA)
【包装规格】96份/盒、192份/盒
【预期用途】本试剂盒采用间接ELISA方法定性检测猪血清或血浆中的特异性猪瘟病毒抗体,可作为猪瘟病毒疫苗的免疫监测及该病的辅助检测。
【检测原理】如果待检样品中含有猪瘟病毒抗体,就会与包被板上的猪瘟病毒重组抗原及第二步加入的抗猪二抗酶标结合物特异性结合。间接结合在包被板上的抗猪二抗酶标结合物与底物反应的显色状况即可反映出样品中是否含有保护水平的猪瘟病毒抗体。
【储存条件及有效期】2~8℃保存,防止冷冻,有效期为12个月。
【适用仪器】含450nm和630nm波长酶标仪;37℃恒温设备;可调微量移液器。
【样品要求】
1.本试剂仅适用于检测猪血清或血浆。
2.为取得最佳实验效果,避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品;
3.短期(3天内)将进行检测的血清样品可存放于2~8℃;如需长期保存,应置于-20℃以下,避免反复冻融。
【检验方法】
1.洗涤液配制:用蒸馏水或去离子水将洗涤液10×(2号液)按1:10稀释(例如,取
100mL洗涤液10×,加900mL蒸馏水或去离子水混合),充分混匀即为工作浓度洗涤液。
2.样品稀释:用样品稀释液(5号液)将待检血清按1:40稀释(血清稀释板使用方法详见说明书背面),充分混匀。阴性、阳性对照品不用稀释,直接加样。
3.加样反应:样品孔,每孔仅加入100μL待检样品;空白对照2孔,每孔仅加入100μL样品稀释液;阴性对照2孔,每孔仅加入100μL阴性对照品;阳性对照2孔,每孔仅加入100μL阳性对照品。盖好封板膜,37℃避光反应30分钟。
5.加酶反应:除空白对照孔外,其余每孔加酶标结合物(1号液)50μL,盖好封板膜,
37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,如上洗板,拍干。
6.显色反应:按所需用量,临用前取等体积底物液(3号液)和显色液(4号液)充分混匀,每孔加100μL,盖好封板膜,37℃避光反应10分钟。
7.终止反应:加终止液(6号液)50μL,以空白对照调零,用酶标仪于450nm波长(630nm
作为参比波长)读取OD值。
【参考值】
1.Cut-off值(COV)=阴性对照平均OD值×2.1(阴性对照孔OD值<0.08时,按0.08计)。
2.有效性判定:
阴性对照孔OD值≤0.15(若大于0.15则实验无效);阳性对照孔OD值≥0.50(若小于0.50则实验无效)。
【检验结果的解释】
样品OD值≥COV,判为猪瘟病毒抗体阳性;样品OD值<COV,判为猪瘟病毒抗体阴性。
【检验方法的局限性】本试剂盒仅供筛查,不作为确诊依据。
【注意事项】
1.试剂盒各组份从冷藏环境中取出时,必须平衡至室温后,方可开封启用。未使用完的试剂组份应及时放回2~8℃密封保存。
2.加试剂前应将试剂轻摇、混匀。
3.孵育时必须用封板膜密封板孔,封板膜不可以重复使用。
4.不同批次试剂盒的试剂组份或说明书不可混用。瓶盖每次使用后要盖紧,各瓶之间瓶盖不可混用。
5.用弃的试剂盒及样品都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性,须小心使用。