实时荧光定量PCR仪广泛应用于各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。实时荧光定量pcr仪由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的
1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；2、一般都是相对量，则用deltadeltaCT方法来计算；3、引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性；4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了
无模板空白对照NTC是指不含有模板（阳性模板或者阴性模板）的对照。目前的试剂盒的NC一般都是水或阴性缓冲液，所以NC等同于NTC。其实两者有不同的作用。仪器空白对照NTC是含有引物探针和反应液主要监控引物探针，反应体系有没有被污染。这里的仪器空白对照我通常使用的是空反应管来监控仪器有无非特异性的荧光
（一）荧光PCRHPVDNA检测HPV感染是子宫颈癌及其癌前病变（子宫颈上皮内瘤样变）的主要病因。因此，可以将检测HPV感染作为子宫颈癌的一种筛查手段。HPV-DNA检测发现高度病变的敏感度为97.7%~100%，平均为98.6%，比细胞学检查高二十多个百分点。如果将两者结合进行检查，敏感
SYBRGreenI在核酸的实时检测方面有很多优点，由于它与所有的双链DNA相结合，不必因为模板不同而特别定制，因此设计的程序通用性好，且价格相对较低。利用荧光染料可以指示双链DNA熔点的性质，通过熔点曲线分析可以识别扩增产物和引物二聚体，因而可以、区分非特异扩增，进一步地还可
channel指的是针对每一种荧光的检测器，比如你在一个管中做多个颜色，针对多个靶基因。每个颜色需要一个检测器来检测荧光信号的强弱，每一个针对不同颜色的检测器，就是一个通道
MicroRNA简介微小RNA(microRNA，简称miRNA)是生物体内源长度约为20－23个核苷酸的非编码单链小分子RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶
对照的目的是对检测的各个环节进行监控，因此我们按照检测的流程对对照进行梳理。常规荧光定量PCR的流程是：样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录（RNA病毒）-扩增-结果读取。下面看看各个环节都可以使用哪些对照:1.阳性对照（Positivecontrol，PC）和阴性对照（Negativec
qPCR的优点方法成熟，配套仪器试剂齐全试剂成本中等操作简单检测敏感性高，特异性高qPCR的缺点1.目的基因发生突变导致漏检2.低浓度模板检测结果无法确定3.使用标准曲线进行定量检测时误差较大。
如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量，则用deltadeltaCT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20，内参：比如βactin)CT值15。实验组基因ACT值18，内参CT值14。如果是realtime做表达量，用excel的制图，将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就
在做qPCR实验时，我们经常会问：“你是做绝对定量还是相对定量呢？”，而定量方法的选择是取决于实验的目标。绝对定量可测定目标核酸分子的实际拷贝数，但也是最费力、最复杂的定量形式。此方法要求周密的实验方案和高度准确的标准曲线，常用于确定病毒滴度。使用标准曲线进行绝对定量绝对定量是通
本人从事荧光定量PCR检测试剂的开发工作，用过市场上主流的多款荧光定量PCR仪，如ABI5700，ABI7700，ABI7000，ABI7300，ABI7500，MJopticon，MJopticon2，bio-radICycler，LightCycler1.5，roter-gene3
采用相对法定量要求必须目的基因和内参具有相同的扩增效率,所以需要做efficiencycurve如果得到的斜率小于0.1,可以采用相对法,否则,需要重新设计能达到相同扩增效率的引物,或者就需要制作标准曲线,制作标准曲线,可以将基因片段克隆到质粒,然后体外转录成rna,定量以后合成cdna,然后按比例
荧光定量PCR检测试剂盒简述荧光探针法的应用荧光定量PCR检测试剂盒的原理在于PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上;P
PCR实验室产品选择指南荧光基团是吸收一定波长的光子后发射特定波长的光波，可以作为抗体等分子的标记物，实时荧光定量PCR中的Taqman探针常用荧光基团FAM标记荧光基团和TAMRA标记。荧光基团吸收特定波长的光子后荧光染料(通常称为“荧光基团”或简称为“荧光素”)的化
荧光分析是一种先进的分析方法，它比电子探针法、质谱法、光谱法、极谱法等都应用的较广泛和普及，这同荧光分析具有很多优点分不开的。荧光分析所用的设备较简单，如目测荧光仪和荧光光度计构造非常简单完全可以自己制造。比起质谱仪、极谱仪和电子探针仪来它在造价上要便宜很多倍，而且荧光分析的最大特点是：分析灵敏度高
原子发射与原子吸收光谱法是利用原子的价电子激发产生的特征光谱及其强度进行分析。X-射线荧光分析法则是利用原子内层电子的跃迁来进行分析。X射线是伦琴于1895年发现的一种电磁辐射，其波长为0.01～10nm。在真空管内用电加热灯丝（钨丝阴极）产生大量热电子，热电子被高压（万伏）加速撞
在暗室中进行。先在兰色光波下观察眼底检查部位的情况，注意有无假荧光，为了观察病人对荧光素有无过敏反应，先取10%荧光素钠0.5ml加入无菌等渗盐水4.5ml稀释，作为预测试验，缓慢地注入肘前静脉，询问病人有何不适。如无不良反应，可调换盛有10%荧光素钠5ml或20%荧光素钠2.5～3ml注射器，于1
免疫荧光法（Immunofluorescencemethod）是将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞(
荧光光谱法fluorography在用凝胶电泳分离以放射性同位素标记的蛋白或核酸时，使闪烁剂渗在凝胶中，闪烁剂由放射性辐射所激发出光，通过x光胶片进行检查，此方法称为荧光光谱法。此方法对检查3H、14C、35S等β射线能量低，不易使x光胶片感光剂直接感光的放射性同位素是有效的。也
实验步骤展
荧光分析法是一种利用某些物质的荧光光谱特性来进行定性、定量的分析方法。一般所说的荧光分析法，是指以紫外或可见光作为激发光源，所发射的荧先波长较激发光波长要长的分子荧充分析法。
荧光分析法是指利用某些物质被紫外光照射后处于激发态，激发态分子经历一个碰撞及发射的去激发过程所发生的能反映出该物质特性的荧光，可以进行定性或定量分析的方法。由于有些物质本身不发射荧光（或荧光很弱），这就需要把不发射荧光的物质转化成能发射荧光的物质。例如用某些试剂（如荧光染料），使其与不发射荧光的物质
该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是:非特异性染色问题尚未完全解决,结果判定的客观性不足,技术程序也还比较复杂。荧光免疫法按反应体系及定量方法不同,还可进一步分做若干种。与放射免疫法相比,荧光免疫法无放射性污染,并且大多操作简便,便于推广。国外生产的TDM用试剂盒,有相当一部分
灵敏度高:荧光分析的最大特点是灵敏度高,通常情况下要比分光光度计的灵敏度高出2-3个数量级。选择性强:包括激发光谱和发射光谱,在鉴定物质时,通过选择波长可以使分子荧光分析有多种选择。试样量少和方法简便。能提供比较多的物理参数:如激发光谱、发射光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等参数。这些参