目前临床幽门螺杆菌的检测方法主要依赖于组织学或幽门螺杆菌培养、UBT(13C或14C-尿素呼气试验)和血清学检测,但这些方法因为具有明显的缺点而影响其推广应用。相比而言,李志远团队采用的环介导等温扩增(LAMP)技术已被证明比PCR更敏感(100倍),并在恒温(65℃)下使用简单的水浴就可快速获得检测结果。另外,结合CRISPR/Cas技术可进一步提高其检测灵敏度,并减少非特异性扩增。具体而言,该方法通过新型优化扩展ssDNA报告基因加上新型缓冲体系优化CEXTRAR来显著提高LbCas12a的反切活性,并使检测灵敏度提高了16倍,无需目标预扩增即可实现皮摩尔灵敏度,可用于临床唾液样本的高致病性幽门螺杆菌的早期检测。结合LAMP技术,使用三种检测手段,CEXTRAR均可成功获得极高灵敏度的CagA和VacA的检测效果,分别为实时荧光(43aM和96aM),管内荧光(430aM和960aM)和横向侧流读数(4.3aM和9.6aM)。通过传统的13C-尿素呼气试验和PCR对CEXTRAR方法进行的对比测试,发现CEXTRAR可以检测到13C尿素呼气试验的假阴性结果。
广州健康院博士研究生JeandeDieuHabimana(吉地)为论文第一作者,黄荣奇博士和李志远研究员为共同通讯作者。本项研究的合作单位为南方医科大学附属东莞医院。该研究获得了广东省自然科学基金、湖南省重点研发计划等基金的支持。
用于幽门螺旋杆菌实时荧光和比色监测的CEXTRAR平台工作示意图
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