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2024.11.18
——小周的化验室日常——
犬猫交叉配血试验-操作步骤
01
综述
交叉配血是为了测定输血的相容性。在血型鉴定的基础上，通过交叉配血试验进一步证实受血者与供血者之间不存在血型不合的抗原-抗体反应，以保证受血者的输血安全。
02
物品准备
·供血者新鲜EDTA抗凝血0.5ml
·受血者新鲜EDTA抗凝血0.5ml
·0.9%氯化钠注射液
·空白离心管
·移液枪
·载玻片盖玻璃
·显微镜
·离心机
·±恒温箱（非必须，室温过低时则需要）
03
交叉配血试验步骤
第1步｜分离血浆/血清
将供血者、受血者的EDTA抗凝血液样本同时离心，以2000转/分钟的速度，离心5分钟。
完成离心后，使用移液器分离供血者、受血者血浆，分别加入无菌空白管中并标注。
第2步｜洗涤红细胞
使用移液枪抽取供血者红细胞100μl，加入空白离心管并标记。
更换移液抢头，抽取受血者红细胞100μl加入空白离心管并标记。
在两个离心管中分别加入1ml生理盐水，混匀后同时离心，以2000转/分钟，离心5分钟。离心结束后弃去上清液。重复此过程3-5遍，最后弃去上清液。
第3步｜配置红细胞悬液
抽取将供血者洗涤后的红细胞10μl，加入空白离心管中，再加入200μl生理盐水，混匀（配置为3%-5%的红细胞悬液）并标注。
抽取将受血者洗涤后的红细胞10μl，加入空白离心管中，再加入200μl生理盐水，混匀（配置为3%-5%的红细胞悬液）并标注。
第4步｜配置主测试验样本
在空白离心管中加入2滴供血者红细胞悬液，再加入2滴受血者血浆，混匀并标注。
第5步｜配置次测试验样本
在空白离心管中加入2滴受血者红细胞悬液，再加入2滴供血者血浆，混匀并标注。
第6步｜配置对照组试验样本
在空白离心管中加入2滴受血者红细胞悬液，再加入2滴受血者血浆，混匀并标注。
第7步｜孵育样本
将主测、次测、对照组试验样本，同时置于室温下静置15分钟（理想条件为37℃）。若室温过低，则需要将样本置于恒温箱内孵育。
第8步｜显微镜检查
混匀主测、次测、对照组试验样本，分别使用移液枪吸取5-10μl滴加于载玻片并标注，加盖镜检，观察是否存在红细胞凝集。
第9步｜离心测试
同时离心主测、次测、对照组样本，以2000转/分钟，离心5分钟。观察是否出现溶血现象（上清液变为红色）。
04
结果判读
A.显微镜检查
·阴性结果（-）
正常离散分布的红细胞（左图），可能出现皱缩（右图）。
轻度（左）和显著（右）的缗钱样红细胞，表现为整齐条状的堆叠排列，均属于阴性。
·阳性结果（+）
红细胞由四面八方凝集成团，立体感强，似葡萄串样，不规则排列，此为阳性。
B.离心测试
将主测、次测及对照组样本以2000rpm离心5分钟后观察血浆颜色，上清液无色透明至淡黄色为阴性，若上清液呈红色则为阳性。
视觉溶血指数
05
相容性评估
·主测阴性次测阴性：可以进行输血。
·主测阳性次测阳性：不可进行输血。
·主测阳性次测阴性：不可进行输血。
主侧配血阳性结果提示受血者中有针对供血者红细胞的高抗体水平，即不能使用供血者血液。
·主测阴性次测阳性：不建议进行输血。
次侧配血阳性结果提示供血者存在针对受血者红细胞的抗体。（如果这种反应强烈，即使少量的供血者血浆也能引起明显的输血反应；如果反应较弱，供血者的浓缩红细胞或许可用于输血）
·对照组试验阳性：如果受体对照管中存在溶血或凝集现象，那么供体的相容性和适应性就无法准确评估。