第二章蛋白质与非蛋白含氮化合物检验
名词解释：
氨基酸血症：氨基酸、或其中间代谢物、或其旁路代谢物在血液中增高称之。
氨基酸尿症：血浆增多的氨基酸及其代谢物均从肾小球滤过超出肾小管重吸收能力从尿排出。
高尿酸血症：血清尿酸浓度超过参考值上限称为高尿酸血症，即男性和绝经后女性大于420μmol/L，绝经前女性大于350μmol/L。
痛风：血液尿酸浓度增高到一定程度时，可出现尿酸盐结晶形成和沉积，并引起特征性急性关节炎、痛风石、慢性关节炎、关节畸形、慢性间质性肾炎和尿酸性尿路结石，即为痛风。
第一节概述
一、血浆蛋白质功能
1.直接在血液中发挥作用
在血浆中运载弱水溶性物质、维持血浆胶体渗透压、组成血液pH缓冲系统、参与凝血与纤维蛋白溶解、血浆固有酶在血浆发挥作用
2.需要时进入组织发挥作用
对组织蛋白起修补作用、组成体液免疫防御系统、抑制组织蛋白酶、参与代谢调控作用的激素
二、醋纤膜电泳或琼脂糖电泳分五个区带：
白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白（依次为从阴极到阳极，须按顺序记住）
分辨率高时：可有β1和β2；α2中也可有两条
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，
在适当条件下可以分出30多个区带
【生理功能】
血浆蛋白质有多种功能，PA即TTR能转运甲状腺激素，并结合携带视黄醇的RBP；ALB是最重要的血浆营养蛋白和血浆载体蛋白；AAT是最重要的蛋白酶抑制物；AAG是主要的APP；Hp结合Hb并防止Hb从肾脏丢失；α2MG也是主要的蛋白酶抑制剂；血浆铜95％存在于Cp中；TRF携带铁在血液中运输；CRP能结合异物并激活补体。
二、体液氨基酸（AA）
作用：合成蛋白质，转变为其他含氮生物活性物质
（一）遗传性氨基酸代谢紊乱：氨基酸血症，氨基酸尿症
（二）继发性氨基酸代谢紊乱：见于肝脏和肾脏疾患、蛋白质营养不良、烧伤等。肝功能衰竭时，主要在肝脏降解的芳香族氨基酸浓度升高，主要在肌肉、肾及脑中降解的支链氨基酸分解未
减少，因此出现支链氨基酸/芳香族氨基酸比值（BCAA/AAA比值）下降
三、嘌呤核苷酸
（一）嘌呤核苷酸代谢
包括腺苷酸（AMP）和鸟苷酸（GMP）
嘌呤核苷酸的合成：从头合成途径、补救途径
嘌呤核苷酸的分解：终产物是尿酸，人类不能再分解
（二）、高尿酸血症
1.嘌呤代谢紊乱在原发性高尿酸血症的病因中约占10％，主要原因是嘌呤代谢酶缺陷
2.尿酸排泄障碍终尿排出尿酸盐只占滤过量的6％～10％总量约为2.4mmol～
3.0mmol/d
3.代谢综合征与高尿酸血症
4.高嘌呤饮食啤酒引发痛风的可能性最大，烈性酒次之，葡萄酒基本上不存在这种危险
5.各种肾脏疾病
6.细胞破坏增多
第二节常用体液蛋白质与非蛋白含氮化合物检测项目
一、体液总蛋白
测定蛋白质时利用蛋白质特有的结构或性质：
①重复的肽链结构；
②分子中均含有氮原子；
③与色素结合的能力；
④沉淀后借浊度或光折射测定；
⑤酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收
（一）双缩脲法（临床常用方法须掌握原理）
【测定原理】
蛋白质中两个相邻肽键(-CO-NH-)在碱性溶液与二价铜离子作用产生稳定的紫红色络和物。此反应与双缩脲(两个尿素缩合物H2N-OC-NH-CO-NH2)在碱性溶液与Cu2+作用形成紫红色反应相似。因此将蛋白质与碱性铜反应的方法称为双缩脲法
【参考区间】
3岁及以上:60～80g/L。成人:64～83g/L(直立行走)和60～78g/L(卧床)
【方法评价】
（1）特异性
（2）呈色一致性
（3）临床应用：检测范围10～120g/L,蛋白质浓度很低的脑脊液和尿液无法定量
2.凯氏定氮法
原理：测定样品中的含氮量，推算出蛋白质含量。蛋白质中含氮量较为恒定，平均16％,即1克氮相当于6.25克蛋白质。（掌握）
准确性好，精密度高，灵敏度高，适用于任何形态的样品测定，至今仍被认为是测定许多生物样品中蛋白质含量的参考方法。
二、体液白蛋白(ALB)
包括电泳法、免疫化学法和染料结合法。
以染料结合法最多用，其原理是：阴离子染料溴甲酚绿(BCG)溴甲酚紫(BCP)能与ALB结合，其最大吸收峰发生转移。BCG与ALB形成的蓝绿色复合物在630nm处有吸收峰，BCP与ALB形成的绿色复合物在603nm处有吸收峰。而球蛋白基本不结合这些染料。
【参考区间】成人：35～52g/L
【医学决定水平】：低于28g／L时，会出现组织水肿
【临床意义】（掌握）
ALB增高仅见于严重失水时，无重要临床意义
低ALB血症见于下述许多疾病情况：
（1）白蛋白合成不足
①严重肝脏合成功能下降如肝硬化、重症肝炎
②蛋白质营养不良或吸收不良
（2）白蛋白丢失：
①尿中丢失如肾病综合征、慢性肾小球肾炎、糖尿病肾病、系统性红斑狼疮性肾病等
②胃肠道蛋白质丢失，因黏膜炎症坏死
③皮肤丢失如烧伤及渗出性皮炎等
（3）白蛋白分解代谢增加：
①组织损伤如外科手术和创伤
②组织分解增加如感染性炎症疾病等
（4）白蛋白的分布异常
（5）无白蛋白血症：极少见的遗传性缺陷
（1）两种染料结合法均操作简便、重复性好
（3）临床应用：两法均适合于血清白蛋白测定
BCP法检测范围为5～50g/L，上限较低，大于50g/L需减量或稀释重做
BCG法检测范围为5～60g/L，应用更方便
四、蛋白质免疫固定电泳
【检测原理】包括蛋白电泳和免疫沉淀两个过程
电泳：同一份标本加样在6个不同位置。
加抗血清：抗IgG、IgA、IgM、κ链和λ链分别加到各份电泳区带表面孵育，在适当的区带位置抗原抗体复合物形成并沉淀。
清洗：电泳区带中未被固定的ALB.α1.α2.β球蛋白，及未结合的游离抗原或抗体被洗去。
染色：考马斯亮蓝等灵敏度较高的染色液。
观察：有否单克隆免疫球蛋白，其抗原特异性、电泳位置、该蛋白质量及其与其他蛋白质的大概比例。【区带表现】
正常区带染色程度依次是IgG＞IgA和κ链＞λ链＞IgM，均呈宽而弥散的区带。
【临床意义】
1.血浆PA
下降是肝功能不全的灵敏指标。
2.血浆AAT
（1）AAT缺陷与肺气肿：低血浆AAT还可出现在胎儿呼吸窘迫综合征
（2）AAT缺陷与肝病
3.血浆AAG
作为急性时相反应的指标
是反映溃疡性结肠炎活动性最可靠的指标之一
4.血浆Hp
连续观察可用于监测溶血是否处于进行状态
5.血浆Cp
主要作为Wilson病的辅助诊断指标，此病是进行性和致命的，因此应及时诊断，并用铜螯合剂-青霉胺治疗。
6.血浆TRF
贫血的鉴别诊断和铁缺乏的治疗监测
再生障碍性贫血，血浆TRF正常或低下红细胞对铁的利用障碍，使铁饱和度增高
7.血浆CRP
急性时相反应极灵敏的指标：CRP是第一个被认识的极性时相反应蛋白