冻杨美，林德贵，晏磊，周德刚，潘贵珍，田朋飞，杨绒娟
(1.国家兽用药品工程技术研究中心/洛阳惠中兽药有限公司，河南洛阳471003；2.中国农业大学动物医学院，北京100083；3.洛阳乐宠健康科技有限公司，河南洛阳471003)
据此，洛阳惠中兽药有限公司研制了一款用于预防和控制犬蜱虫和跳蚤感染的外用滴剂，为非泼罗尼和甲氧普烯的复方制剂，2020年获得二类新兽药证书。复方非泼罗尼滴剂最早由梅里亚有限公司开发，目前国外已有报道复方非泼罗尼滴剂对犬蜱虫的杀灭效果，本研究采用洛阳惠中兽药有限公司提供的复方非泼罗尼滴剂，通过广泛收集南北地区自然感染蜱患犬进行临床效果评价，以期验证国产复方非泼罗尼滴剂的临床使用效果。
1.1.2试验药物①复方非泼罗尼滴剂。规格：1mL(100mg非泼罗尼+90mg甲氧普烯)；包装：0.67mL/支，1.34mL/支，2.68mL/支；洛阳惠中兽药有限公司。②福莱恩增效滴剂。规格：1mL(100mg非泼罗尼+90mg甲氧普烯)；包装：0.67mL/支，1.34mL/支，2.68mL/支；法国梅里亚集团。
1.1.3主要仪器生物显微镜(XSZ-N107CCD)，德国Novel公司；3M听诊器(5620)，美国3M公司；四通道正倒数计时器(PS-396)，深圳追日电子科技有限公司；电子台称(TCS-01R)，厦门佰伦斯电子科技有限公司；电子体温计(MC-347)，欧姆龙(大连)有限公司。
1.2.1试验分组试验分为A、B两组，A组为试验组(复方非泼罗尼滴剂)，B组为对照药物组(福莱恩增效滴剂)。共收集试验犬120只，其中北京市60只，A组30只，B组30只；海口市60只，A组30只，B组30只，北京市和海口市入选的试验犬随机分到A组和B组。
1.2.2给药方案给药前称量动物体重，按照体重范围选择药物规格，拨开犬肩胛骨间的毛发，将滴剂沿脊柱向后滴于皮肤上，自然风干，至完全吸收，给药1次。体重10kg以下的犬使用0.67mL；体重10kg～20kg的犬使用1.34mL；体重20kg～40kg的犬使用2.68mL；体重大于40kg的犬,每增加10kg，则使用2.68mL加0.67mL,依次类推。用药后严格遵医嘱，试验犬不能洗澡，直至试验结束。
1.2.3试验周期受试药物和对照药物的试验周期均为35d，分别在用药当天(0d)，用药后1d～7d(连续观察)、10d、14d、21d、28d和35d随访1次，观察相应指标。
1.2.4临床观察用药后密切观察试验犬的精神状态、体温、呼吸、心搏等常规指标，记录药物对试验犬造成的不良反应及副作用。
1.2.5体外寄生虫检查在用药当天(0d)，用药后1d～7d(连续观察)、10d、14d、21d、28d和35d，观察体表蜱虫感染的情况，并记录每只试验犬感染蜱虫数量。具体操作方法：评估过程两人同时操作，把犬从笼子里提出置于检查台上，一人一侧，逆着毛发生长方向梳理，使皮肤裸露，系统全面地检查头部、背部、腹部及四肢，具体包括犬面部、颈部、体侧、腹股沟、四肢等24处部位。对收集的蜱虫进行显微镜形态学鉴定。
1.2.6临床症状评分标准在用药当天(0d)，用药后1d～7d(连续观察)、10d、14d、21d、28d和35d对病犬皮肤进行检查。记录动物皮肤病灶部位与分布情况，并按照临床局部皮肤检查指标评分标准对皮肤红疹和皮肤瘙痒程度进行分级，评价用药后临床症状的消失和转归情况。分级标准如下。
皮肤红疹程度分为5个等级：无红疹或已退化(0),红疹数1个/4cm2～5个/4cm2或面积4cm2～7cm2(1),红疹数6个/4cm2～10个/4cm2或面积8cm2～15cm2(2),红疹数11个/4cm2～15个/4cm2或面积16cm2～20cm2(3),红疹数超过16个/4cm2或面积超过20cm2(4)；皮肤瘙痒程度分为5个等级：无(0),偶发1次/10min～5次/10min(1),频发6次/10min～10次/10min(2),常发11次/10min～15次/10min(3),高发>15次/10min(4)。
1.2.7药物疗效评价标准按下列公式分别计算每组动物每种虫体的转阴率、减少率，并计算总的虫体转阴率、减少率，评估各组药效。
虫体转阴率(%)=虫体转阴动物数/试验动物数×100
虫体减少率(%)=驱虫前虫体数-驱虫后虫体数/驱虫前虫体数×100
有效：用药治疗期间和用药结束后，皮肤(或耳部)的体外寄生虫数量平均减少率≥90%，患部无瘙痒，无红疹、皮屑或试验动物自我啃咬的损伤。
无效：用药治疗期间和用药结束后，皮肤(或耳部)的体外寄生虫数量平均减少率<90%，患部仍有瘙痒，红疹、皮屑等，试验动物自我啃咬的损伤明显存在。
复方非泼罗尼滴剂组和福莱恩增效滴剂组的试验犬在用药前后试验犬的精神状态、饮水食欲、活动性、体温、呼吸、心搏均无异常，说明试验犬对这两种药物的耐受性均很好。
表1不同地区蜱虫感染病例用药后蜱虫数量变化Table1Changesinthenumberofticksincasesoftickinfectionindifferentregionsaftermedication
表2不同地区蜱虫感染病例用药后皮肤红疹程度评分变化Table2Changesinskinerythemascoresoftickinfectioncasesindifferentregionsaftermedication
表3不同地区蜱虫感染病例用药后皮肤瘙痒程度评分变化Table3Changesinskinpruritusscoresoftickinfectioncasesindifferentregionsaftermedication
北京市A组患犬综合体表虫体检查结果和局部皮肤检查结果，在用药结束28d和35d虫体转阴率分别为100%和83.3%，虫体平均减少率分别为100%和94.8%，第35天有6只患犬复发瘙痒、红疹等症状；B组在用药结束28d和35d虫体转阴率分别为96.7%和96.7%，虫体平均减少率分别为99.2%和99.2%，第28天仅有1只患犬复发瘙痒、红疹。
海南市A组患犬综合体表虫体检查结果和局部皮肤检查结果，在用药结束28d和35d虫体转阴率分别为100%和100%，虫体平均减少率分别为100%和100%，患部无瘙痒、红疹等症状；B组在用药结束28d和35d虫体转阴率分别为100%和96.7%，虫体平均减少率分别为100%和98.9%，第35天仅有1只患犬复发瘙痒、红疹。
根据疗效判定标准，试验药物和对照药物在用药后第28天和第35天，皮肤的体外寄生虫数量平均减少率均>90%，且90%以上患犬无瘙痒，无红疹、皮屑，亦未见试验动物有自我啃咬现象，可见复方非泼罗尼滴剂对治疗犬蜱虫病效果显著。
为科学、公正地评价在田间条件下受试药物对目标适应症的临床治疗效果，本研究根据中华人民共和国农业部公告1425号《宠物用抗体外寄生虫药物药效评价田间试验指导原则》，考察了复方非泼罗尼滴剂对犬蜱虫病的临床治疗效果，旨在评价临床应用的有效性和安全性。
复方非泼罗尼滴剂有效成分为非泼罗尼(10%m/v)和甲氧普烯(9%，m/v)，非泼罗尼作为杀成虫剂作用于蜱和跳蚤成虫，甲氧普烯作为昆虫生长调节剂作用于跳蚤卵和幼虫，二者协同发挥增效作用。复方非泼罗尼滴剂对两种虫体的临床效力验证试验分阶段进行，因此本研究重点回顾性分析了对蜱虫的杀灭作用。非泼罗尼为新型苯基吡唑类杀虫剂，与传统杀虫剂(有机磷类、拟除虫酯类、氨基甲酸酯类)相比，具有广谱、高效、毒副作用小、半衰期长以及对非靶标动物安全的优点[10]，且药物结构新颖、活性高、作用机制独特，属新一代高技术杀虫剂。非泼罗尼为γ-氨基丁酸(GABA-A)受体拮抗剂，参与GABA-A受体周围生物膜活性[11]，通过非竞争性抑制GABA诱导的靶向氯离子通道，导致虫体神经元和肌肉过度兴奋而死亡，可在24h内杀死宠物体表成年蜱虫、跳蚤。虽然非泼罗尼对昆虫和哺乳动物的作用机制相同，但由于其对昆虫GABA受体的亲和力明显高于哺乳动物，应用时对哺乳动物具有较高的安全性，在本研究期间未见任何不良反应。且文献报道非泼罗尼对昆虫GABA受体的亲和力为哺乳动物的500倍[12]，可见此药安全性高。
复方非泼罗尼滴剂对我国南北方蜱虫病均具有较好治疗效果，用药1次可维持28d，虫体平均减少率可高达100%，按推荐剂量使用有效性强、安全性高，可以用于我国不同地区犬蜱虫病的预防和治疗。临床推荐使用方法：外用，拨开犬肩胛骨间的毛发，将滴剂沿脊柱向后滴于皮肤上，自然风干；体重10kg以下的犬使用0.67mL，体重10kg～20kg的犬使用1.34mL，体重20kg～40kg的犬使用2.68mL；体重40kg以上的犬使用2.68mL加上体重超出部分对应的剂量，28d用药1次。