同时测定三聚氰胺和三聚氰酸知识图谱

本文通过LC-MS和戴安公司的混合基质柱WAX-1，对宠物食品和生物样品中的三聚氰胺和三聚氰酸进行了有效的检测，取得了理想的实验结果。

由于宠物食品被三聚氰胺和三聚氰酸污染，当三聚氰胺和三聚氰酸同时存在时会形成一种不溶结晶物，这种物质可能影响到肾脏功能，最近的研究发现很多宠物的死亡和健康问题是由此引起的，受污染的麦子、稻米和玉米可能被制成人类食物如面包、意面、婴儿食品等，所以对原材料包括可疑性动物组织中三聚氰胺和三聚氰酸的检测就十分重要。

本文介绍了一种灵敏、简单和高通量的LC-MS方法，使用稳定的同位素标记的内标物（ISTD）来定量，可同时测定三聚氰胺和三聚氰酸。

本文通过宠物食品提取物以及生物基质（猪肉和鱼肉组织的提取物）来验证方法的可靠性，宠物食品用快速、简单和自动的提取方法处理。生物样品来自美国FDA，并按规定方法处理。

实验条件

仪器及软件

戴安SummitHPLC系统：P680泵；ASI-100自动进样器；TCC-100柱温箱；UVD-340UV-Vis检测器；戴安MSQPlus单四极质谱检测器（ESI源）；Chromeleon6.8色谱管理软件。

分析柱：戴安公司Acclaim混合基质柱WAX-1（150×2.1mm,5um）；流速：等度90%乙腈/10%20mMpH4醋酸铵缓冲液（v/v），0.25ml/min；柱温：20℃；进样量：5ul。

MSQ质谱条件

图1.全波段扫描三聚氰胺和三聚氰酸的质谱图。

色谱条件

色谱方法开发

色谱优化

流动相组成：在HILIC模式下，高有机物浓度的流动相容易使极性物质保留更长，并在ESI条件的MS上有更大的响应。然而，在WAX-1柱上的分离由于有弱阳离子的交换，对流动相中离子强度和pH的改变很敏感。为了保持方法的重现性，需要合适的缓冲容量，所以选择10%pH4的醋酸铵。

缓冲液pH

离子强度

质谱检测优化

质谱检测的优化和色谱的优化相结合。图4是最优化分离度、灵敏度和高通量方法的校准标准色谱图。

宠物食品的方法验证

线性和校正曲线

美国FDA的校正标准中，使用稳定的元素标记物（三聚氰胺－15N3和三聚氰酸－13C3）作为内标物（ITSD）。这些标准物用来做标准曲线，计算线性。从2ng/ml到200ng/ml的范围内的线性非常好，可见图5，图6。

方法检测限（MDL）

方法检测限通过对校正标准物7次重复进样，以及下面方程式来计算：

MDL=tgg%×S｛n=7｝

t在99%的置信区间（tgg%，n=7=3.143），S为标准偏差。三聚氰胺和三聚氰酸的MDL分别为3.97ng/ml和3.92ng/ml。

生物样品的方法验证

色谱图

从美国FDA获得的猪和鱼组织提取物（控制和加标样）用FDA的标准来处理，所有的生物样品挥发干后用流动相重溶。图7是控制样品（空白猪肉样品的提取物，提取前ISTD，三聚氰胺或三聚氰酸加标）的SIM色谱图。