针对每个待检蛋白质，Olink设计了一对抗体，抗体上偶联有特定的DNA单链，当这对抗体结合目标蛋白质后，处于邻位的两条DNA单链可互补结合并经酶延伸形成双链DNA模板，巧妙地将蛋白质定量转换为DNA定量，最后利用微流控qPCR或NGS测序进行定量检测。
Olink性能特点与技术优势
在PEA反应中，PCR的指数扩增特性被用来实现对检测信号对放大，提供较传统的酶联免疫吸附试验（ELISA）更佳的检测灵敏度。因此只需极小的样品量就可以同时测量大量的蛋白质，将显著地促进针对有限及珍贵样本的研究，例如使用来自临床队列或生物样品库的人类样本。此外，PEA中的抗体偶联的核酸单链只有在一一正确配对形成DNA双链时才能被检测出，这确保了即使在超多重水平下也有超乎寻常的特异性。
性能情况
研究流程
Olink技术流程
1）样本孵育后，临近探针特异性结合目标抗原；
2）探针寡聚体互补并在DNA聚合酶作用下延伸，这将创建一个双链DNA“条形码”，该条形码对于特异性抗原来说是唯一的，并且在数量上与靶蛋白质的初始浓度成正比；
3）通过微流控qPCR对扩增子进行定量，或者通过在扩增子上加入接头进行NGS测序。
Olink生信分析流程与信息分析示例
数据质控
数据分析
分析结果示意图
样本NPX值总览
IQR质控
单一分组蛋白表达量热图
循环蛋白质组检测产品
样本要求
产品服务列表
产品服务流程
项目周期
标准流程从样本接收到数据交付，运转周期约为2个月（40个工作日），选择定制化信息分析条目需额外评估项目周期。
交付指标和售后服务
1.根据合同规定完成分析。
2.提交项目结题报告文档，说明项目完成情况。
4.数据交付后6个月内，提供免费的项目咨询服务。
产品服务优势
Olink的技术优势总结
案例分析
血浆蛋白质组学助力预测免疫检查点阻断剂耐药的全新生物标志物
研究背景：
免疫检查点阻断剂（ImmuneCheck-pointBlocker,ICB）现已广泛应用于肿瘤治疗。但很多病人尚未从中获益，主要归因于人群的免疫检查点阻断剂抵抗。随着基因组学的快速发展，蛋白质研究已成为深入理解实时生物学的前沿平台。为解决ICB的潜在毒性，并仅针对可获益病人进行价格不菲的治疗——开发可靠针对ICB抵抗的新型生物标志物，至关重要。
研究思路：
研究结论：
常见问题FAQs
1.Olink的检测中，每个样本需要做多少次重复？
Olink对样本的重复次数没有要求，除非是客户要求的。通常来说，生物学重复带来的变异超过技术变异，所以客户们更专注于使用不同的样本而不是做重复实验。Olink的主要的检测Panel的板间CV<10%。
2.Olink检测的灵敏度？
Olink在开发验证各Panel时，用2倍稀释的标准曲线去计算了LOD,LLOQ,ULOQ以及hook。
已证实：PEA技术的灵敏度高于ELISA检测，可至fg/ml。Olink使用EDTA血浆样本充分验证了生理病理的蛋白水平。
3.Olink的检测会受到内源性干扰吗？预计会有什么基质效应呢？
在进行Olink检测Panel验证的时候，Olink评估了来自异嗜性抗体的潜在内源性干扰，例如人抗鼠抗体(HAMA)和类风湿因子，以及特定的干扰物质（溶血物、脂质和胆红素）。验证过程中没有观察到明显的测定干扰。
4.什么是动态检测范围(DynamicRange)？
动态检测范围是指介于检测下限和检测上限范围。在这个范围内，检测的准确度和精准度更好。
5.用Olink技术进行的蛋白质组检测与传统的DNA测序的主要差别是？
Olink使用NGS（二代测序）作为测量样本中特定蛋白质生物标志物的相对浓度。在样本和文库制备过程中，会产生对标每个蛋白质生物标志物的特定序列（DNA条形码）的短DNA链。测序后，这些特定序列的DNA链的技术与原始蛋白质生物标志物的浓度成正比。
1.在Olink的每个检测试剂盒中可以检测到多少种蛋白质生物标志物？
对于Olink的Target系列而言，除了可以检测到的内部参照，Target96和Target48可以分别实现92个/45个不同靶标蛋白的检测。
2.从哪里可以获取关于Olink检测Panel中的某个特定蛋白质的更多的信息？
可以通过访问一些公开公共的资源，例如HumanProteinAtlas网站、UniProt数据库等。
3.一个OlinkExplore系列的试剂盒可以检测多少蛋白质生物标志物？
除去对照，一个Explore384试剂盒包含了368种蛋白质生物学标志物，而一个Explore3072的试剂盒，包含了8个Explore384的检测Panel，总共可以平行检测2944个蛋白质。
4.在不同的Explore384Panel中，是否有重叠的检测？为什么？
不同的Explore384Panel中都有IL6,IL8和TNF-±检测。它们用作额外的对照步骤。
5.定制的FocusPanel可检测的靶标数目的上限和下限是多少？
目前，OlinkFocusPanel可检测的靶标数目的上限是21、下限是1。但开发靶标上限和下限的检测Panel的价格是一样的。
6.FocusPanel中的靶标蛋白可以不是Olink靶标库中的吗？
不行，仅有Olink靶标库中的蛋白质可做FocusPanel。
7.OlinkPanel中的靶标蛋白是如何选择的呢？
在设计新的Panel时，Olink从广泛使用的公共访问生物信息学数据库中收集信息，包括UniProt、HumanProteinAtlas、GeneOntology(GO)和DisGeNET。
先选择已知和探索性生物标志物的组合并评估合适抗体的可用性，然后还需要通过Olink严格的验证测试和要求。选择过程和Panel组成是根据各个领域专家的意见共同制定的。
8.Olink的Panel中用的是什么抗体
Olink各检测Panel用的都是抗原纯化的多克隆或单克隆抗体或者是两者的组合。绝大部分都是商业化的抗体。
1.Explore和Target系列可接受的样本类型有哪些？
对于Explore系列，Olink在人类血浆血清样本上进行了充分地验证。
对于其他类型的样本，例如组织和细胞裂解物、细针活检、外泌体、微透析液、支气管肺泡灌洗液、细胞培养基、干血斑、滑液、脑脊液、斑块提取物、尿液、唾液等等，需在实验室内进行验证后再进行检测。
2.收样体积
虽然Explore384仅需1μL/样本、Explore1536需要4μL/样本用于检测，但由于使用各类移液设备，需要考虑到额外的死腔体积，因此我们要求每个96孔板中最少要保留10μL/样本。
考虑到运输过程中可能会伴有液体蒸发等，我们要求运输时，最低样本体积为50μL/样本。如有必要，我们可以返还剩余样本给您。
1.各Olinkpanels中需要提供的样本数目是多少
对于OlinkExplore系列产品和OlinkTarget96产品,针对一块96孔板，需要凑齐88个样本。对于OlinkTarget48产品,针对一块48孔板，需要凑齐40个样本。