本试剂盒根据荧光PCR技术原理，针对PCR试剂盒设计特异性引物和Taqman探针，通过荧光PCR检测仪进行检测，从而实现对PCR试剂盒的检测。
【储存条件及有效期】
1．避光-20℃储存，有效期12个月。
2．低温运输不能超过4天；开封后避光-20℃储存，对有效期没有影响。避免反复冻融，冻融6次不影响检测效果。
3．生产日期、有效期至：见外包装盒。
【适用仪器】
适用于ABI7500、Bio-RadCFX96、Roche480等全自动荧光PCR检测仪。
【样本要求】
1．样本种类：鼻/咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液；培养物等样品。
2．保存条件：采集的标本应及时送检，24小时内检测的应4℃保存，超过24小时的最好-70℃保存，并避免反复冻融。
【检测方法】
1．试剂准备（试剂准备区）
将试剂盒各组分置4℃避光融化，充分混匀后瞬间离心。计算试剂使用份数N（N=样本数+1管阳性对照+1管阴性对照），根据下表配置反应体系mix，加入一适当体积离心管中，充分混匀后瞬间离心，按20μL分装至PCR反应管/板，并转移至样本处理区。
组分
体积（μL）
qPCR预混液（含酶）
16
引物探针
4
总体积（反应体系mix）
20
2．样本处理（样本处理区）
①核酸提取
选择合适的核酸提取试剂盒提取核酸，具体按照相应的试剂盒说明书操作。
②加样
在已加入反应体系mix的PCR反应管/板上分别加入处理好的待检标本核酸、阴性对照、阳性对照各5μL，终体积为25μL。
盖紧管盖或封膜，瞬间低速离心后置荧光PCR检测仪扩增。
3．扩增检测（核酸扩增区）
步骤
温度
循环数
①预变性
95℃
5min
1cycle
②变性
退火/延伸/检测荧光*
55℃
10s
40s
40cycles
*步骤②中55℃时荧光检测，检测通道为FAM。*ABI系列荧光PCR仪不选ROX校正，淬灭基团选None。
4．结果分析根据分析后图像调节起止值，（建议起始设在3～15、终止设在5～20，同时调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击分析，在报告界面查看结果。
【质量控制】
1．阴性对照：Ct值＞38或未检出。
2．阳性对照：扩增曲线呈S型，且Ct值≤30。
3．同一实验以上要求需同时满足，否则本次实验视为无效。
4．每种检测靶标都需设阴阳对照，不同的靶标根据对应阴性调整基线阈值。
【结果判读】
1．FAM通道检测B组链球菌。
2．阴性：Ct值＞38或未检出。
3．阳性：扩增曲线呈S型，且Ct值≤35。
4．可疑：扩增曲线呈S型，且35＜Ct值≤38，需复检；复检结果若一致，判定结果为阳性。
【检验方法的局限性】
1．样品采集、运输、保存不当，试剂运输、保存、配置不当都可能会影响实验结果，甚至会导致假阴性结果。
2．如果实验室污染、试剂污染、样品交叉污染，可能出现假阳性结果。