作为分子生物学和蛋白质组学研究中应用最广泛的技术之一,蛋白质印迹法(WesternBlotting,WB)诞生四十年来,一直稳坐蛋白质研究技术的“头把交椅”。关于WB,几乎每一位经验丰富的实验老手都有着一本厚厚的血泪史,一个个二十出头的青年被这位「中年大叔」整天按在地上摩擦…
WB究竟有多“玄”呢?
凝胶电泳步骤
配制凝胶时,先配分离胶,再配浓缩胶。可根据目标蛋白分子量大小选择合适的分离胶浓度,一般分子量越高,分离胶浓度越低;浓缩胶浓度多为5%。
值得注意的是,玻璃板清洗干净后,可用烘箱将水分晾干,待温度降至室温后,再灌胶,避免产生气泡;加水液封时,速度要慢,用1ml抢沿着胶板上沿反复移动,避免分离胶高低不平,影响蛋白分离。
蛋白质印迹步骤
在这个过程中,需将分离的蛋白质转移到膜上,然后与特异性抗体一起孵育,转膜需要在冰浴中进行,凝胶和转印膜间不要留有气泡,否则气泡处的条带可能就不能转移到膜上了,同时要注意电极方向。转膜后的效果可通过丽春红染色或预染Marker来判断。
内参的选择
选择好合适并且好跑的内参,WB实验也就成功了一半。一般情况下,做全细胞和细胞质的WB实验时,选择β-actin基本能满足大部分的需要。而考察细胞核样品时,由于HistoneH3是染色体的组成型表达组分,表达相当稳定,并且特别好跑,可以算是细胞核内参的首选。
另外,针对一些特定的内参,蛋白上样量超过一定的量时,出来的条带可能不会有显著的差别。以前看过一篇文献讲的应该是β-actin,当上样量超过20μg时,条带灰度不会呈线性的增加。因此,在做WB校正时,调节合适的上样量也是影响实验成功较大的一个因素。
结果的独一无二
正常步骤做出来的WB条带,形状可以像煎饼,哑铃,鱼,等,这主要取决于研究人员如何将样品加载到凝胶上,蛋白质的量以及凝胶设备的特性。然后,凝胶带和背景上还有斑点、污渍、划痕、气泡和其他不规则现象。
所有这些变化让每个WB的条带都应该是独一无二的,如果有两条非常相似的条带,那就要怀疑下结果的真实性了,当然,除此之外还有噩梦一般的——白板...
每个做WB的科研人的终极噩梦——白板
想获得一张漂亮的WB图并不容易
每个实验室也有自己的“专属秘方”
但除了在实验步骤上下功夫
符合规范且高效率的后期处理也很关键
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2020年9月12-13日
北京·中科院遗传与发育生物学研究所
2020年9月26-27日
南京·南京大学
2020年10月10-11日
深圳·南方科技大学
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上海·复旦大学
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如有封面插图设计需求
01
课程内容
Part1
第一章
科研配图及图像数据基础知识
了解图像的概念,理解不同形式的数据表达,掌握版式、分辨率、格式(tiff/gif/jpg/png)、白平衡、灰度、色彩模式(RGB/CMYK/HSB/Lab)等基础知识。
学习数据图像、统计图表、绘制图形与排版的处理思路,在遇到不同需求时,比较各个软件的优势与用途。
第二章
投稿图像标准和图像处理规范
学习科研图像处理的基本原理及规范;如何在让数据更有说服力的同时符合科学伦理原则,了解哪些是严格禁止的,让数据处理无后顾之忧。
第三章
图像数据定量分析方法
常见图像数据蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即WesternBlot图像的优化处理。学习掌握如何查看直方图、去背景、统计灰度值等操作。
利用ImageJ实现图像数据的长度、角度的测量、光照不均校正等处理方法。
学习软件:「ImageJ」
第四章
实验数据图像美化处理技巧
免疫组化拼接、组图或多图批量处理。
进化树的美化、给电镜照片上色、调节白平衡。
将多张图片匹配为一致颜色、将多张图片裁剪为同样大小、将多张图片裁剪同样部位、制作局部放大的图片、调整图片的分辨率、尺寸和对比度。
使用仿制图章工具、画笔工具等对图像进行修复,不同情况下的抠图方法。
学习图像调色方法,给图片添加标尺和箭头。
学习软件:「Photoshop」
第五章
Graphpad统计与制作数据图表
学习生物医学常用的统计基础,了解Graphpad的软件布局、统计思路及常用技巧。
学习T检验、方差分析等统计分析方法,针对不同情况选择合适的统计方式。
运用Graphpad制作不同类型的数据图表,如:XY图、柱状图、热图(基因分析或蛋白表达)、散点图、折线图、列联表、生存曲线图、饼图等。
结合高档次文献中的数据图表表达方式与展现技巧,将Graphpad图表矢量输出,在其他软件中打开并进一步美化。
学习软件:「Graphpadprism8」
Part2
通路图/模式图/机理图的绘制
大量图像数据排版技巧
第六章
绘制矢量图的基础知识与技巧
矢量图形与位图的区别,哪些软件可以方便快捷的绘制科研图形。
多种图形的排布原则及常用技巧,如何突出重点的同时又做到整齐规范。
色彩构成,学习色彩的色相、明度、饱和度的具体含义,不同颜色对图像的影响。
多种颜色搭配的基础原则,如何在一张插图中运用好多种颜色。了解色环及配色的常用技法。
第七章
Ai绘制通路图/模式图/机理图
认识Adobeillustrator软件,界面布局及数据存储方式,学习矢量软件中的图形构成,不同功能对应的窗口及常用命令。掌握Adobeillustrator的基础操作。
学习不同类型的箭头快速绘制,将不同图形进行排布与连接,绘制完整的信号通路图、抗原抗体作用模式图、免疫细胞方面作用机理图等。
运用Adobeillustrator绘制常用科研配图基本形状:基因、细胞、蛋白质(受体配体)、肿瘤、病毒、实验仪器、小老鼠、针头等。将Ai软件活学活用,从不同案例中总结绘制规律,用最快速最简便的方法得到所需科研图形。
学习软件:「Adobeillustrator」
第八章
大量图像/图表数据的排版技巧
学习如何将大量图像数据轻松排列,修改单独图像尺寸与间距。
图像类数据的排版案例实战。如:照片、免疫荧光图、病理图、流式图、条带图等。
统计图表类数据的排版案例实战。如:XY图、柱状图、热图、散点图、折线图、列联表、生存曲线图、饼图等。
论文配图中的绘制图形、数据图像、统计图表等多种类型元素的组合排布,制作完整论文插图的实战演练。
学习软件:「Ai/Photoshop综合运用」
02
讲师团队
03
培训目标
图像数据处理更准确、更高效
掌握部分高级图像的设计排版能力
熟练使用国际通用的论文配图制作软件ImageJ进行实验图像数据处理、Graphpad进行统计与制作图表、Photoshop进行图像美化、Ai进行作图与排版等;
掌握制作符合国际规范的、可投稿至世界任何国际期刊高质量论文配图的基本能力;
掌握图像数据定量分析的方法和技巧,轻松处理WesternBlot、免疫荧光和免疫组化等图像数据;
事半功倍轻松应对学术会议展示、毕业答辩、成果汇报、项目申请书撰写、著作编纂等项目中的图片处理工作。
04
案例展示
实验图像处理与统计
大量图像数据的排版技巧
05
课程福利
报名后可无限次参加本课程全国其他任意场次,并随课赠送必备软件下载安装和常用绘图素材包,课后学员交流群专业讲师随时答疑指导。
「全国27个主要城市每年超70场次无限次复听」
ImageJ
Graphpad
Adobeillustrator
Photoshop
「必备软件及素材包下载安装」
「课后学员交流群讲师随时答疑指导」
06
课程特色
一线科研人员最实用最高效的经验总结,数十名来自国内知名高校以及中科院的科研人员参与课程开发,有着丰富的实验和投稿经验,直击学员最刚需的“要害”技能;
将生物、医学、药剂学、农学等领域中典型模型作为实战案例,同时根据每场次学员的专业背景进行素材整理,量身定制课程内容,将学以致用发挥到极致;
在传授实用技巧的同时,注重培养学员掌握图像数据处理过程中的思路,实现“技巧+思路”的双剑合璧,在实践中真正做到举一反三,不局限于有限的案例;
我们承诺:学员一次报名,终身免费复学。无需担忧学不会、学不精,只要你愿意学,幻彩保证奉陪到底!
07
培训现场
08
报名方式
具体会议地点以邮件通知为准
(更多场次请扫描下方二维码,表单中的场次实时更新)
注册费用
原价:2996元/人
团报价:2796元/人(3人及以上)
备注:
提供正规发票(包括会议注册表、邀请函等报销材料)、费用包含两日午餐,住宿及其他费用自理。
缴费方式
银行转账汇款(由济南分公司收款)
收款单位:北京中科幻彩动漫科技有限公司济南分公司
银行账号:15126701040003321
开户行:中国农业银行股份有限公司济南茶城支行
备注:姓名+单位+场次
支付宝转账
企业支付宝账户:zhongkehuancaijn@126.com
请核对户名:北京中科幻彩动漫科技有限公司济南分公司
现场刷卡/现金
由于名额有限,为保证您报名成功,现场报名或开课前对公转账未能到账的学员,请在报名时支付宝支付订金1000元,全款到账后当天退还订金。
专场需求
//专场简介
//专场内容
专场培训的内容将根据举办方提出的图像需求,我方单独制定适合本单位研究方向、贴合日常绘图需求的课程内容,根据学员要求进行备课,案例素材契合度更高,大幅提升学习效率。
//专场优势
根据研究方向定制课程内容,针对性强;
专场培训费用更加优惠;
上门授课,免去差旅的麻烦。
//课程咨询
专场培训课程详情咨询请联系
09
常见问题
学员
中科幻彩
请问学习的软件有mac版本吗?
培训中涉及到的每款软件都有mac版本可以下载使用,完全适用于苹果笔记本电脑~
每场培训有多少学员呀?不会是那种人山人海的大课吧?
为保证教学质量,也为学员营造舒适的学习环境,我们每场培训都会将招生人数限制在30人以内,以保证良好的课堂秩序,同时安排助教协助学员进行软件安装、现场答疑、课堂辅助教学等。
我是慢热型的学生,接受新知识慢,一次学不够怎么办?
我们每个月都会在全国不同城市安排多场次培训,老学员可以免费复听,一次报名终身免费复学,只要你学不够,我们就一直教下去。
可以开具发票进行报销吗?
当然可以!我们将为学员开具正规发票,并可以根据学员报销需求提供培训邀请函、项目明细清单、会议注册表等材料,并在培训当天将发票和报销材料发放给学员。
培训提供食宿吗?
我们为学员提供两日培训的午餐,住宿需要学员自费,我们会在报名确认邮件中发送周边酒店信息,方便学员选择和预定。
科学动画制作
千言万语不敌动画十秒,文字描述在动画演示面前显得笨拙无比,越来越多的顶刊开始引入视频摘要(VideoAbstract)的表达形式,生动的科学视频让科研成果的表达不再晦涩难懂,也让更多学术圈外的普通人能够触及科学最前沿的内核,为科学成果的传播提供更加有力的途径。
在这个连美国总统都玩转Twitter的新媒体时代,如果你还局限于文字+图片这种单纯保守的科研表达形式,那你很可能就要被同行所抛弃了,因为科学成果的表达有更高效更直接的载体——科学动画。
以上动画制作来自
中国科学院物理研究所高鸿钧院士
经过多年研究攻关,中国科学院院士、中科院物理研究所研究员高鸿钧团队在世界上首次实现了原子级精准控制的石墨烯折叠,其成果发表在了国际顶级杂志Science上,这是目前世界上最小尺寸的石墨烯折叠,对构筑量子材料和量子器件等具有重要意义。
北京航空航天大学张广军院士
列车弓网运行状况在线动态检测系统-北京航空航天大学张广军院士团队研制了列车运行状况正线动态测试站三类系列测试设备,填补国内空白,主要性能指标达到或超过国外主流产品,满足了我国铁路运输的迫切需求。
北京纳米能源与系统研究所王中林院士
北京纳米能源与系统研究所王中林院士和李舟研究员领导的研究团队与北京市生物医学工程高精尖创新中心和海军军医大学的研究者联合研制了共生型心脏起搏器(SPM,symbioticcardiacpacemaker),它可以从心脏跳动中获取能量,为起搏器自身提供电能。SPM的能量收集部分为植入式摩擦电纳米发电机(iTENG),其具有出色的柔性、良好的生物相容性、优异的稳定性和生物体内高功率输出性能等特点。在未来,植入式医疗电子设备可以利用人体能量实现自驱动。
中国科学院化学研究所刘云圻院士
作为材料学领域的后起之秀,石墨烯被认为是电子器件理想的候选材料,在近期发布的2020十大科学趋势预测当中,石墨烯有望成为碳电子学的主体材料。作为中国石墨烯研究领域的权威学者,中国科学院院士刘云圻利用化学气相沉积法合成氮掺杂石墨烯并对其电学性质进行了研究,发现氮掺杂可以有效地影响石墨烯的电学性质,极大地推动了石墨烯的研究与应用。
中国科学院微电子研究所刘明院士
中国科学院微电子研究所刘明院士团队从能带工程出发,引入新材料/结构,综合优化CTM隧穿层/俘获层/阻挡层,实现低压、高速、长数据保持和多值存储。在实验室工作的基础上,2008年开始与产业界合作研发纳米晶闪存,在生产平台上首次完成纳米晶存储器系统研究;获得自主产权纳米晶存储技术整体解决方案,解决了纳米晶存储材料分布均匀、存储器物理模型仿真、集成工艺、可靠性及芯片集成等技术难题。
中国科学院物理研究所柳延辉研究员
中国科学院物理研究所柳延辉研究组与合作者基于材料基因工程理念开发了具有高效性、无损性、易推广等特点的高通量实验方法,设计了一种Ir-Ni-Ta-(B)合金体系,获得了高温块体金属玻璃,其玻璃转变温度高达1162K。新研制的金属玻璃在高温下具有极高强度,1000K时的强度高达3.7千兆帕,远远超出此前报道的块体金属玻璃和传统的高温合金。