本发明涉及生物制品，尤其涉及一种猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗及其制备方法与应用。
背景技术：
1、猫细小病毒病(felinepanleukopenia，fp)又称猫泛白细胞减少症、猫瘟、猫传染性肠炎，是由猫细小病毒(felinepanleukopeniavirus，fpv)引起的一种急性高度接触性传染病，是一种对猫危害严重的病毒性疾病，临床表现以患病猫突发高热、呕吐、腹泻、脱水及循环血流中白细胞数量急剧减少为特征。fpv主要感染猫科与鼬科等多种动物，尤其以6月龄以下幼小动物的发病率和死亡率更高，1岁以内的幼猫发病率高达83.5％，而且全窝幼猫会陆续发病，是猫科动物最重要的传染病，对猫科动物生命造成了严重威胁。
2、猫传染性鼻结膜炎病毒(又称猫嵌杯病毒，fcv)是杯状病毒科、杯状病毒属的重要成员之一，fcv可感染多种动物，除了猫以外，还有老虎、狮子、猎豹等多种珍稀野生动物。猫科动物对fcv均易感，其中幼猫的易感性最高，其主要临床症状表现为鼻炎、结膜炎、急性口腔溃疡、肺炎、慢性胃炎和跛行等。该病发病率较高，成年猫的死亡率较低，幼猫的死亡率较高，可达到40％以上。目前研究发现fcv只有一个血清型，且在毒力、抗原性和遗传性方面变化很大。这种高水平的抗原性变异使得难以获得在猫中针对fcv的广泛保护。
3、猫传染性鼻气管炎是由猫疱疹病毒1型(fhv-1)引起的以上呼吸道症状为主的传染病。fhv-1感染后表现为上呼吸道炎症、口腔溃疡、角膜结膜炎、慢性鼻窦炎，可侵害三叉神经、视神经，严重者可导致幼猫死亡。目前，fhv-1在美国、日本、德国、中国等国家和地区均有报道，除家猫感染外，老虎、猎豹等野生猫科动物也可感染，对宠物健康与野生动物保护造成了严重的威胁。
4、为了猫免遭传染病的威胁，保持其身心健康，对其接种疫苗是关键。针对上述三种传染病，目前市售疫苗均为进口疫苗，主要为猫三联疫苗，包括fpv、fcv、fhv。然而，病毒变异是导致当前疫苗免疫失败的主要原因，尤其fcv在毒力、抗原性和遗传性方面变化很大，目前市面上的国外疫苗与国内流行毒株进化树属于不同分支，同源性较低，已经不能起到很好的保护效果。同时国外的fhv疫苗也不能对我国的流行毒株起到很好的保护效果。因此，需要针对我国流行毒株建立安全、有效的三联疫苗，来填补国内空白。
技术实现思路
1、本发明针对现有的fpv、fcv、fhv三联疫苗不符合本国流行趋势、不能起到很好的免疫效果的技术问题，提出一种新的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗及其制备方法与应用。
2、本发明的目的之一是，提供一种猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗，所述三联灭活疫苗的抗原包括灭活的猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白、灭活的猫传染性鼻结膜炎病毒抗原和灭活的猫传染性鼻气管炎病毒抗原；其中，猫传染性鼻结膜炎病毒抗原由猫传染性鼻结膜炎病毒cc3株制备，猫传染性鼻结膜炎病毒cc3株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmccno.45218，分类命名为猫传染性鼻结膜炎病毒，保藏日期为2022年7月1日，该病毒与国内流行毒株属同一分支，同源性性较高。猫传染性鼻气管炎病毒抗原由猫传染性鼻气管炎病毒cp2株制备，猫传染性鼻气管炎病毒cp2株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmccno.45219，分类命名为猫传染性鼻气管炎病毒，保藏日期为2022年7月1日。
3、进一步地，猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白原液血凝素凝集价为1:4096。猫传染性鼻结膜炎病毒原液病毒含量为109.50tcid50/ml。猫传染性鼻气管炎病毒原液病毒含量为108.75tcid50/ml。
4、进一步地，猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白的基因序列如seqidno.1所示。
5、进一步地，灭活的猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白、灭活的猫传染性鼻结膜炎病毒抗原和灭活的猫传染性鼻气管炎病毒抗原按病毒原液体积比1:2:2的比例配苗。
6、进一步地，灭活剂采用0.1mol/lbei。
7、进一步地，三联灭活疫苗还包括gel02pr佐剂，灭活的猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白、灭活的猫传染性鼻结膜炎病毒抗原和灭活的猫传染性鼻气管炎病毒抗原混合病毒液与gel02pr佐剂按7:1的体积比例混合。
8、本发明的目的之二是，提供一种上述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗的制备方法，包括猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白、猫传染性鼻结膜炎病毒抗原和猫传染性鼻气管炎病毒抗原的制备方法和配苗方法。
9、本发明的目的之三是，提供上述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗在制备猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎药物中的应用。
10、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
11、本发明筛选分离出了针对我国流行的、高免疫原性、高病毒滴度、遗传稳定的猫传染性鼻结膜炎病毒cc3株和猫传染性鼻气管炎病毒cp2株，更加适合于本国流行趋势，该新分离株经传代后可作为疫苗株使用，制备得到的三联灭活疫苗安全性能好，抗原相容性较好，免疫动物后未出现由疫苗引起的任何局部和全身不良反应，安全性好。同时可诱导高浓度的细胞因子分泌，包括th1型细胞因子(tnf-α、ifn-γ)和th2型细胞因子(il-6)，免疫原性高，免疫持续期长，进一步提高免疫效果，保证疫苗的稳定性。尤其是在对于猫传染性鼻结膜炎病毒的保护效力上，效果尤为突出，填补了国内空白。
1.一种猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗，其特征在于，所述三联灭活疫苗的抗原包括灭活的猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白、灭活的猫传染性鼻结膜炎病毒抗原和灭活的猫传染性鼻气管炎病毒抗原；其中，猫传染性鼻结膜炎病毒抗原由猫传染性鼻结膜炎病毒cc3株制备，猫传染性鼻结膜炎病毒cc3株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmccno.45218，分类命名为猫传染性鼻结膜炎病毒，保藏日期为2022年7月1日；猫传染性鼻气管炎病毒抗原由猫传染性鼻气管炎病毒cp2株制备，猫传染性鼻气管炎病毒cp2株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmccno.45219，分类命名为猫传染性鼻气管炎病毒，保藏日期为2022年7月1日。
2.根据权利要求1所述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗，其特征在于，猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白原液血凝素凝集价为1:4096。
3.根据权利要求1所述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗，其特征在于，猫传染性鼻结膜炎病毒原液病毒含量为109.50tcid50/ml。
4.根据权利要求1所述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗，其特征在于，猫传染性鼻气管炎病毒原液病毒含量为108.75tcid50/ml。
5.根据权利要求1所述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗，其特征在于，猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白的基因序列如seqidno.1所示。
6.根据权利要求1所述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗，其特征在于，灭活的猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白、灭活的猫传染性鼻结膜炎病毒抗原和灭活的猫传染性鼻气管炎病毒抗原按病毒原液体积比1:2:2的比例配苗。
7.根据权利要求1所述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗，其特征在于，灭活剂采用0.1mol/lbei。
8.根据权利要求1所述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗，其特征在于，还包括gel02pr佐剂，灭活的猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白、灭活的猫传染性鼻结膜炎病毒抗原和灭活的猫传染性鼻气管炎病毒抗原混合病毒液与gel02pr佐剂按7:1的体积比例混合。
9.根据权利要求1所述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.根据权利要求1-7任一项所述的猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎三联灭活疫苗在制备猫泛白细胞减少症、猫传染性鼻结膜炎和猫传染性鼻气管炎药物中的应用。