本发明涉及一种宠物用五倍子香波及其制备方法和应用，具体涉及一种具有抑菌、除虫杀螨、清洁度高但又能保持宠物皮肤与毛发持久水润不干燥、长期使用能提高宠物皮肤抵抗力的香波及其制备方法和应用。
背景技术：
皮肤病是犬猫临床上常见的疾病之一，临床常见症状为脱毛、瘙痒、丘疹、溃烂等。病因常有寄生虫性皮肤病、细菌性皮肤病、真菌性皮肤病、变态反应性皮肤病、激素性皮肤病、代谢性皮肤病。病情发展后可多重混合感染，可能是两种或者多种病原混合感染，治疗复杂，病程较长，治疗效果差。特别严重的病例全身感染引起脓皮症或败血症甚至死亡。在众多的病因中以寄生虫性皮肤病、真菌性皮肤病、细菌性皮肤病和混合性皮肤病多发。对于宠物皮肤病的治疗，通常使用唑类如酮康唑、伊曲康唑、氟康哗、大环内酯类伊维菌素、阿维菌素等化学药物，药物形式包括喷雾剂、软膏、乳膏和凝胶剂等，其具有抗菌谱广，抗菌机制独特、杀菌力强等特点。但是随着其临床应用日益广泛，耐药性问题也随之变得愈来愈严重，随着耐药性的不断增加，也给临床选药和新药的研发带来了巨大挑战。而中药治疗不仅副作用小，同时无耐药性。
现有的宠物香波，能进行除螨的多加入化学物质，如专利cn201110024723.1公开了一种除螨宠物香波，其特征在于使用n,n~双（3~氨丙基）十二烷胺（lonzabac12.100）作为除螨剂。此外，cn201410541086.9公开的一种中草药驱虫除螨的宠物香波及其制备方法中，虽然已经将五倍子作为除螨的重要组分，但其制作工艺相对复杂，需要温水浴、蒸干、浓缩、脱色、过滤等，耗时较长。cn1079776a公开了一种犬、猫专用药物洗涤剂，选用对人畜无害的杀虫剂——双甲脒，配以表面活性剂，皮毛保护剂及香料色素等辅料经加工制成，具有保持宠物皮毛清洁、光亮、柔软的效果，同时可杀灭螨、蚤等皮肤寄生虫，对真菌类皮肤病也有一定的治疗作用，但双甲脒在气温低于25℃以下使用，药效发挥作用较慢，药效较低，故具有一定的局限性。
基于上述分析，一种杀菌除螨效果明显、柔和无刺激、清洁力度强、还能防止动物皮肤表面的水分蒸发，保持毛发和皮肤持久水润不干燥、长期使用能提高宠物皮肤抵抗力的宠物用五倍子香波是目前行业内急需的。
技术实现要素：
鉴于上述不足，本发明的目的在于提供一种清洁抑菌、除虫杀螨、柔和无刺激、清洁力度强、保持毛发和皮肤持久水润不干燥、长期使用能提高宠物皮肤抵抗力的宠物用五倍子香波，对犬猫常见皮肤病有预防和辅助治疗的效果。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案，本发明各组分的用量也是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在下述重量范围内制备出的宠物用五倍子香波均具有清洁抑菌、除虫杀螨、柔和无刺激、清洁力度强、保持毛发和皮肤持久水润不干燥、长期使用能提高宠物皮肤抵抗力的优势。
一种宠物用五倍子香波，主要包括如下重量份配比的原料：
五倍子提取液5~15份、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10~20份、十二烷基硫酸钠7~15份、十二烷基甜菜碱10~22份、椰油酸二乙醇酰胺1~3份、乙二胺四乙酸二钠3~5份、20%氯化钠溶液0.1~0.9份、香精0.1~0.3份、珠光浆1~3份、卡波0.2~0.4份、c12~13醇乳酸酯0.4~0.6份、柠檬酸适量、去离子水适量。
进一步的，该五倍子香波还包括如下重量份配比的原料：
白鲜皮提取液2~3份、啤酒酵母粉2~3份。
进一步的，该五倍子香波由如下重量份配比的原料组成：
五倍子提取液10份、白鲜皮提取液2.5份、啤酒酵母粉2.5份、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠15份、十二烷基硫酸钠11份、十二烷基甜菜碱16份、椰油酸二乙醇酰胺2份、乙二胺四乙酸二钠4份、20%氯化钠溶液0.5份、香精0.2份、珠光浆2份、卡波0.3份、c12~13醇乳酸酯0.5份、柠檬酸适量、去离子水30份。
进一步的，所述五倍子提取液制备方法如下：
取五倍子生药洗净、干燥、粉碎，加入五倍子重量比5~9倍浓度为55%~85%的乙醇于30~60℃下温浸提取，提取2~3次后合并滤液，真空减压浓缩至膏状，得五倍子提取物，将五倍子提取物置于质量3~5倍的乙醇中，并于3~7℃下醇沉24h，离心、抽滤，滤液回收乙醇浓缩，浓缩液再经减压浓缩到相对密度为1.1~1.2，即得五倍子提取液，五倍子鞣酸含量≥45%。
进一步的，所述白鲜皮提取液制备方法如下：
取白鲜皮干药洗净、干燥、粉碎后，加入15倍体积蒸馏水和ph为6.5的缓冲溶液置于35℃下搅拌3h，再加入盐酸将ph值调节至2.0，静置24h，减压过滤后得白鲜皮水解液，取4倍体积量的氯仿对白鲜皮水解液进行萃取4次，回收水解液，收集氯仿萃取层，减压蒸馏回收氯仿，即得白鲜皮提取液。
进一步的，该宠物用五倍子香波的制备方法包括如下步骤：
（1）称取处方量的去离子水于烧杯中加热至60℃-65℃，加入处方量的乙二胺四乙酸二钠，降低温度至40℃，加入五倍子提取液、白鲜皮提取液并不断搅拌至全溶，保持温度；依次加入月桂酸聚氧乙烯醚硫酸钠和十二烷基硫酸钠，搅拌至完全溶解，保持温度加入十二烷基甜菜碱和椰油酸二乙醇酰胺，搅拌均匀；保持温度40℃，依次加入珠光浆、20%氯化钠溶液；
（2）待温度降至常温，依次加入啤酒酵母粉、c12-13醇乳酸酯、香精、卡波，用50%柠檬酸溶液调整ph至6.5-8.5，搅拌至体系均匀，静置即可得成品。
本发明还提供了一种宠物五倍子香波的使用方法，每日1次，14日为一疗程，可缓解犬猫皮肤瘙痒、局部红斑、脱毛症等症状。
本发明具有以下有益效果：
1、制备工艺简单，取材广泛，成本低廉，可操作性强，对环境友好，适合于工业化的推广应用。
3、不含硅油、瓜尔胶等物质，不会堵塞宠物的毛孔，减少掉毛、脱毛等症状，锁住皮肤与毛发表面的水分，让宠物在使用香波后能保持毛发柔顺不打结，而啤酒酵母粉中的多种营养物质能恢复宠物毛发的光泽度。
4、本发明的配方和工艺密不可分，相互协同，是不可缺少的一个整体工艺，只有在本发明配方和工艺条件下，才能很好的平衡各原料，使得五倍子提取液、白鲜皮提取液、啤酒酵母粉协同增效，得出去污力强，不仅能强化皮肤的抵抗力，还能保持皮肤与毛发长久水润不干燥，长期使用还能提高宠物皮肤抵抗力。
具体实施方式
下面我们将结合具体实施方式对本发明作进一步的阐述。
实施例1
宠物用五倍子香波
（1）制备五倍子提取液：取五倍子生药洗净、干燥、粉碎，加入五倍子重量比7倍浓度为70%的乙醇于45℃下温浸提取，提取3次后合并滤液，真空减压浓缩至膏状，得五倍子提取物，将五倍子提取物置于质量4倍的乙醇中，并于5℃下醇沉24h，离心、抽滤，滤液回收乙醇浓缩，浓缩液再经减压浓缩到相对密度为1.2，即得五倍子提取液，五倍子鞣酸含量≥45%。
（2）制备白鲜皮提取液：取白鲜皮干药洗净、干燥、粉碎后，加入15倍体积蒸馏水和ph为6.5的缓冲溶液置于35℃下搅拌3h，再加入盐酸将ph值调节至2.0，静置24h，减压过滤后得白鲜皮水解液，取4倍体积量的氯仿对白鲜皮水解液进行萃取4次，回收水解液，收集氯仿萃取层，减压蒸馏回收氯仿，即得白鲜皮提取液。
（3）称取30kg去离子水于烧杯中加热至62.5℃，加入4kg乙二胺四乙酸二钠，降低温度至40℃，加入五倍子提取液10kg、白鲜皮提取液2.5kg并不断搅拌至全溶，保持温度；依次加入月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠15kg、十二烷基硫酸钠11kg，搅拌至完全溶解，保持温度加入十二烷基甜菜碱16kg、椰油酸二乙醇酰胺2kg，搅拌均匀；保持温度40℃，依次加入珠光浆2kg、20%氯化钠溶液0.5kg；
（4）待温度降至常温，依次加入啤酒酵母粉2.5kg、c12-13醇乳酸酯0.5kg、香精0.2kg、卡波0.3kg，用50%柠檬酸溶液调整ph至7.5，搅拌至体系均匀，静置即可得成品。
实施例2
制备方法同实施例1，只是该宠物用五倍子香波由如下重量份配比的原料制成：
五倍子提取液5kg、白鲜皮提取液3kg、啤酒酵母粉3kg、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠10kg、十二烷基硫酸钠7kg、十二烷基甜菜碱10kg、椰油酸二乙醇酰胺2kg、乙二胺四乙酸二钠4kg、20%氯化钠溶液0.1kg、香精0.2kg、珠光浆2kg、卡波0.3kg、c12~13醇乳酸酯0.5kg、柠檬酸适量调节ph至6.5、去离子水20kg。
实施例3
五倍子提取液15kg、白鲜皮提取液3kg、啤酒酵母粉3kg、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠20kg、十二烷基硫酸钠15kg、十二烷基甜菜碱24kg、椰油酸二乙醇酰胺2kg、乙二胺四乙酸二钠4kg、20%氯化钠溶液0.9kg、香精0.2kg、珠光浆2kg、卡波0.3kg、c12~13醇乳酸酯0.5kg、柠檬酸适量调节ph至8.5、去离子水40kg。
试验例1
宠物用五倍子香波（相比实施例1不添加白鲜皮提取液与啤酒酵母粉）
试验例2
宠物用五倍子香波（相比实施例1不添加五倍子提取液）
试验例3
不同五倍子提取液中鞣酸含量的最低抑菌浓度
采用平板涂布法测定五倍子提取液鞣酸含量对各致病菌的最低抑菌浓度（mic），分别量取20ml的不同鞣酸含量的五倍子提取液加入到融化的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，鞣酸含量分别为45%、35%、25%、15%将其均匀混合后，将培养基倒入到培养皿中，待培养基凝固后，用移液管移取1ml的菌液放入培养皿中，用无菌刮铲将菌液在平板上均匀涂抹，静置20min后放置在37℃下培养24h，观察平板上微生物的生长情况，以完全不长菌的最低浓度作为五倍子提取液的最低抑菌浓度，选择最优浓度进行生产配置，具体情况如表1所示。
表1五倍子提取液鞣酸含量对各种致病菌的最低抑菌浓度
。
注：“-”表示无菌生长；“+”表示有菌生长；“+”、“++”、“+++”表示菌种不同生长量。由表1可知，当五倍子提取液中的鞣酸含量为45%时，对大肠杆菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌、普通变形杆菌、肠炎沙门氏菌均有显著的抑菌作用；当五倍子提取液中的鞣酸含量为35%时，对铜绿假单胞菌和肠炎沙门氏菌则失去抑制作用；当五倍子提取液中的鞣酸含量为25%时，仅仅对金黄色葡萄球菌有抑制作用，其他细菌的抑制作用全部失效，当五倍子提取液中的鞣酸含量为15%时，无任何抑菌作用。为提高宠物用香波的抑菌作用，我们选择鞣酸含量为45%的五倍子提取液作为有效成分。
性能测试
选择实施例1与各试验例的五倍子香波进行性能测试，将各产品包装后置于30~35℃下，恒温放置2周，再置于0~10℃下24h，产品无任何变化。其护肤效果测试如下：随机选取45只2岁猫、45只2岁狗，将90只宠物随机分为3组，每组15只猫加15只狗，分别使用实施例1、试验例1、2的宠物香波进行清洗，3天1次，持续使用3个月，观察每组宠物使用香波3天后的毛发情况、去污率，使用香波3个月后发生皮肤病的几率，结果如表2。
表2产品性能测试数据
通过表2可看出，长期使用实施例1的宠物香波对宠物的毛发具有柔顺、水润、易梳理的效果，还不易掉毛，使用3个月后宠物发生皮肤病的几率仅为3.3%。试验例1在使用后毛发打结不易梳理，日常生活中易掉毛，说明其柔顺效果和毛孔清洁度不及实施例，使用3个月内宠物发生皮肤病的几率为20%，显著高于实施例1。试验例2在洗完后毛发易梳理，日常生活中略掉毛，洗后第2天毛发不油腻，效果不及实施例1，3个月宠物皮肤病发病几率为30%，显著高于实施例1和试验例1。说明只有在添加五倍子提取液、白鲜皮提取液、啤酒酵母粉的共同作用下才能维持宠物毛发的蓬松、柔顺、水润，同时对宠物皮肤毛孔的清理有促进作用，不易掉毛，还能降低动物罹患皮肤病的几率。
杀虫效果测试
对实施例1与各试验例的五倍子香波采用标准的药物浸渍法测试其杀虫效果，先经过预试验决定大概浓度范围，所有的宠物香波均用蒸馏水对半稀释，在试验中每组微小牛蜱未吸血幼蜱10只，每处理3个重复。吸取1ml香波稀释液加入微小牛蜱未吸血幼蜱中，浸渍5s~10min，将药物吸出，用滤纸拭干蜱体表的香波稀释液，转移至底部有水的干燥皿中，室温，相对湿度保持在80~85％。24h后，观察其死亡情况。用以下程序判断死亡微小牛蜱未吸血幼蜱：一是直接观察，微小牛蜱各肢不活动；二是在解剖镜下，看不见微小牛蜱各肢活动；三是在解剖镜下用牙签轻微接触，也看不见微小牛蜱各肢活动。死亡率计算公式：死亡率%=（死亡蜱虫数/试验蜱虫数）×100%。见表,3。
表3各组香波比对牛蜱的杀灭效果
通过表3可看出实施例1的蜱虫死亡率可达100%，杀虫效果显著，试验例1中未添加白鲜皮提取液与啤酒酵母粉，蜱虫死亡率仅为83.3%，显著低于实施例1，试验例2中未添加五倍子提取液，蜱虫死亡率为67.7%，略低于试验例1，显著低于实施例1，说明五倍子的添加对杀虫效果具有至关重要的作用，同时白鲜皮和啤酒酵母粉能促进皮肤的新陈代谢，软化皮肤角质，增强皮肤对药物的吸收效果，是一种密不可分的配方。
宠物用五倍子香波的体外抑菌试验
挑取复活并于麦康凯培养基上已纯化后的细菌菌落于营养肉汤中，37℃培养18h，用无菌生理盐水将菌液稀释至相当于0.5麦氏比浊标准（1×108cfu/ml），最终稀释10倍到1×105cfu·ml-1。精密称量待测药物，放入聚丙烯离心管中，使五倍子香波浓度为62.48mg/ml。采用微量肉汤法向无菌的96孔平板中的l~8孔各加入100μl的菌液，8孔不加菌液而加100μl营养肉汤。然后从l孔中加入相应的待测药物100μl，进2倍稀释至7孔，9孔作为对照孔不加药物，37℃90r/min培养18~24h，每组做3个重复实验。
18h后每孔加入10μl0.25%ttc，继续培养2h，若有活菌则显红色，判断mic。18h后将平板上没有长细菌的接种在平板上再放置24h，判读观察mbc。
试验结果表明：五倍子香波对大肠杆菌的mic值和mbc均为1.95mg/ml，对大肠杆菌有杀灭作用；五倍子香波对金黄色葡萄球菌的mic值为0.98mg/ml，mbc为1.95mg/ml，对金黄色葡萄球菌有良好的抑制作用。
宠物用五倍子香波的体外抑真菌试验
从保藏菌种管中分别挑取l块犬小孢子菌、石膏样孢子菌和须毛藓菌菌落(约lmm×1mm)，放入消毒乳钵中，加入0.5ml生理盐水，研磨成真菌混悬液，再用生理盐水调整菌液密度到l×105/ml~1×106/ml。对照管和试验管每管均用划线法接种l白金耳，置28℃恒温箱中培养，每日观察实验结果。观察7d后，以有无菌生长为判断标准，与对照组(菌落生长正常)比较，有肉眼可见菌落生长者为无抑菌作用，无菌落生长者的药物最低浓度为药物的最低抑菌浓度(mic)。将上述培养未生长的菌落接种至液体培养基，继续孵育12d，每天观察实验结果。观察12d后，如果液体培养基混浊，表示有真菌生长，液体培养基清亮，表示无真菌生长，液体培养基中仍无真菌生长的浓度判断为药物的mfc。
试验结果表明：宠物用五倍子香波对皮肤病3种常见真菌病原菌有良好的抑制效果，其中香波对须毛藓菌和石膏样孢子菌的mic值和mfc值均为0.49mg/ml，对犬小孢子菌的mic值为0.24mg/ml，mfc值为0.49mg/ml。
宠物用五倍子香波的体外杀螨试验
将宠物用五倍子香波用去离子水配制成500mg/ml的浓度，再等比逐级稀释成5个浓度（500至31.25mg/ml，r=2），蒸馏水作为对照组。挑取痒螨幼虫置于小平皿（直径5cm）中，随机分为6组，每组20只，3个重复，实验参考fichi等的离体浸杀的方法，每个培养皿加入药液10μl，然后将所有平皿25℃、75%相对湿度下培养，12h后镜检死亡情况。