细胞增殖论文范文

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EffectsofGranulocyteMacrophageColonyStimulatingFactoronGrowthofMurineBoneMarrowEndothelialCells

Keywordsbonemarrowendothelialcells;GMCSF;proliferation

JExpHematol2007;15(3):622-625

动物

昆明小鼠，由中南大学湘雅医学院动物学部提供，雌雄不限，普通饮食。

主要试剂和仪器

IMDM为Gibco公司产品；新生牛血清购自杭州四季清生物制品研究所；重组小鼠粒巨噬细胞集落刺激因子（rmGMCSF）为R&D公司产品；vWF抗体、CY3标记的羊抗兔IgG为Sigma公司产品；MTT、二甲基亚砜（DMSO）为Sigma公司产品；酶标仪为Awarens公司产品；CO2培养箱购自美国Forma。

小鼠骨髓内皮细胞及内皮细胞集落的培养

用颈椎脱臼法处死小鼠，在无菌条件下取出股骨，用IMDM冲出骨髓细胞，制成单细胞悬液，取1×106个小鼠骨髓单个核细胞种入1ml含有15%新生牛血清的EndoM培养体系，置于24孔板中，于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养5天后,用胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液，按每孔1×104个细胞种入24孔板，每组3孔。于二氧化碳培养箱内培养15天后计数内皮细胞集落数，以≥50个细胞的聚合计为1个集落。

内皮细胞的形态观察及vWF的检测

培养的骨髓内皮细胞集落经WrightGiemsa染色后，显微镜下观察内皮细胞形态。用间接免疫荧光法检测骨髓内皮细胞vWF。将内皮细胞培养于24孔板内放置的盖玻片上，当细胞间没有明显的间隙时，取出盖玻片，用PBS清洗，用4%的多聚甲醛固定30分钟，用PBS洗3次：2%的正常羊血清封闭4小时，加入vWF抗体，4℃过夜，用PBS洗3次，加入二抗CY3IgG，37℃孵育60分钟,PBS洗3次：置于荧光显微镜下观察。以本室建的小鼠骨髓内皮细胞株［7］为阳性对照，骨髓成纤维细胞为阴性对照。

不同浓度的GMCSF对小鼠骨髓内皮细胞形成集落的影响

取纯化的小鼠骨髓内皮细胞培养于24孔板中，每孔5000个细胞，在基本培养体系（含1%浓度EndoM）的基础上分别加入5、10、25ng/ml的rmGMCSF，对照组不加入GMCSF，每组3孔。置于CO2培养箱培养15天，于倒置显微镜下记数集落数，≥50个细胞的聚合计为1个内皮细胞集落。

GMCSF对内皮细胞增殖影响的MTT法测定

将纯化的小鼠骨髓内皮细胞按5000个/孔培养于96孔板，每孔0.2ml，每组3孔。实验组培养体系中分别加入5、25、100ng/ml的rmGMCSF，对照组内不加。在37℃、5%CO2、饱和湿度下分别培养5天和10天，取出培养板吸去培养液，然后加入无血清的IMDM180μl和20μlMTT溶液，放入培养箱孵育4小时，吸去液体，各孔加入DMSO150μl，振荡10分钟，使结晶充分溶解。选择492nm波长，在酶标仪上测定各孔的光吸收值（OD492）。

生长曲线

细胞周期的流式细胞术检测

无菌条件下取小鼠骨髓单个核细胞，按2×106个细胞种于6孔培养板中（2ml培养体系中含15%新生牛血清的EndoM），置于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养5天，然后吸去培养液，加入两种不同培养体系，对照组加含15%新生牛血清的IMDM，实验组加15%新生牛血清的IMDM和100ng/ml的rmGMCSF，每组各10孔，置于CO2培养箱培养3天后，用胰酶消化细胞，200×g,离心5分钟，用PBS洗涤细胞2次之后，用300μlPBS重悬细胞，加入冰冷的乙醇（-20℃）约700μl（终浓度为70%），将细胞放于-20℃过夜处理后，用流式细胞仪检测细胞周期。

细胞传代培养

统计学处理

实验数据为3次结果，以mean±SD表示。不同处理组两组间比较采用t检验，应用SPSS软件分析，P<0.05表示有统计学意义。

结果

细胞形态每孔种入小鼠骨髓内皮细胞5000个，对照组加基础培养液,实验组在基础培养液的基础上分别加入rmGMCSF5、10、25ng/ml。与对照组相比，实验组集落数均明显增多（图3），说明rmGMCSF对小鼠骨髓内皮细胞的增殖有明显刺激作用。

rmGMCSF对内皮细胞增殖的影响

小鼠骨髓内皮细胞培养5、10天，分别进行MTT的检测，结果表明rmGMCSF对小鼠骨髓内皮细胞生长促进作用明显，各组与对照组相比差异显著（P<0.01）（图4）。

GMCSF对EC细胞周期的影响

运用流式细胞仪检测细胞周期，观察GMCSF对EC细胞周期的影响。结果显示GMCSF使细胞进入S期的比例为9.3%，与对照组2.1%相比有明显差别。此结果说明GMCSF能够促使细胞进入S期，加快细胞的分裂，从而促进了细胞的增殖（图5）。Figure5.EffectofGMCSFoncellcycleofendothelialcells.A:grouptreatedbyGMCSF.B:controlgroup.

体外扩增传代对内皮细胞增殖的影响

Figure6.Growthcurveofthefirstandfourthpassagegenerationsofmurineboneendothelialcells.讨论

【参考文献】

1LuttunA,CarmelietG,CarmelietP.Vascularprogenitors:frombiologytotreatment.TrendsCardiovascMed,2002;12:88-96

2RafiiS,LydenD.Therapeuticstemandprogenitorcelltransplantationfororganvascularizationandregeneration.NatMed,2003;9:702-712

3ZammarettiP,ZaischAH.Adult‘endothelialprogenitorcells’.Renewingvasculature.IntJBiochemCellBiol,2005;37:493-503

4KalkaC,MasudaH,TakahashiT,etal.Transplantationofexvivoexpandedendothelialprogenitorcellsfortherapeuticneovascularization.ProcNatlAcadSciUSA,2000;97:3422-3427

5KawamotoA,TkebuchavaT,YamaguchiJ,etal.Intramyocardialtransplantationofautologousendothelialprogenitorcellsfortherapeuticneovascularizationofmyocardialischemia.Circulation,2003;107:461-468

6HristovM,ErlW,WeberPC.EndothelialProgenitorCells:isolationandcharacterization.TrendsCardiovascMed,2003;13:201-206

7王绮如，严燕，汪保和.小鼠骨髓内皮细胞系的建立.中国实验血液学杂志，1997；5：360-366

8YonekuraH,SakuraiS,LiuX,etal.PlacentagrowthfactorandvascularendothelialgrowthfactorBandCexpressioninmicrovascularendothelialcellsandpericyts.Implicationinautocrineandparacrineregulationofangiogenesis.JBiolChem,1999;274:35172-35178

9RieckP,OliverL,EngelmannK,etal.Theroleofexogenous/endogenousbasicfibroblastgrowthfactor(FGF2)andtransforminggrowthfactorsbeta(TGFbeta1)onhumancornealendothelialcellsproliferationinvitro.ExpCellRes,1995;220:36-46

论文关键词：EM原露在信鸽饲养中的应用

“EM”是“有益微生物群”的英文缩写，是日本琉球大学比嘉照夫教授等研究出来的新型复合微生物菌剂，它由光和细菌、乳酸菌、酵母菌等10个属、80多种微生物复合培养而成。国内已有很多厂家生产此类产品。微生物不仅含有较高的优良蛋白质、氨基酸，还有丰富的维生素以及大量的类胡萝卜素、抗病毒物质、生长促进因子和提高群体免疫能力的活性物质，作为添加剂加入饲料中饲喂能促进生长，提高抗病能力。用EM液养禽有提高饲料转化率、促进禽类生长、防治消化道疾病、使饲料脱毒、改善环境卫生、提高繁殖率和幼雏成活率等作用。

一、EM原露的主要成分

1、光合菌群（好气性和嫌气性）。如光合细菌和蓝藻类。具有光合作用和固氮作用。属于独立营养微生物，能自我增殖。菌体本身含60%以上的蛋白质，且富含多种维生素，还含有辅酶Q10、抗病毒物质和促生长因子；它以土壤接受的光和热为能源，将土壤中的硫氢和碳氢化合物中的氢分离出来，变有害物质为无害物质，并以植物根部的分泌物、土壤中的有机物、有害气体（硫化氢等）及二氧化碳、氮等为基质，合成糖类、氨基酸类、维生素类、氮素化合物、抗病毒物质和生理活性物质等，是肥沃土壤和促进动植物生长的重要力量。

光合菌群的代谢物质可以被植物直接吸收，还可以成为其它微生物繁殖的养分。光合细菌如果增殖，其它的有益微生物也会增殖。例如：VA菌根菌以光合菌分泌的氨基酸为食饵，它既能溶解不溶性磷，又能与固氮菌共生，使其固氮能力成倍提高。

2、乳酸菌群（嫌气性）。以嗜酸乳杆菌为主导。它靠摄取光合细菌、酵母菌产生的糖类形成乳酸。乳酸具有很强的杀菌能力，能有效抑制有害微生物的活动和有机物的急剧腐败分解。乳酸菌能够分解在常态下不易分解的木质素和纤维素，并消除未分解有机物产生的种种弊端;合成各种氨基酸，维生素、产生消化酶、促进新陈代谢生物论文，还有融化不溶性无机磷的能力。

乳酸菌还能够抑制连作障碍产生的致病菌增殖。致病菌活跃，有害线虫会急剧增加，植物就会衰弱，乳酸菌抑制了致病菌，有害线虫便会逐渐消失论文的格式。

3、酵母菌群（好气性）。它利用植物根部产生的分泌物、光合菌合成的氨基酸、糖类及其它有机物质产生发酵力，合成促进根系生长及细胞分裂的活性化物质。酵母菌在EM原露中对于促进其它有效微生物（如乳酸菌、放线菌）增殖所需要的基质（食物）提供重要的给养保障。此外，酵母菌产生的单细胞蛋白是动物不可缺少的养分。

4、革兰氏阳性放线菌群（好气性）。它从光合细菌中获取氨基酸、氮素等作为基质，产生出各种抗生物质、维生素及酶，可以直接抑制病原菌。它提前获取有害霉菌和细菌增殖所需要的基质，从而抑制它们的增殖，并创造出其它有益微生物增殖的生存环境。放线菌和光合细菌混合后的净菌作用比放线菌单兵作战的杀伤力要大得多。它对难分解的物质，如木质素、纤维素、甲壳素等具有降解作用，并容易被动植物吸收，增强动植物对各种病害的抵抗力和免疫力。放线菌也会促进固氮菌和VA菌根菌增殖。

5、发酵系的丝状菌群（嫌气性）。以发酵酒精时使用的曲霉菌属为主体，它能和其他微生物共存，尤其对土壤中酯的生成有良好效果。因为酒精生成力强，能防止蛆和其他害虫的发生，并可以消除恶臭。

二、EM原露在信鸽所以中作用

EM原露具有改良土壤、增强光合作用、改善水质、除臭粪、促生长、抗病、改善信鸽品质、抑菌等功效。用EM原露饲养信鸽，有几大好处：

1、提高成活率

⑴使有益菌群迅速在肠道内占据优势，调节肠道内微生态平衡。

⑵对肠道无任何刺激，保护肠道内黏膜。

⑶有效预防雏鸡白痢、大肠杆菌等疾病的发生。

⑷保肝护肾，调节机体内分泌，提高免疫力。

⑷有效促进信鸽生长发育。

通过饲喂EM原露，可大大提高信鸽成活率，提高5~10%。

2、提高免疫力

用EM原露长期饲喂信鸽，可以有效的刺激胸腺、脾脏和法氏囊的发育，提高信鸽的免疫功能，同时能明显增强淋巴细胞的活性，明显增强机体的细胞免疫和体液免疫，从而大大降低疾病防治费用，提高信鸽和肉鸽饲养的综合效益。

3、提高饲料转化率

用EM原露制料长期饲喂，克激活与蛋白质和碳水化合物代谢有关的酶，从而提高它们的效率。使鸽饲料的消化率明显的提高，有助于消化过程。同时能提高鸽子对钙、磷等多种微量元素的吸收利用率。

4、有效减少发病率

用EM原露制作料饲喂信鸽，可以有效的阻止沙门氏菌、大肠杆菌、霉菌、球虫等致病微生物和寄生虫的生长和繁殖，促进有益菌的生长，长期维护肠道微生物菌群的平衡，有效减少发病机率。

5、促进生长，提高品质

通过饲喂EM原露制作料，可明显的促进鸽子的生长发育，提高平均重量，可大幅的提高信鸽的品质。

6、改善饲养环境

用EM原露制作料饲喂信鸽，还可以改善鸽舍环境的功能，使鸽舍内二氧化碳、氨气等有害气体显著减少生物论文，减少量为85%以上。鸽粪臭味明显下降。

综上所述，通过饲喂EM原露制作料，可以大幅提高鸽子成活率，降低信鸽养殖综合成本20%左右。

三、EM原露在信鸽饲养中的具体应用

EM原露用于信鸽最简单的使用办法，就是按一定比例兑水后直接给鸽子饮用。具体作法是：用1份（毫升）EM原露，1份（克）红糖，加水至一定比例即可。其中红糖是作为一种营养物质，它能保持EM原露中菌群的活力，实际使用中也用过葡萄糖和蜂蜜代替。

1、用于鸽棚及环境消毒

2、用于日常保养及防病

3、防治信鸽体内外寄生虫

其特点是内服不产生毒付作用，非常安全，同时又起到对鸽子身体的保健作用。因此，在比赛期间也能应急使用。外用洗澡也很有特点，有不少鸽友喜欢用高锰酸钾（PP粉）溶于水中给鸽子洗澡，虽然也能起到驱虫，消毒作用，但高锰酸钾是一种强氧化剂，在杀菌的同时也会加速信鸽羽毛的老化，使其失去光泽而干枯。而EM原露中微生物的特点是能产生抗氧化作用的物质，使用它给鸽子洗澡，既能驱虫消毒，又能对鸽子的羽毛起到非常好的护理作用。

EM原露可配制成防虫液，用来驱除鸽子体内外寄生虫。鸽子体内驱虫时用EM防虫液加500倍水饮用1天生物论文，1星期后再饮用1天即可。驱除体外寄生虫可用EM防虫液加1000倍水给鸽子洗澡，每星期1次，实际应用中用EM原露直接放在水中给鸽子洗澡，也有驱虫效果，并能使鸽子羽毛油滑光亮。

4、用于治疗鸽病

其特点是简便实用，无论是什么病，不需要做治疗前的医学检验，不用担心会用错药，EM原露对鸽子的消化系统疾病，呼吸系统疾病和一些疑难难症都能治疗，特别是对令鸽友最头痛的多病菌复合有一举多得的效果，同时EM原露治病没有其它化学药剂在治病的过程中产生的毒付作用，抗药性及二次感染等等一系列后顾之忧。而且用EM原露治好的鸽子身体素质恢复极快，这是由于在鸽病治好的同时，鸽子消化系统也已调整到位，这时给鸽子进行营养补充会得到良好的吸收，使鸽子体质迅速恢复。

⑴如果是全棚发生传染性疾病，（如沙门氏菌，新城疫球虫病等）可用EM原露，红糖，（这时不能使用蜂蜜）加水50倍配成稀释液全天饮用，观察鸽子精神状态及烘便，以此判断使用效果，一般3~7天即可完全控制病情，如用后2~3天内无明显效果，可以加大浓度。病情控制后，要继续按治疗浓度饲喂两天，以便巩固治疗效果，然后恢复日常保养浓度。

⑵对病情比较严重或个别发生病情的鸽子，可用EM原露红糖加水10倍配成稀释液，用注射器灌服，每次10毫升每日2~3次，对病情特别严重的鸽子我们的做法是直接灌服EM原露，每次3~5毫升。

⑶对念珠菌，毛滴虫，霉菌感染的信鸽，一般口腔中生有黄白色沉积物，这时要先将沉积物去掉，然后在口腔内滴几滴EM原露，并内服治疗浓度的EM原露，一般2~3天以够治好。

⑷EM原露还可用于防治信鸽饲料的黄曲霉菌中毒，治疗各种原因引起的外伤，眼部啄伤，伤口发炎等具有止血预防感染消炎生物论文，快速愈合创口的神奇效果。

5、用于信鸽赛前赛后的调整和老幼鸽的保健

由于EM原露中的微生物能分泌出有机酸、多糖类、多种维生素、抗生素、各种生化酶、氨基酸和氧等有益物质，既可调正各器官的功能延缓细胞衰老，激活T细胞，分解亚硝基化合物及其它有机化合物，又可增加营养，促进对其它营养物质的吸收，从而改善鸽子体内的微生态平衡，使鸽子保持健康的体质。因此EM原露可用于鸽子的育种，种鸽（特别指高龄鸽）配对前15天，每天灌服10毫升，幼鸽出营后7天至出棚，每天灌服3~5毫升，赛鸽参赛前7天开始每天服10毫升，信鸽比赛归巢后立即灌服20毫升，（此时配羊稀释液时可用蜂蜜代替红糖），之后连服3天，然后转为日常保健浓度饲喂。

注意：在上述调整中，如信鸽出现体重过重，可适当增加信鸽日常训练的运动量，减少饲料中油脂性饲料的比例，其它添加剂均可不用或少量使用，比赛期间可适当给赛鸽增加营养，可选择多种维生素和中草药制剂。

1PCNA的特点

PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为DNA聚合酶δ的辅助蛋白。在细胞核内存在可溶性与不溶性两种PCNA，可溶性PCNA在细胞周期各期中均有表达，其量在DNA合成过程中不发生明显变化，易被去污剂提取、甲醇破坏；不溶性PCNA较稳定，不易被去污剂洗脱、甲醇破坏，这种PCNA在G0～G1期细胞中无明显表达，G1晚期，其表达大幅度增加，S期达到高峰，G2～M期明显下降，其量的变化与DNA合成一致，检测其在细胞中的表达，可作为评价细胞增殖状态的一个指标[1,2,4]。

2肿瘤中PCNA的研究

3肺癌中PCNA的研究

PCNA在肺癌中的研究也较多，许多作者致力于这方面的探讨，期望找到有意义、有价值的结果，但到现在为止，PCNA在肺癌中研究所得出的一些结果也同样存在争论[23]。

3.1PCNA与肺癌发生发展的关系

夏书月等[6]在研究肺鳞癌的发生、发展过程中，发现PCNA的表达有逐渐增高，阳性细胞数逐渐增多的趋势。在轻、中、重度不典型增生、原位癌及浸润癌中，PCNA标记指数分别为12.5±8.7、43.3±14.9、68.1±9.1、74.6±8.2、65.4±23.6，与正常和轻、中度不典型增生的上皮相比，浸润癌、原位癌和重度不典型增生的上皮细胞PCNA标记指数明显升高，PCNA阳性细胞数也明显增多。认为PCNA表达为细胞异常增殖的标志，可作为肺鳞癌早期诊断的参考指标。但这仅是在肺鳞癌中的初步探索，且病例数较少，能否作为肺鳞癌早期诊断参考指标，还需进一步验证。

3.2PCNA与肺癌分型的关系

有作者[15,24]认为PCNA在不同类型肺癌中表达不同，鳞癌PCNA标记指数平均约为52％，腺癌为49％，大细胞肺癌为76％，小细胞肺癌为63％。何杰等[25]的结果为：肺鳞癌标记指数为0.51±0.23，腺癌为0.69±0.34。在同一类型不同亚型之间也表达不同。王恩华等[13]在86例肺腺癌中对各亚型进行分析：PCNA在细支气管肺泡癌中表达约为0.22±0.17，腺泡状腺癌中约为0.36±0.12，大细胞癌中约为0.67±0.10。但也有作者认为PCNA的表达仅能反映细胞的增殖状态，与组织学类型无关。Castellano[26]、Fontanini[14]、Fujii[27]等支持这种观点。

3.3PCNA与肺癌分化程度的关系

3.4PCNA与肺癌分期的关系

3.5PCNA与肺癌血管受侵的关系

3.6PCNA与肺癌预后的关系

3.7PCNA与肺癌复发的关系

由于实验中存在以上诸多影响因素，不同作者在肺癌中所研究出的结果或在不同肿瘤中所研究出的结果，都难以对照相比，因此PCNA的免疫组化研究有必要采用统一的标准，减少实验误差和人为偏差，使彼此的结果具有可比性。

总之，无论在整个肿瘤方面，还是单在肺癌这一方面，PCNA的研究都是较多的，得出了许多有临床应用价值的结果，但由于肿瘤本身的变异性及人们研究方法的差异，致使所得结果存在一些争议，这有待进一步验证，以便能达到一致的结论，应用于临床，指导临床实践。

作者单位：刘跃平综述汪楣沈瑜殷蔚伯中国医学科学院肿瘤医院放疗科北京市100021

参考文献

1魏永昆.增殖细胞核抗原与肿瘤研究进展.国外医学肿瘤学分册,1996;23(增刊):47～9

2黄杰雄,黄致治.增殖细胞核抗原的研究进展.国外医学生理病理科学与临床分册,1994;14(1):9～11

3RochelleL,GarciaMD,Coltreraetal.Analysisofproliferativegradeusinganti－PCNA/cyclinmonoclonalantibodiesinfixed,embeddedtissues.AmJpathols1989;134(4):733～9

4TakasakiY,FishwildD,TanEM.Characterizationofproliferatingcellnuclearantigenrecognizedbyautoantibodiesinlupussera.JExpMed,1984;159:981～92

5KabayashiI,MatsuoK,IshibashiY,etal.ProliferativeactivityindysplasiaandcarcinomainsituoftheuterinecervixanalyzedbyPCNAimmunostainingandagNORstaining.HumPathol,1994;25:198

6夏书月,姜彦多,何安光,等.肺鳞癌发生过程中p53蛋白和增殖细胞核抗原的表达.中国肿瘤临床,1995;22(11):772～5

7吴名耀,郑瑞明,沈健,等.食管癌增殖细胞核抗原的免疫组化研究.中华病理学杂志,1993;22(4):239～40

8WoodsAL,HallPA,ShepherdNA,etal.Theassessmentofproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)immunostaininginprimarygastro－intestinallymphomasanditsrelationshiptohistologicalgrade,S＋G2＋M,phasefraction(flowcytometricanalysis)andprognosis.Histopathology,1991;19:21～7

9AllegranzaA,GirlandoS,ArrigoniGLetal.Proliferatingcellnuclearantigenexpressionincentralnervoussystemneoplasms.VirchowsArchAPatholanatHistopathol,1991;419(5):417～23

10TsaiST,JinYT.Proliferatingcellnuclearantigenexpressionin.oralsquamouscellcarcinomas.JOralPatholMed,1995;24:313～5

11ChristopherGW,WarlandG,HaganMP,etal.Tumorproliferatinginrectalcancerfollowingpreoperativeirradiation.JClinOncol,1995;13(6):1417～24

12祝淑钗.食管癌PCNA,CYCLIND表达和DNA含量对术前放疗预后的影响：[学位论文].北京：中国协和医科大学，1997.

13王恩华,刘闺男,赫明昌.增殖细胞核抗原表达与AgNORs图像分析在判断肺癌预后上的应用.中华病理学杂志,1995;24(3):143～5

14FontaniniG,MacchiariniP,PepeS,etal.Theexpressionofproliferatingcellnuclearantigeninparaffinsectionsofperipheral,node－negativenon－smallcelllungcancer.Cancer,1992;70(6):1520～27

15OyamaT,MitsudomiT,MizoueT,etal.Proliferatingcellnuclearantigenmaybesuperiortoargyrophilicnucleolarorganizerregionsinpredictingshortenedsurvivalofpatientswithnon－smallcelllung cancer.SurgOncol,1995;4(2):83～9

16RussoJ,FrederickJ,OwnbyHE,etal.Predictorsofrecurrenceandsurvivalofpatientswithbreastcancer.AmJClinPathol,1987;88:123～31

17OkaK,HoshiT,AraiT.PrognosticsignificanceofthePC10indexasaprospectiveassayforcervicalcancertreatedwithradiationtherapyalone.cancer,1992;70(6):1545～50

18杨竹林,李永国,黄生福,等.胃癌组织中PCNA评分和Bcl－2.p53蛋白表达及相互关系.中国肿瘤临床,1997;24(11):811～4

19YuCCW,HallPA,FletcherCDM,etal.Haemangiopericytomas:theprognosticvalueofimmunohistochemicalstainingwithamonoclonalantibodytoproliferatingcellnuclearantigen(PCNA).Histopathology,1991;19:29～33

20刘文胜.增殖细胞核抗原(PCNA)与声门上喉鳞癌的关系及临床意义：[学位论文].北京：中国协和医科大学，1997.

21阮幼冰,武忠弼,IvankovicS.增殖细胞核抗原及表皮生长因子受体在大鼠肝癌与胃癌中的表达.中华病理学杂志,1994;23(5):274～7

22PichA,PontiR,ChiusaL,etal.MIB－1,Ki67,andPCNAscoresandDNAflowcytometryinintermediategrademalignantlymphomas.JClinPathol,1994;47:18～22

23AbeS.Molecularbiologicalprognosticmarkersinlungcancer.NipponGekagakkaiZasshi,1997;98(1):2～7

24KawaiT,SuzukiM,KonoS,etal.ProliferatingcellnuclearantigenandKi－67inlungcarcinoma.CorrelationwithDNAflowcytometricanalysis.cancer,1994;74(9):2468～75

25何杰,汪万英,姚敏.肺癌C－erB－2,p21和PCNA的表达及意义.浙江肿瘤,1998;4(1):8～10

26CastellanoVM,SoteloT,BallestinCetal.Analysisofproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)expressionin24casesofprimarynon－smallcellpulmonarycarcinomasandcorrelationwithsurvival.Archbronconeumol,1996;33(3):127～31

27FujiiM,MotoiM,SaekiH,etal.Prognosticsignificanceofproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)expressioninnon－smallcelllungcancer.ActaMedokayama,1993;47(2):103～8

28ZhaoT,ZhangYL,LiCD.Acomparisonofproliferatingcellnuclearantigenimmunostaining,nucleolarorganizerregionstaininginlungcancer.ChungHuachiehHoHoHuHsiTsaChih,1993;16(6):342～4

29IshidaT,KanekoS,AkazawaKetal.Proliferatingcellnuclearantigenexpressionandargyrophilicnucleolarorganizerregionsasfactorsinfluencingprognosisofsurgicallytreatedlungcancerpatients.Cancerres,1993;53(20):5000～3

30MatturriL,LavezziAM,GrignaniF,etal.Theprognosticvalueofcellproliferationinnon－smallcelllungcancerassessedwithtritiatedthymidineandanti－PCNAantibodies.EurJCancer,1994;30A(9):1397～8

31AlemanyMonravalP,CebolladaM,VillalbaS,etal.Studyoftheexpressionofproliferatingcellnuclearantigenandp185innon－smallcelllungcarcinoma.archBronconeumol,1996;32(4):165～9

33EbinaM,SteinbergSM,MulshineJL,etal.Relationshipofp53overexpressionandup－regulationofproliferatingcellnuclearantigenwiththeclinicalcourseofnon－smallcelllungcancer.CancerRes,1994;54(9):2496～503

34OgawaJ,TsurumiT,YamadaS,etal.BloodvesselinvasionandexpressionofsialylLewisxandproliferatingcellnuclearantigeninstageInon－smallcelllungcancer.Relationtopostoperativerecurrence.Cancer,1994;73(4):1177～83

35FontaniniG,PingitoreR,BiginiD,etal.Growthfractioninnon－smallcelllungcancerestimatedbyproliferatingcellnuclearantigenandcomparisonwithKi－67labelingandDNAflowcytometrydata.AmJPathol,1992;141(6):1285～90

36CareyFA,FabbroniG,LambD.Expressionofproliferatingcellnuclearantigeninlungcancer:asystematicstudyandcorrelationwithDNAploidy.histopathology,1992;20(6):499～503

据该论文的作者之一、中科院生物物理研究所研究员李国红介绍，遗传信息DNA是经过凝缩之后聚集在只有几个微米的细胞核里的，其核小体以密集堆积的方式形成了一种直径在30纳米左右的管状螺旋体，即30纳米染色质纤维。目前国际上对30纳米染色质纤维这一超大分子复合体的组装和调控机理还不清楚，对于其精细结构组成也有很大争议，“30多年来，对其结构的研究一直是现代分子生物学领域面临的最大挑战之一”。

李国红与生物物理所研究员朱平经过四五年的密切合作与不懈努力，成功建立了一套染色质体外重建和结构分析平台，利用一种冷冻电镜单颗粒三维重构技术，在国际上率先解析了30纳米染色质的高清晰三维结构，在破解“生命信息”的载体――30纳米染色质的高级结构研究中取得了重大突破。朱平说，这一结构提示了30纳米染色质纤维以4个核小体为结构单元，各单元之间通过相互扭曲折叠形成了一个左手方向的双螺旋高级结构，它还明确了组蛋白H1在30纳米染色质纤维形成过程中的重要作用。

糖尿病视网膜的危害情况

随着我国国民经济的发展，生活方式的改变，大家生活好了，可是糖尿病的发病率却在逐年增加。据统计，目前全国糖尿病的患病人数在4000万人以上，这当中约30%左右可能已经有糖尿病视网膜病变，这样，糖尿病视网膜病变的患者应该会有1000万，而这之中视力受到严重威胁的可能要在300万左右。即使在美国这样的发达国家，糖尿病引起的失明每年大概1，2000～2，4000人，可见糖尿病对我国人民视觉的影响有多大。作为眼科医生，我们几乎每天都能见到因为糖尿病而失明的患者，因此，感到肩上的担子是十分沉重的。

糖尿病视网膜病原因

另外，1型糖尿病发生糖尿病视网膜病变早且严重，2型糖尿病视网膜病变发生视网膜病变要晚一些。

法治疗糖尿病视网膜病变的方法

近年来医药科技进步很快，尤其是抗血管生成药物的出现，使得糖尿病视网膜病变的治疗有了更多的治疗选择。比如，激光联合抗血管生成药物玻璃体腔注射治疗，对控制黄斑水肿会有更好的效果；又如，对已经有新生血管形成的病例，玻璃体腔注射抗血管生成药物，可以帮助新生血管的退缩，尤其新生血管在视神经上无法激光时。

在有些糖尿病视网膜病变晚期，必须手术的病例，也可以先注射药物，然后再手术，可以减少术中出血。

糖尿病引起的青光眼的治疗方式

糖尿病视网膜病变手术治疗

关键词：花椒；延胡索；没药；三七；止痛；毒理学；研究进展

通过对先秦至现代有确切止痛作用的中草药文献资料和前期动物实验的广泛调研，共研究筛选出外用于肛肠病术后创面止痛疗效确切的止痛中药4味：花椒、延胡索、没药、三七［1、2、3、4、5］。现就以上四味止痛中药的毒理学方面的研究进展，进行资料收集，综述如下。

1花椒的研究进展

1.1概述

花椒具有温中散寒，止痛，温肾，燥湿，杀虫的功效，起止痛作用的有效成分为挥发油。

1.2毒理学研究进展

急性毒性试验：牛儿醇对大鼠口服的LD50为4.8g/kg，兔静注为LD50g/kg。过量可引起呼吸极度困难而致动物死亡［6、7］。

临床报道：花椒醋浸液及蛋清外用治疗间擦型足癣27例，效果满意，无明显毒副作用［8］。

2延胡索的研究进展

2.1概述

延胡索具有活血、行气、止痛的功效；起止痛作用的成分中，延胡索乙素的止痛作用最强。

2.2毒理学研究进展

急性毒性试验：延胡索醇浸膏对小鼠口服的LD50为（100±4.53）g/kg，腹腔给药为（7.5±0.3）g/kg。延胡索乙素、丙素、甲素给小鼠静脉注射的LD50分别为146、151～158、100mg/kg［9］。癸素腹腔注射的LD50为127mg/kg。延胡索乙素、癸素、丑素及寅素给小鼠静脉注射的最小致死量分别为102mg/kg、42mg/kg、150mg/kg、41mg/kg［9］。

亚急性毒性试验：用药1月，未发现明显毒副作用［10］。

麻醉猫静脉注射延胡索乙素40mg/kg后，则使血压略降，心率减慢，心脏功能无明显变化。正常兔静脉注射延胡索乙素20～40mg/kg，呼吸短暂兴奋，剂量增大至60mg/kg，则呼吸出现抑制。猴1次静脉滴注延胡索乙素85或100mg/kg，或口服80mg/kg无明显毒性；静滴180mg/kg，先出现短时兴奋，继而出现较严重的抑制，极度镇静和较深度的催眠作用，感觉并不丧失，随后发生四肢震颤性帕金森氏综合征，心电图和呼吸均不正常，尿中有管型，数天后可恢复。当每天静滴85mg/kg，连续2周后，除出现镇静、催眠作用外，于第4-7天的反应基本与静滴180mg/kg者相似。肉眼观察内脏无明显变化，组织病理检查发现心脏和肾脏有轻度浑浊肿胀［11］。

临床报道：赵桂芬，靳国君等报道：患者左上肢患有静脉炎，疼痛不止，故首次涂延胡索浸泡液止疼。涂后约30min，患者自觉全身不适，嚼心、头晕。lh后症状明显加重，继而出现胸闷气短、心悸、口唇及四肢未稍麻木、抽搐，全身皮肤潮红瘙痒［12］。

3没药的研究进展

3.1概述

没药具有活血止痛、消肿生肌的功效，起止痛作用的有效部位为挥发油。

3.2毒理学研究进展

细胞毒活性：从没药中得到的三萜对人乳腺癌细胞系有弱的细胞毒活性。没药对艾氏肿瘤细胞有细胞毒作用。没药中一系列倍半萜对癌细胞有细胞毒活性［13］。没药有细胞毒和抗肿瘤活性，抑制有丝分裂，但对鼠正常细胞不诱导裂变。

急性毒性试验：在3g/kg剂量下没有观察到毒性指标，没有死亡，但鼠的运动能力下降，可能是由于挥发油对中枢神经的抑制作用。

没药精油和其中分离到的7种倍半萜对鼠的耳朵有刺激性。

4三七的研究进展

4.1概述

三七具有散瘀止血、消肿定痛的功效，人参皂苷Rbl为主要镇痛成分。

4.2毒理学研究进展

急性毒性试验：三七醇提取物小鼠静注LD50为（836±17）mg/kg［14］。另有报道PNS小鼠静注LD50为447mg/kg［15］。Rb1小鼠腹腔注射LD50为1208mg/kg，Rg1为1250mg/kg［16］。

5问题与展望

参考文献：

［1］刘丽.先秦及秦汉原创性单味镇痛中药微米粉末喷洒用于肛肠病术后创面镇痛的实验研究［D］.长沙：湖南中医药大学硕士论文，2008.

［2］成立祥.魏晋至五代十国原创性单味镇痛中药微米粉末喷洒用于肛肠病术后创面镇痛的实验研究［D］.长沙：湖南中医药大学硕士论文，2008.

［3］宋艳.宋金元原创性单味镇痛中药微米粉末喷洒用于肛肠病术后创面镇痛的实验研究［D］.长沙：湖南中医药大学硕士论文，2008.

［4］李敏.明清至民国原创性单味镇痛中药微米粉末喷洒用于肛肠病术后创面镇痛的实验研究［D］.长沙：湖南中医药大学硕士论文，2008.

［5］刘扬.1949年以来原创性单味镇痛中药微米粉末喷洒用于肛肠病术后创面镇痛的实验研究［D］.长沙：湖南中医药大学硕士论文，2008.

［6］山胁忠昭.Geraniolの药理作用［J］.第一版.日本药理学杂志，1960，56（6）：210.

［7］山胁忠昭.Geraniolの药理作用［J］.日本药理学杂志，1962，58（4）：394.

［8］刘剑.花椒醋浸液及蛋清外用治疗间擦型足癣27例［J］.中国民间疗法，2005，13（1）：25.

［9］金国章，胥彬.延胡索的药理研究Ⅰ、延胡索甲、乙和丑的镇痛作用［J］.生理学报，1957，21（2）：150.

［10］蒋彝荣，吴庆仙，李焕亭，等.延胡索治疗冠心病的药理实验研究［J］.中草药通讯，1978，（11）：27.

［11］马胜兴.延胡索碱对家兔心电图的影响及其对量效关系的观察［J］.中西医结合志，1986，6（12）：743.

［12］赵桂芬，靳国君，戴玉洁.外用延胡索浸泡液致过敏反应1例［J］.中国中药志，1994（6）：56.

［14］苏雅，李勤华，张宝恒.三七绒根提取物（76017）对心血管的作用［J］.药学学报，1979，14（6）：321.

［15］郝朝庆，杨帆.三七总皂甙的抗炎作用［J］.中国药理学报，1986，7（3）：252.

［16］KakuT，MiyataT，UrunoT，etal.Chemico-pharmacologicalstudiesonsaponinsofpanaxginsengCAMeyerⅡPharmacologicalpart［J］.ArzneiForsch，1975，25（4）：539.

［17］阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用［M］.第一册.北京：学苑出版社，1993.

［18］周晓明.三七总皂甙注射液致11例迟发型药疹分析［J］.中国现应用药学杂志，2006，23（1）：43.

［19］刘桂红，陈凌波.血塞通注射液不良反应1例［J］.ChineseJournalofClinicalHealthcare，2006，9（6）：548.

［20］吴刚勇，宗刚军，等.三七总甙注射液致大疱性表皮松解坏死型药疹1例［J］.医药导刊报，2007，26（4）：349.

[关键词]扩张术；修复；手术

1扩张部位的选择

对于较小的瘢痕，准备将扩张囊置入瘢痕下时需要选用较大扩张囊，否则将瘢痕扩大，但正常皮肤扩大不足，很难达到预期效果。

皮肤软组织扩张Ⅱ期术，如Ⅰ期置入得当，则相对简单，多数为拉拢缝合。只有在Ⅰ期置入不当，才需更多设计，更多切口。对于颏部瘢痕，多采用颌底或颈部皮肤扩张，如颌底有较多正常皮肤时，多采用颌底扩张，在置入扩张器时，扩张器剥离的范围不应超越颈颌角，否则在扩张时，扩张器注满了液体，只是单纯将颈颌角扩起，即将颈颌角的凹陷填平，但并未充分使皮肤扩张，术后上提皮肤，则颈颌角消失，颈部失去了优美的曲线，同时扩张后皮肤回缩，下唇则外翻，虽将颏部的瘢痕切除了，但又造成了新的畸形。而不超越颌颈角将扩张器置入颌底，由于颈颌角的限制作用，则将颌底的皮肤充分扩张，术后不会致颌颈角消失和下唇外翻，则效果满意。

2扩张器容量的选择

据我院的临床经验，在头部每修复1cm×1cm秃发区，则需要扩张器容量为3.5～4.0ml；面部修复1cm×1cm瘢痕，则需要6～8ml扩张器容量；颈部为8～12ml，躯干和四肢介于两者之间。近年我们对以上容积又有了新的认识，对于非功能部位，非器官集中部位，则置入相对缺损所需修复面积推算后容量较大的扩张器，这样将皮肤充分扩张，并将术后回缩计算到扩张面积中去，术后由于皮肤组织量充裕，术后切口松弛则瘢痕细小。而对于器官较集中的面部，不但要考虑到修复缺损，同时要考虑到不使口、鼻、眼移位、变形及面部双侧轮廓的对称。故此时要充分考虑到影响因素，权衡利弊，这样才能达到良好的效果。

3手术方法的探讨

扩张阀门置放的位置，应有利于注液，处于明显易寻找的位置，否则阀门寻找困难，给注液带来诸多不便，故一般放在正常皮肤，平坦部位，不放在瘢痕下。缝合切口时，在距皮瓣边缘约1.0cm处，先将皮瓣与基底固定数针，这样能减轻皮瓣边缘的张力，防止扩张器游移到切口下，减少外露的机会。缝合切口时应防止过密，否则可致皮瓣边缘血运障碍，延迟愈合。

[关键词]口腔鳞状细胞癌；胰腺癌缺失基因；B淋巴细胞瘤-2基因；综述

口腔癌的发生及进展和多种遗传学改变有着密切关系，其中涉及多种基因的异常包括原癌基因、抑癌基因等，这些基因对口腔黏膜纤维化甚至口腔癌的发生以及进展有十分重要的作用。牙龈癌是口腔颌面部常见的鳞状细胞癌之一，在口腔鳞癌中居第二或第三[1]。牙龈癌按病理分化程度可分为低分化、中分化及高分化牙龈癌。男性多于女性。其中高分化牙龈癌最常见，以溃疡性为主，生长缓慢。目前仍以手术切除为主。手术治疗会不可避免地造成患者颜面部的缺损，无形中给患者心理和生理上带来了极大的痛苦。本研究就其中代表基因Bcl-2和DPC4进行研究，临床早期准确诊断口腔癌、评价预后以及基因治疗具有十分重要的临床意义。随着细胞生物学以及分子生物学技术的不断发展，对于口腔癌的遗传基础和发病机制已经有了比较广泛且深入的了解，口腔癌和大多数其他癌症均是由原癌基因、抑癌基因、癌转移基因等决定，同时与环境因素以及致癌因子综合作用进而发生癌症[2]。因此，研究和识别这些基因，对于临床早期诊断以及评价预后有着十分重要的临床意义。

1Bcl-2的功能

1.1抑制细胞凋亡

Bcl-2具有抗氧化功能，细胞内质网、核膜、线粒体外膜均存在Bcl-2蛋白，且这些部位均能产生活性氧（ROS），目前国内外许多学者研究关于Bcl-2和活性氧在细胞凋亡过程中的相互作用关系[3]。通过研究观察到Bcl-2具有抗t-丁基、H2O2、甲萘醌诱导细胞凋亡的作用。这些低浓度的氧化物借助细胞凋亡的途径灭杀细胞。线粒体内膜释放细胞色素C，阻断电子向下游传递，会危及整个呼吸链的功能，同时还能加速产生超氧阴离子[4]。Bcl-2有抑制细胞色素C释放的功能进而阻碍超氧阴离子的产生。同时有研究发现Bcl-2还能降低细胞内还原型谷胱甘肽含量及拮抗制剂诱发的凋亡作用。

1.2Bcl-2和细胞增殖

2Bcl-2与肿瘤的关系

3DPC4和肿瘤的关系

DPC4蛋白首次发现于胰腺癌，由此命名为胰腺癌缺失基因DPC4。其编码的蛋白Samad4是TGF-β信号传导途径的中心分子，其生物效应均是由于与不同Smads蛋白相互作用的结果[10]。肿瘤的发生与发展是多基因参与的病理过程，癌基因的激活与抑癌基因的缺失导致细胞异常增殖则是肿瘤的发生病理过程中的重要分子机制[11]。Shen等[12]将含有DPC4的逆转录病毒载体转染至人胰腺癌细胞株BXPC-3中，发现DPC4能够抑制肿瘤细胞生长，且抑制其侵袭转移。TGF-β是具有调节细胞生长、增殖、分化、凋亡等多种生理功能的细胞因子，TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ下调p53基因导致p53基因编码的蛋白表达减少，抑制细胞生长周期过渡到G1/S期，引发细胞DNA损伤，最终导致细胞凋亡，DPC4蛋白发生突变则立即失去了调控TGF-β的作用[13]，影响细胞凋亡过程，引起肿瘤的发生。

4肿瘤的耐药性

[参考文献]

[1]邱蔚六.口腔颌面外科学[M].6版.北京：人民卫生出版社，2011：274-275.

[2]唐巍，王文梅，郑际烈，等.口腔癌前病变及鳞癌组织Bcl-2和P53表达的研究[J].广东牙病防治，2003，11（1）：31-32.

[4]李洪平.口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌中KGF、KGFR、Bcl-2表达的研究[D].泸州：泸州医学院，2010.

[5]范媛，彭涛，詹瑧，等.口腔癌前病变细胞凋亡状况及Bcl-2、Bax表达的研究[J].口腔医学研究，2004，20（4）：354-358.

[6]耿莉，王莉红，曹雷，等.p53和Bcl-2蛋白在舌鳞癌组织中的表达及意义[J].山东医药，2007，47（33）：17-18.

[7]王文梅，黄晓峰，蒋文晖，等.口腔异常增生上皮及鳞癌组织中Fas、FasL及Bcl-2的研究[J].临床口腔医学杂志，2004，20（3）：137-139.

[8]LiLong-Jiang，WangLi-Juan，LiYi，etal.AcombinationtherapyofrAd-p53withchemotherapyforadvancedoralcarcinomabyselectiveintraarterialinfusion[C].第三次全国口腔颌面—头颈肿瘤综合治疗研讨会暨中华口腔医学会外科专委会口腔颌面-头颈肿瘤内科协作组成立大会论文集.北京，2007：2-7.

[9]林闽，高文信，孙淑芬，等.金黄地鼠颊囊癌变过程中DPC4的表达特征[J].实用口腔医学杂志，2006，22（5）：596-598.

[10]ZhanHua，YuanChunzhang，XiaoMinghu，etal.LossofDPC4expressionanditscorrelationwithclinicopathologicalparametersinpancreaticcarcinoma[J].2003，9（12）：2764-2767.

[12]ShenW，TaoGQ，LiDC，etal.InhibitionofpancreaticcarcinomacellgrowthinvitrobyDPC4genetransfection[J].WorldJGastroenterol，2008，14（40）：6254-6260.

[13]周国雄，李兆申，许国铭，等.胰腺癌DPC4/Smad4基因突变及表达[J].世界华人消化杂志，2002，10（3）：328-332.

[14]吴和顺，曾昭孟，陈树添，等.抑癌基因DPC4蛋白在大肠癌组织中缺失表达及临床意义[J].广东医学，2010，31（9）：1111-1113.

【关键词】三棱；妇产科;药理

三棱为黑三棱科黑三棱属植物黑三棱SparganiunstoleniferumBuch.-Ham的干燥块茎，首载于《本草拾遗》。味苦、性平，入肝、脾经，具有破血行气、消积止痛等功能。化学成分主要包括黄酮和黄酮苷、苯丙素苷、甾体及其苷、有机酸等化合物。研究表明，三棱具有多种药理活性，并在妇产科中应用广泛。笔者就近年来与三棱在妇产科临床应用相应的药理研究综述如下，以供参考。

1药理活性

1.2抑制乳腺增生作用李湘奇等［4］采用苯甲酸雌二醇联合黄体酮造模，用乳癖康合剂(三棱、柴胡、莪术等)治疗，结果提示乳癖康合剂能够降低乳腺增生病大鼠血清雌二醇、垂体促乳素及促卵泡成熟激素含量，升高孕激素的含量。可见乳癖康合剂可通过调节乳腺增生的性激素水平、影响VEGF的活性、抑制腺体新生血管的形成、改善腺体的微循环而逆转乳腺腺体的增生，这与三棱在乳腺增生病中的广泛应用一致。

1.4诱导乳腺癌细胞凋亡张瑾峰等［8］运用EPICS-ELITE型流氏细胞仪研究莪术、三棱、IL-6对人乳腺癌细胞凋亡的诱导作用，结果发现它们对人乳腺癌细胞的凋亡都有明显的诱导作用，诱导凋亡可能是其抑杀肿瘤的作用机制之一。

1.5抑制异位子宫内膜细胞增殖余晓辉［9］为探讨活血化瘀中药对子宫内膜异位症(EMT)模型大鼠异位子宫内膜细胞的增殖的影响，制备活血化淤中药（三棱、蒲黄、灵脂、莪术、玄胡）含药血清，干预体外原代培养的大鼠异位内膜和在位内膜细胞，应用噻唑蓝(MTT)比色法比较活血化淤中药含药血清对二者增殖的影响。结果提示活血化淤中药含药血清对EMT模型鼠异位内膜的增殖有显著抑制作用，而对在位内膜的增殖无明显影响，为临床用药提供了实验依据。

1.6抗炎及抑制子宫平滑肌收缩作用金志春等［7］通过对盆腔舒胶囊(水蛭、三棱、莪术、元胡、桂枝等)的药效学研究，观察该药对塑料环所致大鼠子宫炎症、大鼠肠系膜微循环、家兔离体子宫平滑肌收缩的影响，并分别与妇科千金片、山莨菪碱、阿托品等中西药物作比较。结果提示盆腔舒胶囊具有良好的抗炎、抑制子宫平滑肌收缩、改善微循环的作用。

2毒副作用

三棱的急性毒性实验显示，小鼠按480g/kg生药煎剂灌胃给药7d，药后小鼠活动减少，静卧不动，第2天恢复正常，未见死亡。小鼠腹腔注射LD50为（233.3±9.9）g/kg(生药)，小鼠呼吸抑制而死亡，死亡前出现短暂的抽搐惊跳［10］。

另有报道，某药剂师调配中药处方时，只要接触了三棱就会出现打喷嚏、不停地流鼻涕眼泪等不明原因的重感冒症状，此类过敏反应较少见，也未见有文献报道，其机理有待临床重视和探讨［12］。

3小结

综上所述，三棱在妇产科中所表现的破血行气，消癥化积等作用，已被实验研究证实，这为今后中医药防治妇科肿瘤、子宫内膜异位症等疑难疾病的研究提供了有益的启示。随着科学技术的日益发展，人们对三棱的研究日趋深入，研究领域日趋扩大，其药理作用也正在被更多的挖掘出来并为人们所利用。但对其系统研究开发尚未见有更新的进展，特别是制剂方面，研究尚不充分，而且毒副作用的研究也不够深入，有待于进一步研究。

［1］丁永芬，李光荣.桂附胶囊对子宫内膜异位症(寒凝血虚证)外周血EMAb、CA125、TNF-α、NK细胞影响的临床研究［J］.新中医，2005，37(9)：25.

［2］和岚，毛腾敏.三棱、莪术对血淤证模型大鼠血液流变性影响的比较研究［J］.安徽中医学院学报，2005，24(6)：35.

［3］党春兰，辛小南.三棱对家兔血液流变学的影响［J］.河南医科大学学报，1996，31(3)：31.

［4］李湘奇，宫少波，魏芳.乳癖康合剂对乳腺增生病大鼠血清性激素及乳腺组织血管内皮生长因子、微血管密度表达的影响［J］.北京中医药大学学报(中医临床版)，2005，12(5)：1.

［5］邓英君.三棱不同提取物镇痛及抗凝血作用研究［J］.时珍国医国药，1999，10(12)：883.

［6］邱鲁婴，毛春芹，陆兔林.三棱总黄酮镇痛作用研究［J］.时珍国医国药，2000，11(4)：291.

［7］金志春，张敦兰，谭宫屏，等.盆腔舒胶囊治疗慢性盆腔炎的药效学研究［J］.上海中医药大学学报，2002，16（1）：56.

［8］张瑾峰，王喆，刘欣，等.莪术、三棱、白介素-6对人乳腺癌细胞凋亡的诱导作用.中国科协第五届青年学术年会论文，2004：219.

［9］余晓辉，黄光英，陆付耳.活血化淤中药对大鼠异位子宫内膜细胞增殖的影响［J］.华中科技大学学报(医学版)，2006，35(1)：93.

天花粉蛋白（Trichosanthin，TCS）是从葫芦科科植物栝蒌的块根中分离纯化得到的一种碱性蛋白，属于Ⅰ型核糖体失活蛋白（RibosomeInactivatingProteins，RIPs）。TCS成熟肽是由247个氨基酸残基组成，分子量约24000，pⅠ=9.4，为不含糖的单链核糖体失活蛋白。天花粉蛋白一直以来多用于引产临床治疗妇科疾病，如宫外孕，葡萄胎，绒癌等。另外，因其具有N2糖苷酶活性，能水解真核细胞核糖体的28SrRNA的4324位上的腺苷酸的N-C糖苷键，使核糖体不可逆失活，从而抑制蛋白质的合成，使得其应用范围已涉及抗肿瘤、抗病毒，免疫调节等方面。鉴于其越来越重要的研究地位，本文将对其作用机制展开综述，为天花粉蛋白的进一步研究和临床应用提供理论依据。

1治疗妇科疾病

天花粉自古在民间用来堕胎和治疗胞衣不下，其有效成分TCS不但可以用于引产，还能治疗葡萄胎，宫外孕，死胎，过期流产等妇科疾病。其原理是TCS可迅速引起胎盘的滋养层细胞变性坏死，坏死细胞的崩解碎片充斥在绒毛间隙，导致了血循环障碍，然后加速了绒毛组织退化坏死，造成胎儿死亡；同时，TCS引起的滋养叶细胞坏死，导致HCG和甾体激素迅速降低，绒毛及蜕膜组织变性及进一步坏死，激发内源性前列腺素的合成与释放，继而触发宫缩、诱发流产［1］。

2抗肿瘤

2.1抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡凋亡是细胞在正常发展过程中或做出应激反应时表现出的生理性死亡过程。Caspase-3是这个死亡程序的关键环节之一。研究人员发现天花粉蛋白可以通过抑制PKC和激活Caspase途径诱导细胞凋亡。李洁等［2］将天花粉蛋白作用于人慢性髓性白血病细胞株K562，然后分别观察了PKC和Caspase-3的激活剂和抑制剂的状态与细胞凋亡的关系，得出TCS是通过抑制PKC和激活Caspase-3来诱导K562细胞凋亡。李洁等［3］还进一步对天花粉蛋白诱导的细胞凋亡进行了研究。他们把TCS作用于白血病HL-60细胞，结果发现首先Caspase-9依赖的线粒体途径和Caspase-4依赖的内质网压力激发途径被激活，接着依赖Caspase-9和Caspase-4的Caspase-8被激活，以上一系列级联反应最终直接或间接激活Caspase-3途径，从而诱导细胞凋亡。

周欣阳等［4］观察了天花粉蛋白对黑色素瘤凋亡的影响，结果显示，天花粉蛋白可使黑色素瘤B-16细胞内Ca2+，NO，ROS增加。Ca2+可以激活钙依赖性酶活性和蛋白激酶PKC，引起离子通道改变G蛋白磷酸化，最终导致细胞凋亡。NO增加，可抑制三羧酸循环，使ATP产生减少或可直接抑制线粒体呼吸，导致细胞内ATP水平降低，从而诱导B-16细胞凋亡。ROS作为细胞内第2信使，在细胞内酶的激活、细胞生长和分化及细胞凋亡中起着非常重要的作用。

Bcl-2基因家族在程序性细胞死亡的调控方面具有十分重要的作用，其结构中包含一个可以控制其表达水平的转录因子-CREB（CRE-bindingprotein）。王平等［5］的研究发现CREB介导的单信号途径调控Bcl-2的表达，TCS能够通过抑制CREB的活性从而降低Bcl-2的表达，最终使hela细胞凋亡。王平实验小组［6］又对TCS抑制细胞增殖的信号途径进行了研究。结果发现，TCS抑制Hela细胞增殖与细胞内cAMP水平有关，它可以通过PKA介导的PKC/MAPK信号途径来抑制Hela细胞增殖。

巨噬源性的NO被认为是T细胞增殖强烈的抑制剂。低浓度的NO可以促进细胞增殖，抑制细胞凋亡。机体内细胞增殖和细胞凋亡处于一种平衡状态，NO的升高恰好打破这个平衡，抑制了细胞增殖，促进细胞凋亡［7］。

2.2抑制肿瘤细胞蛋白质的合成TCS能抑制真核细胞蛋白质的合成，因而抑制细胞生长。天花粉蛋白是RNAN-糖苷酶型的核糖体失活蛋白，作用于核糖体大亚基rRNA中A4324特定位点，专一性的使真核细胞的核糖体失活，而阻断其蛋白质合成［8］。

2.3对自然杀伤细胞及红细胞免疫功能的作用实验发现，天花粉蛋白在6mg/kg和12mg/kg剂量时能明显促进小鼠NK细胞杀伤活性，提示TCS可通过促进小鼠NK细胞活性提高机体免疫力，从而增强机体抗肿瘤能力。另有报道称TCS可使血液肿瘤患者的红细胞免疫黏附功能明显上升，其机理是天花粉蛋白与红细胞膜上的糖蛋白受体结合激活红细胞C3b受体活性［8］。

2.4对细胞因子及补体的作用白细胞介素在介导机体肿瘤免疫中发挥着重要作用。白细胞介素-2(IL-2)具有广谱的免疫增强活性，可诱导T、B细胞的增殖和分化，可促进细胞毒性T细胞的前体细胞分化为细胞毒性T细胞，并增强其杀伤效应，还可促进NK细胞的功能及释放干扰素。白细胞介素-6(IL-6)能诱导B细胞分化，促进浆细胞分泌免疫球蛋白，增强机体的免疫力。另有报道称TCS可通过替代途径激活补体系统，这个过程中TCS被分解成的两个羟胺片段依然具有激活补体的作用，并能明显提高补体介导的免疫复合物溶解能力，起到抗肿瘤作用。

3抗病毒

天花粉蛋白作为一种单链核糖体失活蛋白只有活性链而无细胞结合链，只能选择性的进入病毒感染的异常细胞内，对正常细胞毒性很小，极具临床应用价值。TCS除对多种植物病毒有效以外，体外实验表明它还可以抑制流感病毒，乙脑病毒，科萨奇病毒，麻疹病毒，单纯疱疹病毒，脊髓灰质炎病毒，肝炎病毒及腺病毒以及T淋巴细胞内HIV病毒的复制［9］。对单核、巨噬细胞内的HIV也有抑制作用［10］。陈光福等［11］进行了TCS对单纯疱疹病毒-1DNA复制的影响的研究，结果显示天花粉蛋白对体内外HSV-1DNA复制有抑制作用。其作用机制可能与抑制病毒DNA聚合酶或具有核酸内切酶活性有关。黄海等［12］研究了天花粉蛋白对HSV-1感染的细胞的作用，发现HSV-1感染的细胞内P38MAPK和Bcl-2增加，而TCS可以抑制此二者的增加，从而影响病毒复制。

4免疫调节

5问题及展望

综上所述，天花粉蛋白具有治疗妇科疾病、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等生物学作用，其大部分作用机制尚不完全明确，现在所进行的研究都处于探索阶段。我国是举世公认的天然药物大国，用中草药治病历史悠久，所以在中草药中筛选新药具有得天独厚的优势。作为一种植物蛋白，有廉价、易获得、生物作用广泛等特点，使其具有了良好的研究前景及实用价值。但天花粉蛋白本身具有抗原性，以及在人体内半衰期较短［10］，提取效率低等特点，都限制了它的推广应用。机制的研究是从根本上解决这些问题的关键，本课题对天花粉蛋白的作用机制做出综述，将为天花粉蛋白机制的进一步研究及其开发和临床应用提供有利的依据。

［1］李枝玲，丁玉，白云峰，等.天花粉蛋白的药用研究概况［J］.中国药房，2007，18（36）：2868.

［2］JieLi，XuechunXia，HuilingNie，etal.PKCinhibitionisinvolvedintrichosanthin-inducedapoptosisinhumanchronicmyeloidleukemiacelllineK562［J］.BiochimicaetBiophysicaActa，2007，1770：63.

［3］JieLi，XuechunXia，HuilingNie，etal.TrichosanthininducedapoptosisinHL-60cellsviamitochondrialandendoplasmicreticulumstresssignalingpathway［J］.BiochimicaetBiophysicaActa，2007，1770：1169.

［4］周欣阳，张天一，顾君一，等.天花粉蛋白诱导黑色素瘤凋亡机制的研究［J］.中国病理生理杂志，2007，23（11）：2258.

［5］PingWang，HuiYan，Ji-ChengLi，etal.CREB-mediatedBcl-2expressionintrichosanthin-inducedHelacellapoptosis［J］.BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications.2007，363:101.

［6］PingWang，Li-LiChen，HuiYan，etal.TrichosanthinsuppressesHelacellproliferationthroughinhibitionofthePKC/MAPKsignalingpathway［J］.CellBiolToxicol，2008，Aug28.

［7］FangLi，YunhuaMei，YingWang，etal.Trichosanthininhibitsantigen-speciWcTcellexpansionthroughnitricoxide-mediatedapoptosispathway［J］.CellularImmunology，2005，234:23.

［8］高富红，孙健，吴国娟.天花粉蛋白抗肿瘤作用机理研究概况［J］.动物医学进展，2005，26（11）：5.

［9］李雪梅，黄利鸣.天花粉蛋白的研究进展［J］.河北医药，2006，28（4）：322.

［10］LeeKM，WongKB，ShawPC.Recentadvancesintrichosanthin，aribosome-inactivatingproteinwithmultiplepharmacologicalproperties［J］.Toxicon，2005，45（6）:683.

［11］陈光福，尹飞，张红媛，等.天花粉蛋白对单纯疱疹病毒-1DNA复制的影响［J］.实用儿科临床杂志，2007，22（22）：1693.

［12］HaiHuang，HermanChan，Yuan-YuanWang，etal.TrichosanthinsuppressestheelevationofP38MAPK，andBcl-2inducedbyHSV-1infectioninVerocells［J］.LifeScience，2006，79:1287.

［13］查树伟，查佶.抗生育中草药的抗HIV研究现状和展望［J］.中国计划生育学杂志，2007，138(4):250.

［14］OuyangDY，ChanH，WangYY，etal.Aninhibitorofc-JunN-terminalkinases(CEP-11004)counteractstheanti-HIV-1actionoftrichosanthin.BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications，2006，339(1):25.

［15］王建华，欧阳东云，王媛媛，等.核糖体失活蛋白抗HIV-1失活作用的研究进展［J］.动物学研究，2006，27（5）：541.

［16］Yuan-YuanWang，Dong-YunOuyang，HaiHuang，etal.EnhancedapoptoticactionoftrichosanthininHIV-1infectedcells［J］.BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications，2005，331(4):1075.

［17］HongZhou，ZhijunJiao，JijunPan，etal.ImmunesuppressionviaIL-4/IL-10-secretingTcells:Anontoxicpropertyofanti-HIVagentTrichosanthin［J］.ClinicalImmunology，2007，122:312.

［18］XiaorongZhou，NengYang，LimingLu，etal.Up-regulationofIL-10expressionindendriticcellsisinvolvedinTrichosanthin-inducedimmunosuppression［J］.ImmunologyLetters，2007，110：74.

［19］周芸，周洪，王保龙，等.天花粉蛋白通过激活CD8Tc2亚群诱导人体免疫抑制［J］.现代免疫学，2005，25:11.

［20］李芳.天花粉蛋白对淋巴细胞功能的调节作用［J］.现代免疫学，2005，25(5):438.

［21］王保龙，周芸，江阳，等.天花粉蛋白抑制T细胞增殖的免疫学机制研究［J］.中华微生物学和免疫学杂志，2005，25(1):64.