本申请要求2014年11月21日申请的名称为“用于在医院内和医院外治疗蛇咬伤的中和毒液的药物组合物(venomneutralizingdrugcombinationsforthetreatmentofsnakebiteinandoutsidethehospitalsetting)”的美国临时申请nos.62/082,895及名称相同、2015年3月11日申请的nos.62/131,441及名称相同、2015年10月19日申请的nos.62/243,374的优先权。为了所有目的，上述这些申请的全部公开内容均通过引用而整体并入本文。
本发明涉及治疗毒液蛰入(如蛇咬伤解毒)的方法和组合物，并且应用于医药、公共健康和兽医技术领域。
背景技术：
毒液是具有简单或复杂成分的毒物的子集，通常由含有毒素的毒牙、毒刺、壳针或触角注入到体内，使猎物不能动弹或杀死猎物或作为防御捕食者或竞争对手的手段。毒液通常通过咬伤或通过尖锐的身体部位插入而输入到受害者体内。虽然许多毒液仅会造成不适，但是，有些毒液的毒性非常大，并会引起受害者死亡、截肢或永久性残废。有毒动物的例子包括无脊椎动物(如黑寡妇毒蛛、箱形水母和芋螺)、鱼类(如石鱼和鲉科其它成员)和爬虫动物(如蛇和珠状蜥蜴)。特别地，毒蛇咬伤是许多国家重大的公共健康问题，除南极洲以外的所有大陆都有此类事件发生。
世界各地每年有500万以上的毒蛇咬伤案例，其中许多案例或40多万起案例造成了严重的后遗症。可能由蛇咬伤引起的死亡案例高达12.5万起，并且造成许多起永久性残废。据估计，印度每年因蛇咬伤死亡的受害者超过4万人(大多数是年轻人)。在美国，每年发生大约8000起毒蛇咬伤事件，澳大利亚尽管没有来自大陆的毒蛇，但是，每年较高神经毒性和血毒性毒蛇咬伤达1500多起。参见alirol等2010,"snakebiteinsouthasia:areview"plosnegltropdis.4(1):e603；andkasturiratneetal2008,"theglobalburdenofsnakebite:aliteratureanalysisandmodelingbasedonregionalestimatesofenvenominganddeaths/'plosmed.5:e218。
许多毒液包括各种成分，这些成分通过干扰传输或破坏神经末梢来阻断神经和肌肉之间乙酰胆碱的传输，使骨骼肌麻痹，它们本身使除高级生命支持以外的所有治疗都无效。许多毒液破坏肌肉、结缔组织和皮肤，而有些毒液引发严重的、通常致命性出血和凝血–或所有这些影响的结合(例如，许多眼镜蛇类的毒液，如珊瑚蛇、太攀蛇和眼镜蛇的毒液及蝰蛇，如拉塞尔蝰蛇、极北蝰的毒液及响尾蛇的毒液通常同时具有血毒性/细胞毒性和神经毒性)。毒液通常是具有不同的活性组合(例如，神经毒性与血毒性或肌肉毒性组合)的酶和非酶毒素的复杂混合物。
虽然有时候能够得到抗蛇毒血清，但是因为各种原因，它们在治疗受害者方面的价值受到限制。首先，即使同一种蛇，甚至同一条蛇，其毒液的组成和作用也会因饮食和地域而明显不同。同一种蛇但地域不同，其毒液组成也会有很大差异，因此，在印度某个地方，一种蛇(例如，圆斑蝰)主要因出血问题而造成死亡，而在印度另一个地方，这种蛇更具有神经毒性。同样地，欧洲蝰(例如，极北蝰)的毒液会变化，因此，在某些情况下毒液更具神经毒性，而在另一些情况下引起细胞色素氧化酶-血毒性。在北美，因地区而异，初步抗毒血清治疗后的症状和体征出现复发，需要重新治疗的发生率更高。在许多情况下，如果无法提供多价抗蛇毒血清，蛇的品种变得非常重要，从而使用合适的抗蛇毒血清，但是，即使正确辨别了动物的品种，也并不能保证已经开发出其对应的抗蛇毒血清。在这种情况下，采用最相配或“副特异性”抗蛇毒血清作为最佳方案，但是，它们经常无效，同时会出现并发症和带来严重的经济负担。
其次，在某些情况下，例如，北美珊瑚蛇(单特异性的)或非洲蛇(多价的)，抗蛇毒血清已经退出市场。在撒哈拉以南非洲，由于生产厂商决定中断生产，这些重要的商业制剂已经非常稀少。2015年，无国界医生(msf，无国界医生组织)在其全球“愿望清单”(facebook)上提供增加蛇咬伤治疗方法的有效性，据世界新闻报道，2016年，大部分非洲大陆将消耗完有效的抗蛇毒血清治疗，并声称(例如，msf出版社2015年9月4日和8日发布)“除非全球卫生界采取行动确保提供治疗和抗蛇毒血清，否则，将有数万人继续因蛇咬伤而造成不必要的死亡。”
技术实现要素：
值得注意的是，与抗蛇毒血清不同，本发明的药物组合物更容易渗透通过蛇毒损伤组织和神经末梢，包括神经肌肉接头，比抗蛇毒血清的效果更快，更好。抗蛇毒血清本身的物理物质、血凝块、坏死组织和神经组织限制抗蛇毒血清的此种渗透，结果是抗蛇毒血清通常仅中和循环毒液或通过其它途径直接接触的毒液。本发明解决了这些局限性，并且在一些实施例中，当与抗蛇毒血清疗法组合作为一线治疗方案或联合配制时，使抗蛇毒血清的效果远好于单独使用的效果。
在一个替代实施例中，本发明还涉及一种采用pla2抑制剂化合物(优选伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪)单独使用或所述pla2抑制剂化合物与抑制pla2(最常见的spla2)或其它毒液成分(如金属蛋白酶(mp)和/或丝氨酸蛋白酶(sp))的其它化合物联合使用治疗毒液蛰入的方法，其中在毒液蛰入后立即(大约0小时)或尽快施用有效剂量的所述活性剂，并根据需要，继续施用大约1至7天，或直到达到医学确定的停用点。在一种方法中，所述方法包括施用有效剂量的本文所述的组合物，直到有害的spla2或mp活性水平降低，血球计数和凝血因子正常，并且受害者表现出的毒液蛰入的体征或症状持续改善，然后紧接着采用替代组合物，特别是包括传统的抗蛇毒血清组合物，进行治疗或再治疗。
本发明为患者提供pla2抑制剂、pla2抑制剂组合，任选与一种或多种金属蛋白酶(mp)、乙酰胆碱脂酶和/或其它毒液成分的抑制剂，以缓解引起毒液注入有关的损伤情况的毒液蛰入的影响。在一些实施例中，所述化合物是一种以上蛇毒成分的抑制剂。在一些实施例中，所述spla2抑制剂，特别是那些基于1-h-吲哚-3-乙醛酰胺化学结构，以及包括伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪的spla2抑制剂单独使用或彼此组合使用和/或与本发明另外描述的其它制剂组合使用。
本发明还涉及一种在被咬伤或螫伤后的0(即马上或尽快)至24小时内或在spla2水平升高之前、证明发生毒液蛰入的其它相应实验室异常值升高之前，和/或表示毒液毒性的临床体征或症状升高之前，施用此处所述的组合物，治疗或预防遭受毒液蛰入的患者死亡、长期伤害和降低对(或增加)抗蛇毒血清治疗、血液和凝块替换治疗、透析和医院资源需求的方法。
本发明还涉及一种降低哺乳动物(包括人)因毒液蛰入而发生死亡或伤害的可能性，所述方法包括开始向怀疑存在或已知遭受毒液蛰入的患者施药，所述方法包括在毒液蛰入后，但在局部、区域或全身性毒液蛰入导致发生损伤之前，特别是实质性损伤之前，单独或联合施用有效剂量的多功能抑制剂化合物(例如，伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)或化合物组合(包括伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪)。
在一个实施例中，本发明提供一种治疗遭受毒液蛰入(如本文另有说明，例如，蛇、其它爬虫动物、两栖动物、节肢动物、软体动物、刺包动物或腔肠动物等咬伤)的受试者的方法，所述方法包括施用(优选，受试者口服或注射)治疗有效剂量的至少两种，以及在一些实施例中，不超过两种选自由本发明另有说明的pla2抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(achel或直接烟碱受体激动剂，如与抗胆碱药配对的烟碱)、扩散因子抑制剂(以降低活性剂在患者受影响组织以外地方分散的可能性，出乎意料地，该组中包括伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪)及nmda受体拮抗剂(如地佐环平(mk-801))组成的组的活性成分，其中所述活性成分可以以混合物联合施用，或单独(独立)、同时、并行或按顺序施用。
优选地，上述活性成分通过针头或无针推进(如喷雾注射器或通过雾化施用)施用(至少初始)或口服，其它剂量的活性成分通过任何给药途径施用，从而在患者体内维持有效的活性浓度，直到不管因任何原因，治疗干预被停止，包括决定让患者接受更传统的抗蛇毒血清组合物，由于患者体内的活性水平达到其治疗指标的上限或患者的症状已消除或至少已平衡，不必接受进一步的治疗。
优选的其它治疗剂包括抗蛇毒血清，可注射或局部施用的乙酰胆碱脂酶抑制剂和machr拮抗剂、止呕剂或抗生素(通常是头孢菌素、四环素或去甲金霉素等)等。这些其它治疗剂中的许多治疗剂是蛇和其它毒液中存在的主要的酶和非-酶(如响尾蛇肌肉毒素)的抑制剂。
在另一个实施例中，本发明提供一种治疗遭受毒咬伤或其它毒液蛰入的受试者的方法，所述方法基本上由向受试者施用(优选最初至少注射或口服)治疗有效剂量的下述制剂的步骤组成：
(1)至少一种本文所述的pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸(indoxam)、甲基花生四烯酸(methylindoxam)或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及任选至少一种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由金属蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(优选注射给药)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、l-氨基酸氧化酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(2)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种金属蛋白酶抑制剂，及任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(例如有时施用或口服)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、l-氨基酸氧化酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(3)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，及任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由金属蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(有时经注射施用或经鼻局部施用或眼部施用)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、l-氨基酸氧化酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(4)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种金属蛋白酶抑制剂和至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，及任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由乙酰胆碱脂酶抑制剂、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、l-氨基酸氧化酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(5)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种乙酰胆碱脂酶抑制剂(通常与毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂(如阿托品或甘罗溴铵)注射施用)，及任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由至少一种金属蛋白酶抑制剂、至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂、nmda受体拮抗剂、扩散因子抑制剂、l-氨基酸氧化酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂、抗毒蛇血清和抗生素组成的组(6)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及一种或多种扩散因子抑制剂，及任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由至少一种金属蛋白酶抑制剂、至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、nmda受体拮抗剂、l-氨基酸氧化酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(7)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，nmda受体拮抗剂，及任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由至少一种金属蛋白酶抑制剂、至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、l-氨基酸氧化酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(8)单独使用或联合使用普啉司他(prinomastat)、伏立诺他(vorinostat)、马马司他(marimastat)、萘莫司他(nafamostat)、伊洛马司他(ilomastat)、强力霉素(doxycycline)、头孢菌素、坦诺司他(tanomastat)、巴马司他(batimastat)或伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪用于蛇咬伤，其中伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪是有效的mp抑制剂(如拉塞尔蝰蛇蛇毒)。
在一些优选实施例中，本发明提供一种治疗遭受如本文另有描述的毒液蛰入(通常是蛇咬伤)的患者的方法，所述方法基本上包括向患者施用(优选注射)治疗有效剂量的下述制剂：
(a)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种其他制剂，所述其他制剂选自由n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-对[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加贝酯)、deda和金属蛋白酶抑制剂(如普啉司他、伏立诺他、马马司他或巴马司他)和乙酰胆碱脂酶抑制剂(achel)(例如，新斯的明，阿托品或甘罗溴铵)组成的组；或
(b)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种其它制剂，所述其它制剂选自由n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-对[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加贝酯)、普啉司他、伏立诺他、马马司他、巴马司他、新斯的明和阿托品组成的组；及
(c)任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、nmda受体拮抗剂、扩散因子抑制剂、抗毒血清及抗生素组成的组。
在本发明的方法、药物组合物、系统和试剂盒的优选实施例中，所述金属蛋白酶抑制剂是普啉司他、伏立诺他和/或马马司他，以及所述pla2抑制剂优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种。
在一个实施例中，向遭受蛇咬伤毒液蛰入的患者联合施用pla2抑制剂(如优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐或其类似物、衍生物或药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物中的至少一种)，n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-对[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加贝酯)，或它们药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物，及金属蛋白酶抑制剂(如普啉司他、伏立诺他、巴马司他和/或马马司他，或其类似物、衍生物、药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物，及任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由乙酰胆碱脂酶抑制剂(如新斯的明或阿托品，优选通过注射施用)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组，进一步任选组合至少一种扩散因子抑制剂。
在一个实施例中，向遭受蛇咬伤毒液蛰入的患者联合施用pla2抑制剂(如伐瑞拉迪与/或甲基伐瑞拉迪或其类似物、衍生物、药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物)，n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-对[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加贝酯)和丝氨酸蛋白酶抑制剂(如4-(2-氨乙基)苯磺酰氟(4-(2-aminoethyl)benzenesulfonylfluoride)、萘莫司他或其类似物、衍生物、药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物)，及任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由抗蛇毒血清、乙酰胆碱脂酶抑制剂(如新斯的明或吡啶斯的明，优选通过注射施用)、蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂和抗生素组成的组，任选组合至少一种扩散因子抑制剂。
在一个实施例中，本发明涉及一种治疗毒液蛰入的方法：向需要治疗的受试者施用有效剂量的pla2抑制剂(优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种)，任选与本文其它地方描述的至少一种其它制剂联合施用。出乎意料的是，施用所述治疗剂可以预防或迅速逆转毒液蛰入引起的症状和体征。正如本文其它地方提到的那样，毒液蛰入的后遗症包括虚弱、呼吸短促、出血、刺痛、焦虑、呼吸麻痹和死亡。出乎意料的是，在毒液蛰入后6小时内，通常是2小时内施用本发明的制剂，几乎甚至可以完全有效地避免致命剂量毒液造成的死亡。出乎意料的是，在给药后几小时(如大约2小时)内，所述患者或受试者的毒液蛰入的体征和症状明显逆转或减轻。出乎意料的是，逆转效果可能在给药后60分钟内或甚至在30分钟内发生。例如，研究表明，神经传导可能在8小时内恢复到正常水平的至少80％。正如另一个实例所示，可在2小时内观察到溶血停止或减少–早期给药可以避免出现毒液蛰入的这些体征和症状。
根据本发明的药物组合物和方法可有利地进一步包括利多卡因和/或布比卡因作为制剂，帮助活性成分的局部分配，进一步实现治疗益处和镇痛效果，同时通过松驰淋巴平滑肌以减慢毒液的扩散。
本发明的方法、药物组合物、系统和试剂盒治疗或减少一种或多种神经毒素-诱导的呼吸衰竭、心脏中毒、组织和肌肉破坏和/或毒液诱导的弥散性血管内凝血的可能性，大幅减少患者因毒液蛰入导致的死亡和/或衰弱性伤害的可能性。实施本文所述的方法和药物组合物，防止出现各种威胁生命的症状，包括血毒素、细胞毒素、心脏毒素或肌肉毒素-诱导的组织损伤、出血和凝血障碍，神经毒素诱导的呼吸衰竭、四肢损伤、肾功能衰竭、多器官衰竭和/或心血管虚脱。在其中一种抑制剂也是抗生素和/或消炎剂(如伐瑞拉迪)时，因施用抗蛇毒血清引起的过敏和其它急性并发症也减少，感染风险降低。
本发明的一些实施例通过向有需要的受试者施用以下制剂，治疗或减少由其它有毒动物(如石鱼、狮子鱼、蝎子(如木蝎属(centuroidesspp))、蜘蛛(如平甲蛛属)、芋螺和热带水母的毒液蛰入后神经毒素诱导的呼吸衰竭和组织损伤的可能性：
(a)至少一种pla2抑制剂(优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种)及任选(优选)sp或mp抑制剂；及
(b)进一步任选一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂选自由乙酰胆碱脂酶抑制剂(如新斯的明或吡啶斯的明，优选通过注射施用)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、抗蛇毒血清(antivenom)、抗生素和扩散因子抑制剂组成的组。
本发明优选的药物制剂包括治疗有效剂量的：
(a)伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪(优选伐瑞拉迪)、n,n-二甲基氨基甲酰甲基、4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-对[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加贝酯)或它们的类似物、衍生物、药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物；
(b)(1)普啉司他、伏立诺他、巴马司他和/或马马司他或它们的类似物、衍生物、药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物，和/或(2)4-(2-氨乙基)苯磺酰氟或它们的类似物、衍生物、药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物；及
(c)任选，一种或多种药学上可接受的赋形剂。
非限制性示例药物组合物可以是注射液(优选采用自动或笔式-注射装置用于初步治疗)、粉末、脂质体、软膏和气雾剂的形式，并且可以包括与另一种化合物结合用于特异性靶向的活性成分(如纳米颗粒)。本文描述的药物组合物可以采用各种方法施用(例如，采用手动或自动注射装置，其可以是针式的并且可任选包括喷射器、鼻内给药装置、雾化器、定量雾化吸入器或喷雾设备)或采用口服制剂(如丸剂、片剂或酏剂)给药。本发明的试剂盒包括这些组合物和设备，以及适当的说明书和其它组件(如面罩)。组合物还可以是可形成注射液的冻干粉形式，用于初步(及随后)治疗毒液蛰入的患者。
在一个实施例中，本发明提供一种药物组合物，优选储存稳定、可注射、可雾化或可分散的药物组合物，其包括药学上可接受的稀释剂和治疗有效剂量的以下制剂中的任一种：
(1)至少一种本文所述的pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及任选，至少一种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由金属蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(优选注射给药或口服或独立地呈口服、局部或肠胃外形式，与或不与抗毒血清一起使用)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(2)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种金属蛋白酶抑制剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(优选注射施用)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(3)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由金属蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(优选注射施用)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(4)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种金属蛋白酶抑制剂和至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由乙酰胆碱脂酶抑制剂、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(5)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种乙酰胆碱脂酶抑制剂(通常注射施用)和/或毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由至少一种金属蛋白酶抑制剂、至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂、nmda受体拮抗剂、扩散因子抑制剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(6)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及一种或多种扩散因子抑制剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由至少一种金属蛋白酶抑制剂、至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(7)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，nmda受体拮抗剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由至少一种金属蛋白酶抑制剂、至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组。
在另一个实施例中，本发明提供一种可复水的药物制剂，包括一种或多种药学上可接受的赋形剂与治疗有效剂量的以下制剂的冻干或冷冻干燥混合物：
(1)至少一种本文所述的pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及任选至少一种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由金属蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(优选通过注射给药)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(2)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，和至少一种金属蛋白酶抑制剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由丝氨酸蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(优选通过注射给药)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(3)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，和至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由金属蛋白酶抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(优选通过注射给药)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(4)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，和至少一种金属蛋白酶抑制剂和至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由乙酰胆碱脂酶抑制剂、毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂、扩散因子抑制剂、nmda受体拮抗剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
(5)至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐中的至少一种，及至少一种乙酰胆碱脂酶抑制剂(通常注射给药)和/或毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)拮抗剂，及任选一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂选自由至少一种金属蛋白酶抑制剂、至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂、nmda受体拮抗剂、扩散因子抑制剂、抗蛇毒血清和抗生素组成的组；或
在一个实施例中，上述组合物复水后施用于患者或受试者。
在一个实施例中，本发明涉及采用本文另外公开的抗蛇毒血清化合物或组合物(“抗蛇毒血清”)及pla2抑制剂和/或金属蛋白酶抑制剂和/或丝氨酸蛋白酶抑制剂的组合治疗毒液蛰入。在一个实施例中，所述抗蛇毒血清与选自由伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、普啉司他、马马司他、巴马司他、伏立诺他、卡莫司他、加贝酯和萘莫司他(nafomostat)或它们药学上可接受的盐组成的组中的至少一种化合物联合使用。在优选的实施例中，抗蛇毒血清与伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它们药学上可接受的盐联合使用。在另一个实施例中，所述抗蛇毒血清与伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它们药学上可接受的盐中的至少一种及普啉司他、马马司他、巴马司他或它们药学上可接受的盐中的至少一种联合使用。在另一个实施例中，所述抗蛇毒血清是上述组合可同时、并行或按顺序联合施用于有需要的患者或受试者。
在一个实施例中，本发明涉及一种药物组合物，包括至少一种抗蛇毒血清化合物或组合物与至少一种pla2抑制剂、金属蛋白酶抑制剂和/或丝氨酸蛋白酶抑制剂联合。所述组合物可在一部分或多部分或单一组合物中配制和施用。在一个实施例中，所述抗蛇毒血清与选自由伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、普啉司他(prinomastat)、马马司他、巴马司他、伏立诺他、卡莫司他、加贝酯和萘莫司他或它们药学上可接受的盐组成的组中的至少一种化合物联合使用。在优选的实施例中，抗毒血清与伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它们药学上可接受的盐一起使用。在另一个实施例中，所述抗蛇毒血清与伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它们药学上可接受的盐中的至少一种及普啉司他、马马司他、巴马司他或它们药学上可接受的盐中的至少一种联合使用。在另一个实施例中，抗毒血清是crofabtm。
在一个实例中，一名受害者被咬伤，自己注射、口服本发明组合物的酏剂或其它口服生物利用形式、鼻腔喷雾和/或吸入剂型，然后到医院或其它医疗机构接受抗蛇毒血清治疗或观察(诊断和/或接受本发明组合物进一步治疗)。症状较轻时，本发明的组合物可以以丸剂、液体或喷雾形式定期(例如每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小时一次或甚至每天一次按缓释和/或控释形式)施用，直到身体毒液得到清除(可能是1-10天或更多天–到大约3周)。
由于目前无法提供医院以外的毒液蛰入的药物治疗，也无法提供除传统抗蛇毒血清以外的明确治疗方法，因此，本发明满足了目前尚未满足的重大临床要求。此外，本发明的治疗方法经济高效、安全，可以从紧急治疗过渡到门诊或简单的医院治疗。
附图说明
图4显示了伐瑞拉迪对蛇毒pla2活性的抑制作用。伐瑞拉迪或达普拉缔(darapladib)都没有明显抑制蜂毒的spla2，它们对蜂毒并不具有与对蛇毒一样的效力。伐瑞拉迪有效地抑制了蛇毒pla2，而达普拉缔(阴性对照)并非如此。出乎意料的是，伐瑞拉迪并未抑制蜂毒pla2(实例6)。
图5a-r伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪对蛇毒spla2活性具有非常高的效力。伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪对蜂毒spla2都未显示出同等程度的效力(实例6)。
图6a-h伐瑞拉迪对小鼠和大鼠中致死剂量的金黄珊瑚蛇(珊瑚蛇)蛇毒具有保护性和治疗性效果。显示了本发明的小鼠和大鼠体内实验实例。皮下注射高剂量金黄珊瑚蛇蛇毒之前、同时或之后，施用基于伐瑞拉迪的治疗，结果表明，基于伐瑞拉迪的治疗方法使小鼠和大鼠获得了生存优势。通过静脉注射伐瑞拉迪防止了严重的溶血现象，并且在相同动物中通过伐瑞拉迪治疗相应地抑制了pla2水平。继皮下施用金黄珊瑚蛇蛇毒之后，静脉注射伐瑞拉迪，大鼠存活率达到100％(实例7)。
图7显示了同时注射响尾蛇蛇毒和伐瑞拉迪或伐瑞拉迪和mp抑制剂，改善了小鼠的存活率。此外，施用甲基伐瑞拉迪和mp抑制剂的小鼠可避免响尾蛇(c.atrox)蛇毒引发的死亡(实例8)。
图8皮下注射伐瑞拉迪预处理的小鼠可避免因皮下注射拉塞尔蝰蛇(圆斑蝰)蛇毒而引发的死亡(实例9)。
图9伐瑞拉迪对小鼠体内致死剂量的极北蝰(普通蝰蛇)蛇毒具有保护性和治疗性效果(实例10)。
图10显示了普啉司他、巴马司他和马马司他的体外眼镜蛇蛇毒抑制性。
图11显示了普啉司他作为体外蛇毒mp抑制剂的效果。
图12显示了巴马司他作为体外蛇毒mp抑制剂的效果。
图13显示了马马司他作为体外蛇毒mp抑制剂的效果。
图14显示了丝氨酸蛋白酶抑制剂对毒蛇和眼镜王蛇的抑制效果(体外)。萘莫司他对眼镜王蛇、太攀蛇拥有出乎意料的活性(体外)。
图15、表3显示了伐瑞拉迪spla2抑制的ic50(实例12)。伐瑞拉迪对几种蛇毒具有出乎意料的效力(实例12)。
图16、表4显示了甲基伐瑞拉迪spla2抑制的ic50。甲基伐瑞拉迪对几种蛇毒具有出乎意料的效力(实例12)。
图17、表5显示了普啉司他-诱导的mp抑制的ic50(体外)(实例2)。普啉司他对蛇毒金属蛋白酶的活性比以前报道的更广。
图18、表6显示了马马司他-诱导的mp抑制的ic50(体外)。
图19、表7显示了巴马司他-诱导的mp抑制的ic50(体外)。
图20、表8显示了伏立诺他、伊洛马司他、加贝酯和萘莫司他诱导的mp抑制的ic50(体外)。
具体实施方式
i.定义
本发明说明书中采用下述词语来描述本发明。若本发明中未对一个词语专门进行定义，则该词语应理解为其使用方式与熟悉本领域技术人员的使用方式一致。
除非特别规定，本发明使用的所有技术和科学术语的意义与本发明所属领域技术人员通常理解的相同。虽然本发明实践或试验中也可以使用与此处所述类似或相当的任何方法和材料，但是，现在描述的是优选的方法和材料。
必须指出的是，除非上下文明确指明，否则，正如本专利说明书和权利要求书中所使用的那样，单数形式“一种”、“和”和“所述(该)”包括复数意义。
在本发明中，“ache”是乙酰胆碱的缩写；“achel”是乙酰胆碱酯酶抑制剂的缩写；“machr”是毒蕈碱型乙酰胆碱受体的缩写；“nachr”是烟碱型乙酰胆碱受体的缩写；ache的抑制剂也抑制丁酰胆碱酯酶(bche)、假胆碱酯酶和其它酶。“mp”是金属蛋白酶的缩写(如哺乳动物基质金属蛋白酶、mmp和蛇毒金属蛋白酶、svmp；“sp”是丝氨酸蛋白酶的缩写；“mpi”是金属蛋白酶抑制剂的缩写。毒液(例如，蛇毒)是分泌出来的，在上下文中，毒液“pla2”和“spla2”互换使用；pla2-i是磷脂酶抑制剂的缩写；“spi”是丝氨酸蛋白酶抑制剂的缩写。
此外，下述词语应具有下述规定定义。
说明书中使用的词语“患者“或“受试者”用于描述接受本发明化合物或组合物治疗，包括预防性治疗(预防法)的动物，通常是哺乳动物，特别是包括驯养动物(如狗、猫、牛、马、绵羊、山羊等)，优选是人。治疗那些对特定动物(如人类患者)来说特定的症状或疾病时，词语患者指的是该特定动物。在大多数情况下，本发明的患者或受试者是任一性别或两种性别的人类患者。接受本发明方法治疗的预期受试者包括人、宠物、实验室动物、家畜、马等。
“蛇咬伤”包括“干”蛇咬伤及导致毒液蛰入的咬伤或无-毒蛇咬伤或未确定蛇的咬伤。确定患者是蛇咬伤受害者的方法有很多种。这些方法包括：受试者或另外一个人目睹被咬伤；观察到蛇咬伤的物理证据(例如，刺伤或裂伤、局部疼痛、局部发红或肿胀)；受试者出现与蛇咬伤毒液蛰入一致的体征或症状(如疼痛、发红、出血或其它毒液蛰入证据，如虚弱或麻痹)；受试者出现与神经毒性毒液蛰入一致的体征或症状，且以前并未诊断出现过这些症状或体征指示的除了神经毒性中毒以外的疾病；检测出毒液或毒液活性(例如，采用蛇毒/蛇毒活性检测试剂盒在咬伤部位、尿液或血液中)或分析发现pla2活性升高；即使在缺乏毒牙或牙印(如被金环蛇咬伤时)的情况下，肉眼辨识蛇也可以表明患者已经被神经毒性毒蛇咬伤。
神经毒性毒液蛰入的“体征”和“症状”包括感觉异常、困倦、不良共轭凝视、导致上睑下垂(睑迟滞)的小肌肉麻痹、颈部肌肉无力、吞咽障碍、瞳孔放大、肌束震颤、唾液分泌增加、多汗、肌肉失去协调、腹痛、说话困难、恶心、吞咽困难和其它延髓麻痹，及呕吐、低血压、呼吸衰竭和呼吸肌麻痹。在一些情况下，受试者出现神经毒性毒液蛰入的早期症状，如睑迟滞形式的小肌肉麻痹(、不良共轭凝视、吞咽困难和其它延髓麻痹。遭受毒液蛰入或怀疑遭受毒液蛰入的受试者的肌肉功能的临床评价包括：视觉敏锐度、吞咽难易程度、吐舌能力、发音、将头从床上完全抬起5秒以上的能力(颈部弯曲)和峰值呼吸流量降低。
“毒液”具有其正常的含义，是动物(如蛇、其它爬虫动物、两栖动物、蜘蛛、蝎子、壁虱、芋螺(conesnail)、腔肠动物(水母)等咬或螫传递的有毒分泌物。
“抗蛇毒血清”、“抗毒素”或“抗蛇毒素”是治疗有毒的咬伤或螫伤时使用的生物产品。抗蛇毒血清通常是通过从有毒脊椎动物(如蛇、蜥蜴或鱼类挤出毒液，或从无脊椎动物(如蜘蛛、壁虱、昆虫、腔肠动物或软体动物)提取毒液制备得到的。然后，将毒液稀释，并注射到马、绵羊、兔或山羊或鸡蛋内。受试动物或鸡蛋将对毒液产生免疫反应，产生抗毒液抗原分子的抗体，然后，可以从动物血液中收集这些抗体，精制，并用于治疗毒液蛰入。在国际上，抗蛇毒血清必须符合药典和世卫组织的标准。“副特异性”抗蛇毒血清是那些具有除视为医学上有用(例如，以确定抗蛇毒血清的副特异性作用)的特异性以外的作用或特性的抗蛇毒血清。
“毒液蛰入”指的是由于被爬虫动物、两栖动物、节肢动物、软体动物、刺包动物、昆虫、腔肠动物或其它有毒脊椎动物或无脊椎动物咬伤导致毒液注入受害者体内，包括神经毒性、非神经毒性毒液蛰入，及未确定特征的毒液蛰入，以及眼镜蛇喷到眼睛造成的眼炎。非神经性毒液蛰入的实例包括血毒性、血管毒性、心脏毒性和肌肉毒性毒液蛰入，在下述说明中通常称为“血毒性”或“细胞毒性”毒毒液蛰入。
“神经毒性毒液蛰入”指的是神经毒性的毒液的毒液蛰入。神经毒性毒液包括，例如，但不限于毒蛇产生的毒液。
“毒蛇”指的是分泌任何比例的神经毒性、血毒性、血管毒性、肌肉毒性、细胞毒性和/或其它毒性的毒液的蛇。例如，但不限于毒蛇包括眼镜蛇、环蛇、蝰蛇、树眼镜蛇(ambas)、太攀蛇、新几内亚南棘蛇、非洲树蛇(游蛇)、响尾蛇、珊瑚蛇、海蛇(海蛇科)等。所有蝰蛇科，包括响尾蛇、拉塞尔蝰蛇、锯鳞蝰、矛头蝮、极北蝰和竹叶青蛇及蝮蛇等都是有毒的。据了解，总共发现了大约600种毒蛇，其中200多种被视为在世界上具有医学和兽医学重要性。还应该认识到的是，毒液包括蛋白质和其它有毒物质的复杂混合物。因此，神经毒性毒蛇的毒液可能包括具有血毒性、血管毒性、心脏毒性、肌肉毒性和/或其它有毒特性(包括神经毒素)的制剂。
“储存稳定”是指制剂在温度大约20℃至35℃至大约40℃时在大约至少3个月至大约6个月期间内稳定。
本文使用的术语“药学上可接受的”意思是根据疾病的严重程度和治疗的必要性，适合向受试者(包括人类患者)施用该化合物或组合物，从而实现本文所述的治疗，且并不造成不适当的有害副作用。
本文使用的术语“小分子”指的是分子量小于大约2500，或小于大约1000，或小于大约750，或小于大约500的分子。
ii.概述
在一些实施例中，本发明提供一种通过确定受试者是蛇咬伤或其它毒液蛰入的受害者，并施用pla2抑制剂，治疗人类受试者(或其它哺乳动物)的神经毒素-诱导的呼吸衰竭或降低这种可能性发生的方法。在一些实施例中，pla2抑制剂是1h-吲哚-3-乙醛酰胺(1h-lndole-3-glyoxylamide)。在一些实施例中，pla2抑制剂是伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪。
本发明人发现，伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、其它1h-吲哚-3-乙醛酰胺pla2抑制剂在避免大量有毒动物(包括蛇(包括蝰蛇和眼镜蛇))毒液蛰入引起的死亡和其它不良作用方面非常有效。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗人类受试者神经毒素诱导的呼吸衰竭或降低这种可能性发生的方法：确定受试者是蛇咬伤或其它毒液蛰入的受害者，并且施用(或联合施用)药学上有效剂量的一种或多种组合物，所述组合物选自由pla2抑制剂、金属蛋白酶抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂组成的组，及任选本文所述的辅助联合治疗(如联合施用抗生素、扩散因子抑制剂、乙酰胆碱脂酶抑制剂(含或不含machr拮抗剂))。
一方面，本发明提供一种治疗人类或动物组织损伤、出血和凝血障碍、心血管性虚脱或神经毒素诱导的呼吸衰竭或降低这种可能性发生的方法，包括确定或临床怀疑受试者是蛇咬伤的受害者，并且向受试者施用药学上有效剂量的抑制剂，其中所述抑制剂采用或不采用注射施用，或采用注射和非注射方法组合施用。
本发明的优选组合物包括至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，它们可以单独施用或与上述的一种或多种制剂/组合物一起施用。
在一些实施例中，pla2抑制剂是伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它们的组合。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗(i)眼镜蛇类；(ii)蝰蛇科；或(iii)游蛇科的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗眼镜蛇属(眼镜蛇)，如中华眼镜蛇、黄金眼镜蛇、台湾眼镜蛇、孟加拉眼镜蛇、森林眼镜蛇、眼镜王蛇、唾蛇以及亚洲、非洲、澳大利亚医学上非常重要的其它眼镜蛇的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗金环蛇(环蛇属)，如金环蛇、印度环蛇及亚洲、东南亚、太平洋岛屿、非洲、澳大利亚及有时的美洲和欧洲其它眼镜蛇的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗太攀蛇(太攀蛇属)，如太攀蛇，棘蛇(死亡蛇蛇)，如南部棘蛇及伊澳蛇(王棕蛇和棕伊澳蛇)，虎蛇(虎蛇属)及澳大利亚、巴布亚新几内亚周围地区的其它眼镜蛇的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗东部珊瑚蛇(珊瑚蛇)，如金黄珊瑚蛇，及美洲和东南亚其它珊瑚蛇的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗较大组的海蛇属的海蛇(如半环扁尾海蛇)和其它海蛇的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗曼巴蛇属(黑曼巴蛇)，如黑树眼镜蛇的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗蝰蛇科，如蝰蛇、响尾蛇、铜头蛇/水蝮蛇及巨蝮，包括但不限于响尾蛇属，如衲脊响尾蛇、西部菱斑响尾蛇、小盾响尾蛇及其它蛇，如极北蝰、三色矛头蝮、美洲矛头蝮、加蓬咝蝰、短尾蝮、竹叶青蛇及世界各地其它蝰蛇的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗拉塞尔蝰蛇(蝰蛇属)、圆斑蝰(亦称为百步金钱豹、卢氏蝰)的咬伤，防止立即出现生命威胁、肾损害和脑垂体梗塞。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗锯鳞蝰(锯鳞蝰属)，如锯鳞蝰和其它医学上重要的锯鳞蝰属蛇的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗响尾蛇属(蝮蛇、响尾蛇)，如小盾响尾蛇、西部菱斑响尾蛇、衲脊响尾蛇、西海岸响尾蛇和其它响尾蛇的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗蝮蛇属(蝮蛇)，如水蝮蛇、铜头蝮蛇、马来红口蝮、白眉蝮的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗非洲蝰，如加蓬咝蝰和砂膨蝰的毒液蛰入。
在一些实施例中，所述抑制剂用于治疗游蛇，如非洲树蛇、树蛇、藤蛇和红树林蛇的毒液蛰入。
在一些方法中，pla2抑制剂可作为单一制剂使用。在优选的方面，本发明采用有效剂量的pla2抑制剂(优选1h-吲哚-3-乙醛酰胺，特别是伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐或它们的混合物)作为单一制剂或制剂治疗遭受毒液蛰入的患者。
值得注意的是，根据本发明的优选实施例中，可以使用伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，但不施用单独的丝氨酸蛋白酶抑制剂或金属蛋白酶抑制剂。
在一个方法中，与蛇毒pla2的ic50相比，spla2抑制剂对人pla2具有更低的ic50值。在一些实施例中，毒液pla2的ic50相当于人pla2的10倍、100倍、1000倍或更低。
此外，如实例11所述，我们发现，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪除了对广泛的蛇毒具有pla2抑制活性之外，还抑制多种蛇的毒液的mp和sp活性。令人吃惊的是，在一些情况下，与通常试验用于对抗医学上重要的蛇毒的抑制剂相比，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪是效力更强的mp抑制剂和sp抑制剂。例如，参见图2a、b和图3。不受限于特定的机理，pla2抑制剂作为单疗法的效果通过组合pla2抑制活性和sp和/或mp抑制活性而增强。
在一些方法中，pla2抑制剂可作为组合疗法使用。在一些实施例中，pla2抑制剂与一种或多种制剂联合施用，所述制剂选自由抗蛇毒血清(或抗蛇毒素)、小分子金属蛋白酶抑制剂和小分子丝氨酸蛋白酶抑制剂组成的组。
术语“共同配制”指的是一种以上活性化合物被配制到单一剂型内，患者服用该单一剂型。正如指出的那样，术语联合施用包括术语共同配制，至少在组织处施用活性化合物时是如此。
在一个方法中，需要治疗的受试者接受包括一种或多种pla2抑制剂(例如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)和抗毒血清的联合治疗。
在一些方法中，pla2抑制剂可作为组合疗法使用。在一个方法中，需要治疗的受试者接受包括一种或多种pla2抑制剂(例如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)和mp抑制剂的联合治疗。在一些方法中，mp抑制剂是普啉司他。在一些方法中，mp抑制剂选自伏立诺他、头孢克肟和其它头孢菌素、头孢他啶(tazidime)、头孢羟氨苄(abbott-50192)、强力霉素(doxycycline)和其它四环素、萘莫司他、银杏苦内酯a、左旋多巴、gm6001、加贝酯、阿克他利、格拉司琼、马马司他、巴马司他和莨菪碱。
在一些方法中，pla2抑制剂可作为组合疗法使用。在一个方法中，需要治疗的受试者接受包括一种或多种spl2抑制剂(例如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)和sp抑制剂的联合治疗。在一些方法中，sp抑制剂是萘莫司他或加贝酯或aebsf(4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐)。
在一些方法中，pla2抑制剂可作为组合疗法使用。在一个方法中，需要治疗的受试者接受包括一种或多种spl2抑制剂(例如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)及mp抑制剂和sp抑制剂的联合治疗。在一些方法中，sp抑制剂选自萘莫司他、加贝酯和aebsf，mp抑制剂选自普啉司他、伏立诺他、头孢克肟和其它头孢菌素、头孢他啶、abbott-50192、强力霉素和其它四环素、萘莫司他、银杏苦内酯a、左旋多巴、gm6001、加贝酯、阿克他利、格拉司琼、马马司他、巴马司他和莨菪碱。在一些方法中，mp抑制剂是普啉司他或伏立诺他，sp抑制剂是萘莫司他、加贝酯或aebsf。
在一些方法中，患者的眼睛暴露于毒液(如眼镜蛇唾液造成的眼炎)，局部采用基于伐瑞拉迪的单一疗法或组合疗法。
iii.受试者
在一些实施例中，遭受毒液蛰入风险或遭遇毒液蛰入的受试者承受因蛇、鱼、节肢动物、软体动物、刺胞动物、或其它有毒动物毒液蛰入后，血毒素、细胞毒素、心脏毒素或肌肉毒素诱导的组织损伤、四肢或眼睛伤害，存在或不存在由此引起的肾脏衰竭、多器官衰竭和/或心血管虚脱。
受试者是哺乳动物，包括，例如，人类、非人类灵长动物、小鼠、大鼠、狗和猫。
在一些实施例中，已经遭遇毒液蛰入的受试者根据本发明进行治疗(例如，采用1h-吲哚-3-乙醛酰胺，如伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪治疗)。在一些实施例中，知道受试者被蝰蛇毒液蛰入。在一些实施例中，知道受试者被眼镜蛇毒液蛰入。在一些实施例中，知道受试者被游蛇毒液蛰入。在一些实施例中，不知道受试者是被蝰蛇或眼镜蛇或游蛇毒液蛰入(即治疗时不知道蛇的种类)。在一些实施例中，受试者被种类未知的蛇毒液蛰入。
在一些实施例中，受试者被毒液蛰入比人类或非人类脊椎动物毒液平均ld50更高的剂量。在一些实施例中，受试者被毒液蛰入比人类或非人类脊椎动物毒液平均ld50更低的剂量。在一些实施例中，受试者被毒液蛰入的剂量是人类或非人类脊椎动物毒液平均ld50的至少0.5倍。在一些实施例中，受试者被毒液蛰入的剂量是人类或非人类脊椎动物毒液平均ld50的至少2倍。
iv.磷脂酶a2抑制剂
脂酶是从膜脂质释放生物活性分子的酶。关键的脂肪酶家族由磷脂酶a2(pla2)组成。磷脂酶a2催化sn-2位磷脂的水解，产生游离脂肪酸和溶血磷脂。pla2倾向于从膜花生四烯酸、血小板活化因子和溶血磷脂酸释放和/或形成至少三种重要的脂质介质。人们认为，通过pla从膜磷脂释放花生四烯酸是控制细胞内类花生酸产生的关键步骤。pla2酶通常分为胞浆型pla2(cpla2)、分泌型pla2(spla2)和非钙依赖型pla2(ipla2)。毒液(如蛇毒)pla2(即spla2)是分泌出来的。根据分子量、钙的需求量、结构特征、底物特异性和功能作用进行分类。参见ray,etal."phospholipasea2inairwaydisease:targetfordrugdiscovery/'journalofdrugdiscoveryandtherapeutics1(8)2013,28-40。
本发明中可以使用的spla2抑制剂包括但不限于ly315920和s5920(伐瑞拉迪)、ly333013和s-3013(甲基伐瑞拉迪)、ly311727、bms181162、ym26567和variabilissb203347、s-2474(甲基花生四烯酸)和花生四烯酸。在一些实施例中，pla2抑制剂是伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪。伐瑞拉迪是spla2抑制剂，经配制可静脉内施用和口服，研究用于治疗高血脂、脓毒症诱导的全身炎症反应综合征，及急性胸部综合征(镰状细胞疾病并发症)。参见"varespladib"americanjournalofcardiovasculardrugs.11(2):137-43.2011。甲基伐瑞拉迪是伐瑞拉迪的前体药物，通常优选口服。
在优选的实施例中，pla2抑制剂是小分子(如mw<2000、<1000或<500)。
正如本文所述，我们已经证明，令人意外的是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪拥有突出的特性，使其适合作为毒液蛰入的“通用”的一线且经常全面的治疗。正如上文所述，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪，除对广泛的蛇毒具有pla2抑制活性之外，还通过直接和间接抑制蛇毒毒性，减弱宿主对蛇毒的病理反应，降低伤害。据我们观察，这种对蛇毒的广泛活性尤其让人吃惊，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪不是蜂毒pla2的有效抑制剂，一般说来，药用pla2抑制剂对蛇毒的效力不如对哺乳动物的效力。
令人吃惊的是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪还抑制多种蛇毒的mp和sp活性。实际上，令人吃惊的是，在一些实验中，与这些抑制剂医学上重要的几种实例(如萘莫司他、马马司他和巴马司他)相比，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪是效力更强的拉塞尔蛇毒的sp和mp抑制剂。
还让人吃惊的是，我们观察到，对基本上所有蛇毒来说，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪的ic50明显低于人spla2抑制的报道值。
还令人吃惊的是，我们发现，即使毒性效应主要是细胞毒性的(包括所有固体和液体器官的所有表现)，采用伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪单一疗法使注射毒液的小鼠都具有优异的存活率。这表明伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪在治疗被蛇毒液蛰入出血性变异有效，所述蛇包括但不限于西部菱斑响尾蛇、小盾响尾蛇、圆斑蝰(百步金钱豹)、极北蝰、金黄珊瑚蛇。不受限于特定的机理，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪可以安全地抑制宿主反应，抑制蛇毒pla2(降低ic50)比抑制人spla更有效，部分防止溶血反应的有害影响和其它组织破坏。伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪的直接和间接毒液和宿主mp和sp抑制活性还可能部分解释了其对抗溶血性毒液有害影响的阻止作用。
其它pla2抑制剂，例如，但不限于其它1h-吲哚-3-乙醛酰胺，在治疗毒液蛰入也有用。在本发明的指导下，本领域的技术人员将能够鉴别pla2抑制剂及对广泛毒液与/或定制的特定毒液组(例如，蛇的特定种类，或特定种类无脊椎动物的毒液)有效的治疗组合。
其它优选的spla2抑制剂包括专利us5654326中描述的那些抑制剂–由下述化学结构的化合物表示：
其中x是o或s，优选o；
r1是c7-c20烷基、c7-c20烯基、c7-c20炔基、碳环基(优选苄基或乙基苯基)或杂环基；
r2是氢、卤(f、cl、br、i)、c1-c3烷基(优选乙基)或c3-c4环烷基；
r4是h或-o-(ch2)m-c(o)orv基，其中m是1-3(优选1)，rv是h或c1-c3烷基，优选ch3；及
r5、r6和r7是h，或
它们药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物。
本发明中使用的优选spla2抑制剂化合物(伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪)由下述化学结构式表示：
直接或间接pla2抑制剂还包括n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他，卡莫司特)或(乙基-对[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯)(加贝酯)及白三烯合成抑制剂，选自甲基花生四烯基氟代膦酸酯(mafp)、丙氧芬、ono-rs-082、1-[3-(4-辛基苯氧基)-2-氧代丙基]吲哚-5-羧酸、1-[3-(4-辛基苯氧基)-2-氧代丙基]吲哚-6-羧酸、花生四烯基三氟甲基酮、d609、4-{3-[5-氯-2-(2-{([(3,4-二氯苄基)磺酰基]氨}乙基)-1-(二苯甲基)-1h-吲哚-3-基]丙基}苯甲酸(way-196025)、艾非拉地(efipladib)、4-{2-[5-氯-2-(2-{[(3,4-二氯苄基)磺酰基]氨}-乙基)-1-(二苯甲基)-1h-吲哚-3-基]乙氧基}苯甲酸、艾考拉地(ecopladib)、(e)-n-t(2s；4r)-4-[n-(联苯基-2-基甲基)-n-2-甲基丙氨基-1-[2-(2,二氟苯甲酰)苯甲酰]吡咯烷-2-基]甲基-3-[4-(2,4-二氧噻唑烷二-正-5-基亚基甲基)苯基]丙烯酰胺(rsc-3388)、黄连素、谷氨酰胺、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它们药学上可接受的盐。
本发明的某些实施例涉及施用pla2抑制剂，这些抑制剂选自由伐瑞拉迪(ly315920)、甲基伐瑞拉迪(ly333013)、aiplai(印度苦楝树pla2抑制剂)、bms-181162、ly311727、arl-67974、fpl67047、sb-203347、ro-23-9358、ym-26734、ym26567、is-741、mj33、氟尼辛、依非拉地(effipladib)、way196025、艾考拉地(ecopladib)、吉立拉地(giripladib)、variabilin、花生四烯酸、甲基-花生四烯酸、sb203347、paf-ah、戴拉普迪(darapladib)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰丝氨酸(ps)、磷脂酰丝氨酸(pc)、磷脂酰肌醇(pi)和磷脂酰甘油(pg)，及它们的混合物组成的组，所述抑制剂与至少一种选自由羧甲基纤维素(cmpe、cmc-pe或cme)、透明质酸(hype、hype和hyal-pe)、肝磷脂(heppe、heppe、heppe、hepa-pe)、硫酸软骨素a(csape、csape、csape)、聚明胶肽(海脉素)(hempe、hempe)、羟乙基淀粉(hespe、hespe)(优选透明质酸-连接的磷脂酰乙醇胺(hype))及它们的类似物、衍生物、药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物、多晶型物和混合物组成组的化合物连接(结合)。
pla2抑制剂还包括组合物，所述组合物包含至少一种磷脂质，所述磷脂质选自由磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰丝氨酸(ps)、磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰肌醇(pi)和磷脂酰甘油(pg)及它们的混合物组成的组，所述磷脂质与选自羧甲基纤维素(cmpe、cmc-pe或cme)、透明质酸(hype、hype和hyal-pe)、肝磷脂(heppe、heppe、heppe、hepa-pe)、硫酸软骨素(csape、csape、csape)、聚明胶肽(海脉素)(hempe、hempe)、羟乙基淀粉(hespe、hespe)及它们的混合物中的至少一种化合物连接(结合)。透明质酸连接的磷脂酰乙醇胺(hype)是优选的pla2抑制剂。
在一些实施例中，pla2抑制剂是实例14中描述的抑制剂(“采用金黄珊瑚蛇蛇毒的眼镜蛇pla2抑制剂的hts发现”)。
v.抗蛇毒血清
许多抗脊椎动物和无脊椎动物毒素的抗蛇毒血清的抗-pla2、mp和sp效力可以增强，例如，通过单独使用伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪(通常作为pla2抑制剂)或其与普啉司他、巴马司他、马马司他(采用或不采用伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪与抗蛇毒血清联合使用)和对毒液成分具有特异性和非特异性活性的其它抑制剂一起使用，有益地修饰宿主反应或组合有益效果。
当被蝰蛇、眼镜蛇或游蛇咬伤时，毒液蛰入中既含有神经毒性又含有血毒性成分，导致麻痹、出血或凝血障碍，而且，区域特定需求、其蛇咬伤风险和治疗资源导致需求和制剂要求变化多端，此时，采用抗毒血清联合疗法特别适合。联合疗法还可以使用抗蛇毒血清及毒液中其它酶抑制剂(如磷脂酶(如磷脂酶a2)抑制剂)或其它导致麻痹、破坏神经末梢和/或导致出血性疾病的毒液成分(如蜂毒素，其刺激磷脂酶并具有血毒性/细胞毒性和神经毒性)的抑制剂(clapp等,1995,broinrgs.693:101-11)。活性成分可与抗蛇毒血清或直接抗毒液成分的抗体片段结合，还可任选联合施用machr拮抗剂(如阿托品、甘罗溴铵)，用于减缓不希望出现的achel的毒蕈碱影响。
单价和多价抗毒血清可用于治疗蛇、蜘蛛、壁虱(acarids)、昆虫、蝎子和海洋动物引起的毒液蛰入。具有代表性的抗蛇毒血清和抗蛇毒血清生产方法是本领域技术人员公知的。参见专利no5,340,923。例如，(btginternational,pic.)是响尾蛇多价免疫fab(ovine)抗蛇毒血清，用于治疗北美响尾毒液蛰入的患者。术语响尾蛇用于描述毒蛇中响尾蛇亚科(以前称为响尾蛇科)，包括响尾蛇、铜头蛇和棉口蛇/水蝮蛇。建议早期采用(蛇咬伤6小时以内)，防止临床恶化和发生全身凝血功能异常。早期使用基于伐瑞拉迪的疗法，将降低对抗蛇毒血清的需求，当不需要抗蛇毒血清时，减少并发症和降低费用，当两种治疗方案都采用时，将改善结果。在一些情况下，基于伐瑞拉迪的疗法将完全取代对抗蛇毒血清的需求(例如，许多蝰蛇咬伤和珊瑚蛇咬伤)。更重要的是，基于伐瑞拉迪的疗法与特异性、副特异性或非特异性抗蛇毒血清联合使用将改善所有抗蛇毒血清制剂的疗效，不管它们是联合施用或联合配制。
本申请下文列出了特异性和副特异性抗蛇毒血清和基于抗蛇毒血清的组合物，其可与小分子pla2抑制剂(如1h-吲哚-3-乙醛酰胺，如伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪)联合使用，用于治疗脊椎动物和非脊椎动物毒液蛰入。
抗蛇毒血清实例
在抗蛇毒血清之前施用伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪，或伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪与抗毒血清联合施用或联合配制，可以改善抗蛇毒血清制剂的疗效，从而改善结果，这些抗蛇毒血清的非限制性名单如下。
蝮蛇抗蛇毒血清，pfizerinc公司生产。蝮蛇(响尾蛇科)抗蛇毒血清是一种多价马源抗血清产品，是从采用东部菱背响尾蛇(东部钻石响尾蛇)、西部菱斑响尾蛇(西部钻石响尾蛇)、南美响尾蛇(热带响尾蛇，响尾蛇)和矛头蝮蛇蛇毒免疫的健康马身上提取血液得到的精制浓缩血清球蛋白制剂。蝮蛇抗蛇毒血清用于治疗响尾蛇(蝮蛇)引起的毒液蛰入；
anavip蛇毒(anavipsnakevenom)，institutobioclonsadecv,rarediseasetherapeuticsinc公司生产。anavip包含马源响尾蛇科f(ab')2免疫球蛋白片段作为活性成分；
抗蛇毒血清(anti-snakevenomserumsnakevenom)，印度药物&制药有限公司(indiandrugs&pharmaceuticalsltd)生产。这种抗蛇毒血清包含多价马源蛇毒免疫球蛋白，用于治疗蛇咬伤；
抗蝰蛇血清(anti-vipersserum)vacsera蛇毒中毒，生物制品和疫苗控股公司(theholdingcompanyforbiologicalproducts&vaccines)(vacsera)公司生产。抗蝰蛇血清(anti-vipersserum)包含多价蝰蛇毒抗血清。它用于治疗蝰蛇咬伤。
抗蛇毒血清(antivenom)，pfizerinc生产。抗蛇毒血清(金黄珊瑚蛇)是从采用东部珊瑚蛇(金黄珊瑚蛇)蛇毒免疫的健康马身上提取血液得到的精制浓缩冻干血清球蛋白制剂；
antiviperinobirmex蛇毒中毒(antiviperinobirmexsnakevenompoisoning)，laboratoriesdebiologicosyreactivosdemexicosadecv(birmex)生产。antiviperino包含极北蝰蛇毒免疫球蛋白；
asvs-非洲蛇毒中毒(asvs-africasnakevenompoisoning)，bharat血清和疫苗有限公司(bharatserumsandvaccineslimited)生产，是一种多价抗蛇毒血清。它是用不同蛇咬伤超免疫健康马，提取其血液得到的血清球蛋白精制浓缩制剂。asvs-africa用于治疗毒蛇咬伤。
asvs–亚洲蛇毒中毒(asvs-asiasnakevenompoisoning)，bharat血清和疫苗有限公司(bharatserumsandvaccineslimited)生产，球蛋白，asvs-asia是一种多价抗蛇毒素。它是用不同蛇咬伤超免疫健康马，提取其血液得到的血清球蛋白精制浓缩制剂。
黑蛇抗蛇毒血清cslltd蛇毒中毒(blacksnakeantivenomcslltdsnakevenompoisoning),csl有限公司生产。黑蛇抗蛇毒血清是用王棕蛇(棕伊澳蛇)，亦称为伊澳蛇的蛇毒免疫马，从该马身上提取血浆制备的，然后，收集中和这种毒的这部分马的血液。王棕蛇蛇毒包含神经毒素、肌肉毒素和抗凝血毒素。
bothrofav蛇毒中毒(bothrofavsnakevenompoisoning),赛诺菲公司生产，抗体、球蛋白、免疫球蛋白、免疫蛋白、血清球蛋白，bothrofav是包含f(ab')2-抗血清，用于治疗马提尼克矛头蝮毒液蛰入；
棕色蟒蛇抗蛇毒血清蛇毒中毒(brownsnakeantivenomsnakevenompoisoning)，csl有限公司生产，抗体、抗毒素、生物因子、球蛋白、免疫蛋白、肽、血清球蛋白，棕色蟒蛇抗蛇毒血清采用棕色蟒蛇(拟眼镜蛇)蛇毒免疫马的血浆制备。棕色蟒蛇抗蛇毒血清用于治疗被拟眼镜蛇属咬伤后出现全身性中毒的患者。拟眼镜蛇包括东部棕蛇、杜吉拟眼镜蛇和西部拟眼镜蛇(gwardar)；
coralmyn蛇毒中毒(coralmynsnakevenompoisoning)，institutobioclonsadeoj公司生产，毒素，生物，coralmyn是一种多价抗珊瑚蛇治疗片段f(ab')2及免疫球蛋白g(igg)的fab；
血液球蛋白(serumglobulins)，(btg)包含绵羊响尾蛇科免疫球蛋白片段作为活性成分。响尾蛇科多价免疫fab(绵羊)是一种免疫球蛋白g(igg)的毒液-特异性fab片段，它是通过与蛇毒毒素结合及中和蛇毒毒素，并促进其远离靶向组织重新分布及从体内清除而发挥作用的。
南棘蛇抗蛇毒血清(deathadderantivenom)，cslltd蛇毒中毒(cslltdsnakevenompoisoning),csl有限公司生产，这种抗毒血清是从用南棘蛇(aconthophisantarcticus)蛇毒免疫的马的血浆制备的。南棘蛇抗毒血清用于治疗被南棘蛇咬伤后出现全身性中毒的患者。
fav-afrique，赛诺菲，球蛋白，fav-afrique是多价抗蛇毒血清，是用非洲眼镜蛇科和蝰蛇科最危险的10种蛇蛇毒免疫马得到的。仅保留和纯化f(ab')2片段。该血清能够减少循环毒液的量，从而降低其毒性。favirept(sanofipasteur)是一种多价马f(ab')2抗毒血清，用于中东各种蛇：咝蝰属、锯鳞蝰属、眼镜蛇属、角蝰属和钝鼻蝰属咬伤；
冻干habu抗蛇毒血清，kaketsuken制造。冻干habu抗蛇毒血清包含马源黄绿烙铁头免疫球蛋白。冻干mamushi抗蛇毒血清(kaketsuken)是马源抗蛇毒血清；
多价蛇抗蛇毒血清(polyvalentsnakeantivenom)，csl有限公司生产，该多价抗毒血清包含下述蛇的蛇毒抗体：王棕蛇(棕伊澳蛇)、虎蛇(澳洲虎蛇)、棕蛇(拟眼镜蛇)、死亡蝰蛇(南棘蛇)、太攀蛇属(太攀蛇oxyuranusscutellatus)。这种抗蛇毒血清采用这些蛇的蛇毒免疫马，提取马的血浆制备。它用于治疗巴布亚新几内亚及除维多利亚州和塔斯马尼亚州以外澳大利亚所有州的患者；
海蛇抗蛇毒血清(csl有限公司生产)海蛇抗蛇毒血清采用海蛇(钩鼻海蛇)蛇毒免疫的马的血浆制备。海蛇抗蛇毒血清用于治疗被海蛇咬伤后出现全身性中毒的患者；
多价抗蛇毒血清(polyvalentantisnakevenomserum)，seruminstituteofindia有限公司生产，其是一种多价抗-蛇毒血清，是由印度最常见的四种毒蛇的毒液超免疫马制备的；
biologicale，biologicale.有限公司制备，是一种多价制剂，是由马超级免疫血清得到的胃蛋白酶消化的精制浓缩制剂。它用于中和锯鳞蝰、眼镜蛇、印度环蛇和拉塞尔蝰蛇(圆斑蝰)的蛇毒。
vinsbioproducts有限公司生产抗血清，包含蛇毒免疫球蛋白(马)作为活性成分。snakevenomvaccine(蛇毒疫苗)，生物工业联合公司(unitedcompanyforbiologicalindustriesltd)(bioegypt)生产，用作治疗蛇咬伤的预防性疫苗；
csl有限公司生产的太攀蛇抗蛇毒血清是采用太攀蛇属(太攀蛇)的毒液免疫马的血浆制备的太攀蛇抗蛇毒血清和类似制剂；
csl有限公司生产的虎蛇抗蛇毒血清是采用虎蛇(澳洲虎蛇)的毒液免疫马的血浆制备的。虎蛇抗蛇毒血清用于治疗被虎蛇、铜头蛇或黑蛇咬伤后出现全身性中毒的患者。
viperatab包含极北蝰蛇毒免疫球蛋白作为活性成分。它是一种多价免疫抗原结合片段(绵羊)，包括结合和中和含蛋白酶、脂肪酶和心脏毒素的极北蝰蛇毒成分的特异性抗体片段，促进其在远离靶向组织重新分布，及随后从体内清除。
viperfav(赛诺菲)是一种多价马f(ab')2免疫球蛋白抗蛇毒血清，用于防止欧洲蛇(蝰蛇属)中毒；
institutobioclonsadecv生产的抗蛇毒血清(kamada)antivipmyn包含蛇毒免疫球蛋白片段(马)作为活性成分。它是一种免疫球蛋白g(igg)超免疫球蛋白的多价抗蛇治疗片段f(ab')2。
伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪及其组合增强疗效的特异性和副特异性无脊椎动物抗蛇毒血清名单：
箱形水母抗蛇毒血清，csl有限公司公司生产，箱形水母抗蛇毒血清是采用箱形水母(澳大利亚箱形水母)毒液免疫绵羊血浆制备的。analatro(institutobioclonsadecvandrarediseasetherapeutics公司生产)包含寇蛛毒液f(ab')2免疫球蛋白片段作为活性成分；
institutobioclonsadecvandrarediseasetherapeuticsinc生产的aracmynplus包含多价蜘蛛毒液f(ab')2免疫球蛋白片段作为活性成分；
reclusmyninstitutobioclonsadecv：reclusmyn包含免疫f(ab')2抗蛇毒血清。
红背蜘蛛抗蛇毒血清中毒(redbackspiderantivenompoisoning),csl有限公司生产。红背蜘蛛抗毒血清(redbackspiderantivenom)是从用雌性红背蜘蛛(澳洲红背蜘蛛)毒液免疫的马血浆制备的；
石鱼抗蛇毒血清(csl有限公司)是由石鱼(synanceiatrachynis)免疫马血浆制备的；
anascorpinstitutobioclonsadecv,accredohealthgroupinc,rarediseasetherapeuticsinc。anascorp包含刺尾蝎免疫球蛋白片段(马)；
抗蝎子血清vacsera蝎子(anti-scorpionserumvacserascorpion).抗蝎子血清是纯化的多价蝎子抗血清；
scorpifavscorpion，scorpifav是多价马f(ab')2抗血清。scorpifav用于防止北非和中东蝎中毒(肥尾蝎、金蝎、钳蝎)；
蝎毒抗血清(scorpionvenomantiserumscorpion),vinsbioproducts有限公司生产。蝎毒抗血清包含蝎毒免疫球蛋白片段(马)作为活性成分。蝎毒抗血清用于治疗蝎子咬伤；
蝎毒疫苗(scorpionvenomvaccinescorpion),生物工业联合有限公司(unitedcompanyforbiologicalindustriesltd)(bioegypt)。蝎毒疫苗作为蝎子咬伤的预防疫苗；
蝎毒抗毒素(scorpionvenomsantitoxin)，生物工业联合有限公司(unitedcompanyforbiologicalindustriesltd)(bioegypt)生产。蝎毒抗毒素包含能够中和毒素的抗蝎毒免疫球蛋白；
皮疹止痒水(stopitchskinrash),valeantpharmaceuticalsaustralasiapty有限公司生产。止痒水中的活性成分是木瓜蛋白酶，一种从木瓜(番木瓜)未成熟果实中提取的酶。木瓜蛋白酶以两种方式作用：抑制感觉传递和中和昆虫毒液，迅速缓和及减轻与昆虫咬伤有关的疼痛、痒、肿胀及轻微皮肤刺激；
csl壁虱抗毒血清(csltickantivenom)，壁虱抗毒血清有助于中和全环硬蜱毒液的效果。所述抗毒血清是壁虱免疫狗得到的。壁虱抗毒血清用于治疗因壁虱咬伤导致麻痹症状的患者。
vi.金属蛋白酶抑制剂
一方面，pla2抑制剂(例如，1h-吲哚-3-乙醛酰胺，如伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪)的联合疗法是用于与对蛇毒金属蛋白酶具有抑制活性的小分子联合使用。
出乎意料的是，包含和不包含某些金属蛋白酶抑制剂的伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪组合可能证明对治疗日本地区大多数毒蛇、美国许多蝰蛇(如果并非全部)和世界各地其它蛇的咬伤都有效。此外，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪与新斯的明或吡啶斯的明一起或不与新斯的明或吡啶斯的明一起使用及任选与阿托品或甘罗溴铵联合施用将有效地治疗美国每种珊瑚蛇咬伤，这是一个具有深远治疗意义的发现，因为它能够立即治疗威胁生命的症状，特别是毒液蛰入时受害者可以自己施用治疗。
在一些实施例中，mp抑制剂是实例12(“西部菱斑响尾蛇蛇毒mp(代表新世界毒蛇)有用抑制剂的hts发现”)中描述的抑制剂或实例13(“实例13锯鳞蝰蛇毒mp(代表旧世界毒蛇)有用抑制剂的hts发现”)中描述的抑制剂。
vii.丝氨酸蛋白酶抑制剂
一方面，pla2抑制剂(例如，1h-吲哚-3-乙醛酰胺，如伐瑞拉迪与/或甲基伐瑞拉迪)的联合疗法是与对蛇毒丝氨酸蛋白酶具有抑制活性的小分子联合使用。
viii.其它制剂
a.乙酰胆碱脂酶抑制剂
乙酰胆碱(ach)是神经细胞细胞质中及非神经组织(如头部和颈部粘膜表面)中合成的神经递质。当动作电位到达神经末梢时，囊泡释放乙酰胆碱到突触。一旦进入突触内，乙酰胆碱扩散通过突触间隙，并与突触后乙酰胆碱受体结合。乙酰胆碱与其受体的结合触发突触后细胞的去极化。随后，当乙酰胆碱被乙酰胆碱脂酶水解为乙酸和胆碱时，受体介导的反应被终止。乙酰胆碱脂酶(ache；ec3.1.1.7)是水解乙酰胆碱的丝氨酸蛋白酶。乙酰胆碱脂酶活性的分析方法是人们所熟悉的(参见例如，ellman等；biochem.pharmacol.,7,88-95,1961)。
乙酰胆碱与两种主要类型的受体结合：烟碱型乙酰胆碱受体(nachr)和毒蕈碱型乙酰胆碱受体(machr)。烟碱型乙酰胆碱受体通常存在于某些神经元的质膜内和神经肌肉接点(控制骨骼肌肉)的突触后的一侧。毒蕈碱型乙酰胆碱受体通常存在于涉及副交感神经系统的器官内。神经毒素的毒害效应，或非去极化神经肌肉阻滞剂(nnba)的残留效应可通过抑制神经肌肉接点处的乙酰胆碱脂酶而消除。乙酰胆碱脂酶通过将ach水解为乙酸和胆碱而终止nachr反应。抑制乙酰胆碱脂酶的活性，防止ach水解，提高神经肌肉接点内有效ach的浓度，从而改善α-神经毒素和其它神经毒素(如β-神经毒素)的效应或nnba的残留效应，这是可能的。
有用的乙酰胆碱脂酶抑制剂包括但不限于安贝氯铵；demarcarium；多奈哌齐；腾喜龙；加兰他敏；石杉碱a；拉多替吉(ladostigil)；山莴苣苦素；新斯的明；毒扁豆碱；吡啶斯的明；卡巴拉汀；他克林；碘磷灵；和恩其明(ungeremine)。
有用的machr拮抗剂包括竞争性拮抗剂。machr拮抗剂可以是可逆转的竞争性拮抗剂，优选不超出血脑屏障。优选machr拮抗剂对machr的选择性优于nachr，半衰期4-6小时或更低。有用的machr激动剂包括但不限于甘罗溴铵和阿托品，及优选的乙酰胆碱脂酶抑制剂–machr拮抗剂联合治疗组合包括新斯的明和甘罗溴铵或阿托品。可与金属蛋白酶抑制剂、pla2抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂联合施用的辅助治疗的示例组合包括碘磷灵、肟-衍生ache修复剂(如氯解磷定)及machr抑制剂(如阿托品或比哌立登)。在一个实施例中，machr拮抗剂选自由阿托品、苯扎托品、甘罗溴铵、异丙托铵、美贝维林、奥昔布宁、哌仑西平、莨菪碱、比哌立登、噻托溴铵和托品酰胺组成的组。
b.nmda受体拮抗剂
“nmda受体拮抗剂”包括但不限于地佐环平(mk801)、艾芬地尔、r025-6981、tcn-201、克他命、氟乙酰胺、非尔氨酯、美金刚、右美沙芬、依利罗地、赛福太、芋螺睡眠肽-g、-r、aptigamel(cns1102)、强啡肽a(1-13)、dqp1105和nvp-aam077。
c.抗生素
特别有用的毒液抑制剂抗生素治疗与蛇咬伤有关的细菌并作为毒液中和剂。此类抗生素的实例包括头孢菌素，如头孢克肟和四环素，如强力霉素和地美环素。
d.分布增强剂
除上述组分外，本发明的组合物和方法可通过采用有效剂量的促进生物分布的制剂，如利多卡因与/或布比卡因得到增强，所述制剂可以包含在本发明的组合物中，用于增强活性成分在组合物注入组织中的分布，同时松驰平滑肌和减缓毒液扩散。
e.扩散因子抑制剂
ix给药剂量和途径
一般说来，根据标准药物实践，根据受试者的体重和状况来确定本文所述药物组合物和治疗化合物的给药剂量和给药途径。采用的剂量水平范围广，熟悉本领域的人员可以容易确定。一般说来，采用的剂量是毫克至克范围。
施用的剂型将根据人们熟悉的因素而变化，如特定制剂的药效特征、及它们的给药模式和途径、施用者的年龄、健康状况和体重；症状的性质和程度、同步治疗的种类、治疗频次及期望效果。通常，活性化合物的每日剂量可以是大约0.1-500mg/kg体重。在每天1-6次的分次剂量中，通常采用0.5-50，优选1-25mg/kg/天，或者采用持续释放形式，都是有效的，可以获得期望的结果。
根据患者的状态，在蛇咬伤或无脊椎动物咬伤或螫伤诱导疾病的症状或体征开始之前，施用更低剂量范围或更高剂量范围(例如，在医院里根据spla2水平升高临床确定或可能确定)，而当表明需要采用主动干预来应对spla2水平升高时，可以施用更高剂量。
一般说来，将spla2抑制剂施用于动物，从而接受治疗有效剂量。按照惯例，通过逐渐增加活性化合物的施用剂量，并观察患者的反应，例如，麻痹、组织损伤减少或spla2活性水平上升得到抑制，或与蛇咬伤或无脊椎动物咬伤或螫伤有关的其它症状或体征减少，确定患者的治疗有效剂量。
一般说来，化合物应以动物spla2或其它抑制剂的血药浓度达到0.01-5000ng/ml，优选1-1000ng/ml的方式和剂量施用。
由合格的医生(主治医师)决定，治疗方案可以持续数小时至1天至几周至数月或数年。为了患者方便性和耐受性起见，优选口服与/或静脉输注。采用口服时，每天1至4次，每次大约0.01-100mg/kg体重，优选剂量是大约0.1mg/kg至大约10mg/kg。
x.剂型、药物制剂和给药模式
活性化合物(特别包括1-h-吲哚-3-乙醛酰胺化合物伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪)的使用浓度可以是制剂重量的0.01-99.9％，在一些情况下，浓度是制剂重量的0.001-99.9％。优选药剂剂型是单位剂型。单位剂型可以是胶囊或片剂本身，或者是适当数量的这些剂型。根据涉及的特定治疗，单位剂量组合物中活性化合物的含量可以变化或调整，是大约0.1至大约1000mg或更多。
适合内部给药的组合物(剂型)每单位包含大约1mg至大约1000mg活性化合物。在这些药物组合物中，活性化合物的含量通常是组合物总重量的大约0.5-95重量％。有用的药物组合物及其各成分比例的示例如下：
胶囊：胶囊可以通过在每个两半式硬胶囊内填充50mg粉末活性化合物、175mg乳糖、24mg滑石粉和6mg硬脂酸镁制备。
软胶囊：在大豆油中配制活性化合物的混合物，并通过容积式泵注入到明胶内，形成含50-500mg活性化合物的软胶囊。在石油醚中洗涤胶囊并干燥。
片剂：片剂可以采用传统方法制备，从而剂量单位中含50mg活性化合物、6mg硬脂酸镁、70mg微晶纤维素、11mg玉米淀粉和225mg乳糖。为了提高口感或延迟吸收，还可以采用合适的包衣。
悬浮液：配制口服含水悬浮液，从而每5ml悬浮液中包含25mg细分活性化合物、200mg羧甲基纤维素钠、5mg苯甲酸钠、1.0g山梨醇溶液、u.s.p.和0.025mg香草醛。
注射液：适合注射的肠胃外组合物是通过在10％体积丙二醇和水中搅拌1.5重量％活性化合物而制备。该溶液采用常用方法杀菌。其它注射液通过将粉末，特别是冻干粉溶解在医学上可接受ph值的盐水溶液中而制备。
鼻腔喷雾剂：制备水溶液，从而每1ml水溶液中包含10mg活性化合物、1.8mg对羟基苯甲酸甲酯、0.2mg对羟基苯甲酸丙酯和10mg甲基纤维素。将溶液分配到1-5ml小瓶内。
气雾剂能够分散为大约0.5微米至大约10微米粒径，内含足够多的spla2抑制剂，使气道表面抑制剂的浓度是大约10-10至10-2mol/l。
若要快速减轻患者痛苦，如分析表明spla2水平升高或首次器官衰竭后不超过24小时，通常优选采用肠胃外给药(特别是，静脉内给药)。肠胃外给药的剂量0.001-200mg/kg/天，全天连续给药或间歇给药。肠胃外给药时，化合物可以在生理盐水媒介(如0.9％-生理盐水、0.45％生理盐水等)、葡萄糖媒介(例如，5％葡萄糖水溶液)或生理盐水和葡萄糖媒介组合(0.9％生理盐水溶于5％葡萄糖)中施用，可以包括或不包括4.2％-8.4％碳酸氢钠，以使肠胃外给药溶液的ph值升高到>8.0。
肠胃外给药还优选采用对本发明实践有用的化合物的冻干组合物。
本发明的组合物可以向患者单独施用，以单一剂型组合施用或不止一种组合物顺序施用(按任何顺序)。本发明的剂型可包括干燥且现场可复水的固体组合物、注射或口服溶液，或组合物可以包含在混合物中，或作为单独组分配制，在怀疑或确认中毒毒液蛰入按顺序给药。在某些实施例中，所述组合物的剂型是肠胃外剂型，可以通过针头或喷射(如肌肉内、皮下)或静脉输液注入，即时释药或持续释药。其它剂型适合通过微注射或贴片(透皮给药)单独给药或通过加压固定夹板给药，鼻内给药，以丸剂、酏剂或溶液形式口服，含服，舌下给药，以凝胶形式给药，雾化给药，包含具有或不具有其它性质(如抗菌活性和止痛活性)的药物活性或惰性载体，任选在包含微脂囊、微胶粒、聚合物、金属和脂质纳米粒子的媒介中给药，及包含渗透剂以增强组织传输。
剂量和试验产品–提供伐瑞拉迪(ly315920)或甲基伐瑞拉迪。施用：作为冻干粉溶于盐水中，并根据需要和注射加入适当的增溶剂。每个小瓶可以包含0.1、1、10、50、100、250、500、750、1000、2000、5000至50,000mg伐瑞拉迪，从包装中按照适当比例计量，加入到溶液中。复水后，所有伐瑞拉迪剂型的目标是血浆中伐瑞拉迪的浓度是大约1-2500ng/ml，优选大约1000ng/ml。在本发明优选的方面，为了实现最好疗效，伐瑞拉迪血清浓度达到500ng/ml–大约1500ng/ml，优选大约750ng/ml至大约1250ng/ml，最优选大约1000ng/ml(1μg/ml)。其它pla2抑制剂的浓度将有所不同，大多数比伐瑞拉迪高很多，因为它们的活性通常比伐瑞拉迪低。在一些实施例中，金属蛋白酶抑制剂和/或丝氨酸蛋白酶抑制剂在血清中的浓度是大约0.1ng/ml至大约500μg/ml。
给药模式、剂量和给药途径预期可以根据护理阶段而变化。为了进行说明，人或非人类患者被蛇咬伤，并肌肉内注射药学上有效剂量的解毒剂组合物，并以适当的设施接受医学护理，患者接受含有或不含有解毒剂的抗蛇毒血清治疗，或接受含有或不含有抗蛇毒血清的解毒剂治疗，给药形式是静脉内注射、丸剂、海绵、重复注射、鼻内喷雾或其它喷雾给药，从而维持足够高的血液浓度，以继续抑制毒液，直到患者稳定或确定不需要接受任何其它治疗。
在一些实施例中，本文描述的治疗活性剂以膏状或凝胶状形式局部施用于咬伤或螫伤部位，用于中和毒液。在一些实施例中，第一治疗剂直接施用于咬伤部位或损伤组织处或施用于它们附近，而第二治疗剂经由另一途径联合施用(任选作为辅助治疗，与传统抗蛇毒血清联合施用)。在一些实施例中，治疗活性剂代替抗毒血清施用于非-致命或非-四肢威胁伤害(如隔离面神经瘫痪或颅神经麻痹)处。在一些实施例中，治疗活性剂通过经皮贴片施用或通过加压固定装置一起施用，通过减少淋巴流动，减慢毒液的扩散。
在一些实施例中，本文所述的抑制剂与另一种分子(如生物相容性的与/或可生物降解的纳米颗粒)结合。例如，抑制剂可与另一种消除复合毒液血毒性影响的药物联合使用，并通过单独阻止纤维蛋白或其它凝血因子或它们的组合(如混合物或结合物)消耗，防止凝血障碍。在一些实施例中，解毒剂与抑制磷脂酶a2的中药提取物或其它化合物联合使用，防止神经肌肉接点处突触前神经元的凝血障碍和降解。在一些实施例中，组合解毒剂与渗透增强剂联合。
本发明方法和药物组合物中使用的治疗活性剂可采用各种方法给药。示例性给药途径包括直接针头注射、喷射或其它推进注射、静脉内给药，直接施用于被咬部位、眼睛暴露处和受影响组织(局部、经皮)、吸入、鼻腔内给药及舌下、直肠、阴道、口服或眼内给药。配制此类剂型的方法是公知的，或是本领域技术人员显而易见的；例如，参见《雷明顿药物科学》17版，mackpub.co.,1985)。施用的组合物将包含药物学有效剂量的选择化合物，用于生物系统治疗，包括本发明的患者或受试者。
在一个实施例中，本发明的做法涉及使用包含spla2抑制剂作为活性成分和有效剂量增溶剂作为螯合剂的药物组合物，例如，所述增溶剂优选至少一种选自柠檬酸、乙二胺四乙酸(例如也具有金属蛋白酶抑制特性的edta二钠)、多磷酸及其盐，更优选柠檬酸钠的化合物。多磷酸及其盐的实例有《日本食品添加剂标准(6版)》中描述的多聚磷酸钾和《日本食品添加剂标准(6版)》或《日本化妆品成分标准(2版)》中描述的多聚磷酸钠。柠檬酸钠可以是无水柠檬酸三钠、二水柠檬酸三钠及五水柠檬酸三钠，但是，最方便和最优选的是二水柠檬酸三钠形式(molwt.294.10)。
增溶剂的用量随增溶剂的种类及所含抑制剂化合物的浓度而变化，例如，可以是抑制剂化合物用量的大约1％至大约400％(w/w)，优选1至200％(w/w)，更优选1至100％(w/w)。对于使用柠檬酸钠的药物组合物来说，增溶剂的重量是抑制剂化合物用量的10％-60％(w/w)，最优选是25％-50％(w/w)。
优选药物组合物还包含任何有效剂量的稳定剂。稳定剂是至少一种药学上可接受的化合物，选自固体糖和糖-醇，更优选至少一种选自甘露醇、木糖醇、山梨糖、葡萄糖、果糖、乳糖和麦芽糖的化合物。甘露醇是最优选的稳定剂成分。
稳定剂的用量随稳定剂的种类和spla2和/或其它抑制剂的浓度而变化，可以是抑制剂化合物用量的40％至500％(w/w)，优选50％至300％(w/w)，更优选50至200％(w/w)，最优选100％至200％(w/w)。
有时候，泊洛沙姆是非离子三嵌段共聚物，由中间聚氧乙烯(聚(环氧丙烷))的疏水链及两边的聚氧乙烯(聚(环氧乙烷))亲水链组成。泊洛沙姆的商品名称有synperonics、pluronics和kolliphor等。由于聚合物嵌段的长度可以定制，存在性质上略有不同的许多不同泊洛沙姆。这些共聚物的通用名称是“泊洛沙姆”，通常以字母“p”(代表泊)后紧跟三个数字命名：前两位数字x100得到的是核心聚氧丙烯的近似分子量，最后一位数字x10是聚氧乙烯的百分含量(例如，p407＝聚氧丙烯分子量4000g/mol，聚氧乙烯含量70％的泊洛沙姆)。此外，它们可用于提高疏水性油类物质的水中溶解度，或提高具有不同疏水性的两种物质的混溶性。因此，这些聚合物通常用于工业应用、化妆品和药物。它们还已经被评估用于各种药物输送应用，可用于输送伐瑞拉迪类治疗剂，提供与预防和治疗毒液凝血和细胞毒性影响有关的某种治疗效果(如泊洛沙姆188及其提纯衍生物通常作为输液)。泊洛沙姆可通过任何给药途径：口服、眼内、局部、直肠给药或静脉内给药，提高小分子抗-蛇毒治疗的多功能性(例如，伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪及其与mp和sp抑制剂、抗蛇毒血清本身的组合及它们药学上可接受的组合)，并且本身也具有治疗效果。
在不脱离本发明的目的和范围的情况下，可以任选地将其它药学上可接受的添加剂加入到用于实施本发明的制剂中。其中本发明的溶液配制用于注射，可在溶液中加入等渗剂、安慰剂或其它添加剂。
除活性成分、增溶剂和稳定剂之外，优选上述药物组合物不含盐。
ix.组合物
a.组合物
一种或多种组合物，包括至少一种选自由金属蛋白酶抑制剂、pla2抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂组成的组的抑制剂化合物及任选一种辅助治疗剂，所述组合物可以联合施用，如上文所述，用于治疗有毒节肢动物(如木蝎属动物(木蝎)、芋螺和热带水母)螫伤后神经毒素引发的呼吸衰竭或降低其可能性。在优选的方面，上述组合物包括至少一种pla2抑制剂，优选伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，它们可在不使用丝氨酸蛋白酶抑制剂的情况下使用。
i)冻干组合物
优选前面部分描述的药物组合物是冻干的。更优选地，使用可用于实施本发明的化合物的崩解温度特性，通过退火步骤制备冻干组合物。
例如，冻干组合物包含组合物中活性化合物用量的大约1至大约200％(w/w)或更高的增溶剂。增溶剂的比例可根据采用的活性化合物和使用的增溶剂而变化。当增溶剂是二钠edta(或其酸或其它盐)时，优选其用量是活性化合物用量的大约1％至大约15％(w/w)。熟悉本领域的技术人员可以容易确定稳定剂的种类和比例。甘露醇是本发明冻干组合物最常用的稳定剂成分。
冻干药物制剂可以在药学上可接受的载体(如无菌水)中溶解，无菌水任选含盐水的无菌水和/或含糖无菌水。例如，用于静脉内或肌肉内或皮下注射时，本发明的组合物可溶于4％葡萄糖/0.5％柠檬酸钠水溶液中，浓度达到2mg/ml。
用于实现本发明的冻干组合物的制备方法：
用于实现本发明的冻干组合物指的是采用以下方法制备的制剂：将包含spla2抑制剂化合物(如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)的溶液冷冻干燥，任选进行加热处理过程，并在高真空条件下干燥，使水升华。这种冻干制剂包括如上文所述注射用冻干制剂。冻干制剂可采用传统方法制备，包括托盘冻干、喷雾冻干和小瓶冻干方法。小瓶冻干对于制备本发明的多剂量单位有利。
为了采用本发明的方法制备活性化合物溶液，将活性化合物、增溶剂和溶剂混合，并搅拌，直到混合物变得透明。溶剂优选是如《日本药典》所述含水溶剂，如水、纯净水、注射用水、等渗氯化钠溶液或葡萄糖注射液，更优选无盐含水溶剂，如水、纯净水、注射用水或葡萄糖注射液。
或者，形成本发明组合物溶液的合适溶剂是任何注射液，如《美国药典(1995,isbn0195-7996)》中进一步给出的那些溶液，例如，“注射用无菌水”、“葡萄糖和氯化钠注射液”、“葡萄糖注射液”、“甘露醇注射液”或“甘露醇氯化钠注射液”。这些都是本领域公知的。
为了获得活性化合物的冻干制剂，例如，通过本发明的方法，首先，在冻干之前配制处理溶液。冻干之前的处理溶液是通过将活性化合物、增溶剂和溶剂(优选伐瑞拉迪、增溶剂、稳定剂和溶剂)混合并搅拌，直到混合物变得透明而制备的。对于向溶剂中加入各组分的顺序，最好是先溶解增溶剂和稳定剂，然后溶解活性化合物。所述溶剂优选是含水溶剂，如前面所述的溶剂及《日本药典》中所述的溶剂，更优选是无盐含水溶剂，如水、纯净水、注射用水或葡萄糖注射液。活性化合物冻干之前的处理溶液，例如，可能包含，例如，浓度大约0.5％至2％(w/w)的活性化合物。如果需要的话，冻干前的处理溶液可以进行过滤。例如，若为注射制剂，过滤包括冻干前处理溶液的灭菌过滤和/或超过滤，在冻干前清除处理溶液中的微生物或其它污染物质。
如果需要的话，冻干前的处理溶液可以进行分配过程。分配过程包括，例如，在小瓶冻干的情况下，在冻干前将适当体积的处理溶液分配到小瓶中的过程，考虑spla2抑制剂化合物的浓度，从而小瓶产品包含所需数量的spla2抑制剂化合物。
典型冻干过程如下：优选采用顺序加热和冷却过程制备冻干组合物。制备冻干组合物的过程包括以下顺序步骤：
(a)将包含spla2抑制剂(如伐瑞拉迪)、增溶剂和稳定剂的冻干组合物的各组分在含水溶剂中溶解；
(b)将步骤(a)中的处理溶液冷却到-33℃以下；
(c)将步骤(b)中的产品加热到-33℃以上；
(d)将步骤(c)中的处理溶液冷却到-33℃以下；
优选步骤(a)将下述组分在含水溶剂中溶解：spla2抑制剂和/或其它活性成分；增溶剂，选自柠檬酸、乙二胺四乙酸、多磷酸及它们的盐，增溶剂的用量是活性剂相当酸用量的1至100％(w/w)；稳定剂，选自甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、果糖、乳糖和麦芽糖，其用量是活性化合物相当用量的大约50至200％(w/w)。此外，步骤(b)、(c)、(d)和(e)中的每个步骤优选进行至少半小时，以及步骤(e)在低于133pa(毫托)负压条件下进行。冻干过程的优选参数是其中，例如，化合物(vb)通过冷却到-35至-45℃凝固。这种冷却步骤优选进行2至4小时。下文将此过程称为“一级冷冻过程”。如果需要的话，然后，将一级冷冻过程得到的冷冻溶液加热到-5℃至-25℃，优选-10℃至～20℃。这一加热步骤进行3小时以上，优选5至10小时。该过程被称为“加热处理过程”。
将加热处理过程得到的组合物重新冷冻，优选冷冻到大约-35℃至-45℃。该冷却步骤优选进行2至4小时以上。该过程被称为“重新冷冻过程”。
将通过一级冷冻过程、加热处理过程和重新冷冻过程得到的组合物在高真空度条件下干燥，按照本领域技术人员熟悉的方法将水升华。从而得到本发明的冻干制剂，如果需要的话，可以进行温度和真空度不同的两步干燥，以完全除去水。。下文将此过程称为“干燥过程”。如果采用两步干燥，这些过程称为“一级干燥”过程和“二级干燥”过程。冻干过程脱除原来存在的大多数水，但是，最终产品冻干组合物可能包含一些游离水。一般说来，水的含量可以是0.5％至5.0％重量百分数。更典型的情况是，水的含量是0.8％至2.0％。一旦制备好，冻干粉可用于配制盐水溶液，并配制用于针头注射或或无针推进(如喷雾注射器)注射。
吸入疗法也可以单独使用或作为其它给药途径的辅助手段。采用吸入疗法时，减轻毒液蛰入临床症状必须的剂量很容易确定和使用。
根据本发明的药物组合物通常包括传统药物载体或赋形剂，可能另外还包括其它药物制剂、载体、佐剂、添加剂等。优选所述组合物包含大约0.1％至大约95％、大约0.25％至大约85％、大约0.5％至大约75％、大约0.1％至大约10％的本发明化合物，其它组分基本上由合适的药物赋形剂组成。
在一些实施例中，本发明的药物制剂以液体、固体、半固体或冻干粉的形式(如配制为溶液和注射液)、即用或持续释放制剂、片剂、胶囊、粉剂、栓剂、霜剂、软膏、洗剂、喷雾剂、贴剂等给药，优选适合剂量精确简单给药的单位剂型。在治疗的即时阶段，为了使血清中活性成分的浓度快速增加，优选采用肠胃外剂型组合物(优选立即释放形式的肌肉内注射)。然后，为了在血清中维持有效浓度的活性成分，组合物可通过替代给药途径施用，从而维持剂量。
在一些实施例中，本发明的药物制剂采用水包油乳剂、微乳液或纳米乳液，油包水乳液、微乳液或纳米乳液，硅油包水乳液、微乳液或纳米乳液，液体，凝胶，油、膏，霜，洗剂，软膏，悬浮液，泡沫，喷雾或血清载体，悬浮液，含脂质体制剂，传递体，弹性(可变形)囊泡，醇质体，侵入体(invasome)或含渗透增强剂的囊泡，搽剂，或制剂可包含贴剂、绷带或封闭敷料组分，或其它通过皮肤或粘膜表面吸收的被动或主动系统。
在一些实施例中，本发明的药物组合物通过贴剂施用，所述贴剂包括含胶粘剂基质的活性组分，胶粘剂基质位于可渗透背层和可撕除薄膜层之间。参见美国专利申请文件nos.20140322284和20140335150。
肠胃外施用组合物
肠胃外(如静脉内、肌肉间、皮下或鞘内)给药的注射组合物通常将包含溶于合适的标准的静脉内溶液(如无菌生理盐水溶液)中的化合物。所述组合物还可以配制为水乳液中的悬浮液。组合物可以作为载入到注射器或注射装置中立即施用的最终组合物供应，或者，可作为冻干粉或其它粉末形式供应，在毒虫咬伤时临时与溶液(如盐水或其它溶液)混合，并施用。
注射制剂可皮下、皮内、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、颅内或输液施用。注射液的赋形剂包括但不限于缓冲液(如柠檬酸盐/柠檬酸)、酸化剂(如盐酸)、碱化剂(如氢氧化钠)、防腐剂(如苯酚)、共溶剂(如聚乙二醇400)、渗透压调节剂(如甘露醇)、稳定剂(如表面活性剂、抗氧剂、氨基酸)。活性成分可以采用单剂量或多剂量注射形式，如笔的形式施用。药物组合物可与施用装置一起供应，例如，与注射器、注射笔或自动注射器一起供应。这些装置可与药物组合物分开供应，或预装药物组合物。注射装置的实例包括肌肉内装置，如自动注射器-deypharma、自动注射器-meridianmedicaltechnologiescorp、自动注射器–kaleo,lnc，.皮下装置，如rasuvo-medac(皮下)、otrexup-antarespharmainc.,imitrexstatdose和statdose-glaxosmithkline,mini-jecttm-valeritas,inc.,-bectondickinson，及喷雾注射器，如vitajet3–bioject和penjet一penjet公司等。
液体组合物可通过将活性组分(大约0.5％至大约20％重量或更多)及任选药物佐剂溶解于或分散于载体中，例如，盐水、含水葡萄糖、甘油或乙醇中，形成溶液或悬浮液而制备。作为口服液体制剂使用时，组合物可以配制为溶液、悬浮液、乳液或糖浆；采用液体形式供应或适合在水中或生理盐水中水化的干燥形式供应。
ii)口服剂型
用于口服时，所述赋形剂包括药物级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、明胶、蔗糖、碳酸镁等。如果需要的话，所述组合物还可以包含少量无-毒辅助物质，如润湿剂、乳化剂或缓冲溶液等。
当组合物以用于口服给药的固体制剂形式使用时，制剂可以是片剂、粒剂、粉末、胶囊等。以片剂形式，组合物通常加入添加剂配制，如赋形剂(如糖类或纤维素)、粘结剂(如淀粉糊或甲基纤维素)、填料、崩解剂及药剂生产中通常使用的其它添加剂及配制缓释制剂使用的添加剂。
粘膜吸收增强剂
注射、雾化和鼻内制剂可以包含粘膜吸收增强剂，如dmso、柠檬酸、柠檬酸钠、丙二醇、甘油、l-抗坏血酸、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、苯扎氯铵、氢氧化钠、二甲基甲酰胺、乙醇、丙二醇、1,3-丁二醇、2-吡咯烷酮及它们的混合物。其它粘膜吸收增强剂是本领域公知的，包括美国专利申请文件nos.20070026079和20060003989及constantino等2008,bmcneuroscience9(suppl3):s6；sghirlanzoni等，"efficacyofintranasaladministrationofneostigmineinmyasthenicpatients."jneurol.239:165-9(1992)中描述的那些。眼用制剂是本领域公知的，可能包含盐水或磷酸盐缓冲盐水，任选包含防腐剂。
iii)鼻腔给药和装置
虽然优选口服和/或注射制剂，但是，本发明有用的替代制剂包括鼻用滴剂、鼻用喷雾剂、鼻用粉末、机械或电子产生气雾剂、鼻用凝胶或任何其它鼻内剂型。有用的鼻内给药装置包括但不限于吸入器和喷雾器。还可以使用mdi's、混合mdis/鼻用喷雾器或滴管及粘膜雾化装置及电子烟用装置。通过鼻腔粘膜的雾化吸收可以产生粒径大约2-10微米的活性成分液滴。参见mygind等，rhinology1978；16(2):79-88。可以采用accuspraynasalatomizertm、mucosalatomizationdevicetm、optinosetm和vianasaelectronicatomizertm。在其它实施例中，采用滴管或计量鼻用喷雾器。鼻内给药还可以采用棉塞、海绵、吹药器或泵。在雷明顿《药物科学与实践(19版)》中也提供了喷雾吸入药物用加压装置的信息，其通过引用并入本文，参见第95章“气雾剂”及第41章“药物吸收、作用和配置”。可以采用按计量剂量给药的装置。在一些实施例中，这些装置按药物的单位剂型给药。在一些实施例中，这些装置是一次性的。在一些实施例中，这些装置是可以重新装药的。任选给药系统可以是能够提供单次计量剂量或1-5次计量剂量的一次性装置。
抑制剂和辅助治疗剂的鼻内给药剂量可以是每剂100微克至10克，通常是0.1mg至100mg，经常是大约1至50mg每剂，经常是1.5至12mg每剂，抑制剂和辅助治疗剂可以同时施用(例如，同时从单台给药装置的两个室同时给药)或作为混合物施用。通过医学和药物学文献指导，优化剂量和给药间隔属于本领域技术人员的能力范畴。
在一个实施例中，本发明提供一种鼻用喷雾吸入器，包含气溶胶喷雾制剂，所述制剂包括选自金属蛋白酶抑制剂、磷脂酶a2(pla2)抑制剂及可能的丝氨酸蛋白酶抑制剂和药物学上可接受的分散剂的一种或多种组合物，其中所述装置经计量，通过形成包含一剂量的对治疗毒液蛰入有效的一种或多种组合物的喷雾以分散一定量的喷雾制剂。该吸入器可包括，例如，盛放有效剂量的一种或多种组合物的容器，分配组件(如本体和喷嘴)，及任选气源，如输送泵(可以是注射器)。参见美国专利申请文件no.20140364837。
共包装
一方面，提供一种治疗毒液蛰入的试剂盒。本发明的试剂盒包括pla2抑制剂以及mp抑制剂、sp抑制剂和抗蛇毒血清中的一种或多种。在试剂盒中，多种制剂可以盛放在独立但包装在一起的容器内。
实施例
在优选的方面，本发明采用有效剂量的pla2抑制剂(优选1h-吲哚-3-乙醛酰胺，特别是伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它们的混合物)作为单一制剂或制剂治疗遭受毒液蛰入患者。我们意外地发现，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪都显示有效的pla2抑制性，有时候还表现出金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶抑制性，可单独使用，或联合使用以期实现良好的毒液蛰入治疗效果。在替代实施例中，本发明另外还可以包括有效剂量的一种或多种其它制剂，包括一种或多种其它pla2抑制剂(正如本发明其它地方所述，使用时，通常是卡莫司特、加贝酯)、一种或多种乙酰胆碱脂酶抑制剂(例如，优选新斯的明或吡啶斯的明和/或阿托品或甘罗溴铵)、一种或多种金属蛋白酶抑制剂(如普啉司他、马马司他、伏立诺他或巴马司他)、一种或多种丝氨酸蛋白酶抑制剂(如萘莫司他、卡莫司他或加贝酯)、至少一种扩散因子抑制剂和至少一种nmda受体拮抗剂；此外，可包括有效剂量的利多卡因和/或布比卡因，以提高组合物施用区域的血液流动，同时减轻痛苦，增加制剂活性部位的生物分配。在某些优选实施例中，小分子抑制剂，如伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪与抗蛇毒血清联合使用，对毒虫咬伤具有令人吃惊的疗效。
本发明提供治疗方法、药物组合物、系统和试剂盒，它们使用至少一种活性成分，在某些情况下，至少两种活性成分，在其它一些情况下，不超过两种活性成分，所述活性成分选自由选择性分泌pla2抑制剂(spla2或pla2抑制剂，它们也可以作为有效的金属蛋白酶抑制剂)、金属蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、一种或多种乙酰胆碱脂酶抑制剂、nmda受体拮抗剂、l-氨基酸氧化酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂和扩散因子抑制剂组成的组，用于治疗遭受毒液蛰入的患者。初次给药可以是在毒液蛰入时，通常是在毒液蛰入(如被蛇或无脊椎动物咬伤)后几小时以内(1分钟至12小时)至不到大约1小时，有时候是不超过大约1至大约20分钟，有时候是大约1至大约10分钟。在其它实施例中，特别是一种或多种上述化合物(优选小分子)与抗蛇毒血清一起使用时，这些组合物可以在毒液蛰入几小时后，接受抗蛇毒血清治疗之前或之后，但优选之前，作为医院或其它患者护理设施蛇咬伤的一线治疗方法。
在一些实施例中，或此外，可以采用pla2ls的顺序给药。在优选的方面，本发明采用有效剂量的pla2抑制剂(优选1h-吲哚-3-乙醛酰胺，特别是伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它们的混合物)作为治疗遭受毒液蛰入的患者的单一制剂或制剂。
在一个优选的实施例中，至少一种制剂选自1h-吲哚-3-乙醛酰胺，特别是伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，任选卡莫司他(n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯或卡莫司特)和/或加贝酯(乙基-对[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯)；优选至少伐瑞拉迪，所述制剂与乙酰胆碱脂酶抑制剂(achl)(如新斯的明、腾喜龙或吡啶斯的明，它们优选与阿托品或甘罗溴铵联合使用)联合施用，提供一种特别有效的通用抗麻痹药，其显著的抗-血毒性活性是由伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪、卡莫司他和/或加贝酯赋予的。在一些实施例中，施用的组合物包含有效剂量的至少伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪，甲基伐瑞拉迪代谢为伐瑞拉迪，作为哺乳动物中的前体药物。
在另一个实施例中，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，任选与一种或多种其它pla2抑制剂组合，但优选至少伐瑞拉迪，与至少一种金属蛋白酶抑制剂(如普啉司他、马马司他或巴马司他，优选普啉司他)和/或至少一种乙酰胆碱脂酶抑制剂(achel)(如新斯的明和/或阿托品)联合施用。在其它一些优选实施例中，一种或多种金属蛋白酶抑制剂及一种或多种乙酰胆碱脂酶抑制剂与伐瑞拉迪与/或甲基伐瑞拉迪一起使用，降低遭受毒液蛰入的患者因出血、凝血或麻痹导致死亡或永久性虚弱的可能性。
令人十分意外的是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪单独使用抑制范围广泛的各种毒性成分的活性，表明它们中的任一种或两种对pla2在许多酶类和非酶类毒液成分的活性方面及宿主-介导的反应方面都具有调节作用，如果不直接抑制非-pla2蛇毒酶的话，宿主-介导的反应会促进非酶类组织破坏毒素进入宿主细胞。在此之前，科学文献中对这两种制剂没有这方面的描述。此外，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪具有消炎活性，减少血管渗透性和降低毒液扩散能力，而小分子治疗剂可以扩散到毒液沉积点。这种让人吃惊的有益效果组合(伐瑞拉迪及其前体药物甲基伐瑞拉迪直接抑制毒液)，使它们单独使用或与其它小分子治疗剂和/或抗蛇毒血清联合使用时，是蛇咬伤理想的多功能解毒剂候选方案。
值得注意的是，与抗蛇毒血清不同，本发明的组合物可以扩散或渗透通过毒液蛰入部位的神经系统组织、血块和/或死组织，从而在抗蛇毒血清效果降低或几乎无效的地方提供有效治疗。采用利多卡因和/或布比卡因对所述制剂有帮助，一旦施用，使所述制剂更快地到达活性部位，同时可能减轻咬伤部位的痛苦，消除任何肠胃外机制给药的痛苦，及用于普通镇痛。
本发明的治疗方法、药物组合物、系统和试剂盒不仅可用于治疗人类，而且可用于治疗本发明其它地方描述的动物，如家畜、马或宠物。
本发明提供治疗方法、药物组合物、系统和试剂盒，它们使用至少一种活性成分，在某些情况下，至少两种活性成分，在其它一些情况下，不超过两种活性成分，所述活性成分选自选择性分泌pla2抑制剂(pla2抑制剂也可以作为有效的金属蛋白酶抑制剂)、金属蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、一种或多种乙酰胆碱脂酶抑制剂、nmda受体拮抗剂、l-氨基酸氧化酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂和扩散因子抑制剂，用于治疗遭受毒液蛰入的受试者，优选在毒液蛰入，如蛇或无脊椎动物咬伤或螫伤时，通常在毒液蛰入后的几小时内至不超过大约1小时，不超过大约1至大约20分钟，更经常是大约1至大约10分钟内使用。在其它实施例中，特别是一种或多种上述化合物(优选小分子)与抗蛇毒血清一起使用时，这些组合物可以在毒液蛰入几小时后，例如，作为医院或其它患者护理设施的毒蛇咬伤一线治疗方法。
在一个优选的实施例中，至少一种制剂选自1h-吲哚-3-乙醛酰胺化合物，特别是伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，及任选sp抑制剂，如卡莫司他(n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯或卡莫司特)和/或加贝酯(乙基-对[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯)；优选至少伐瑞拉迪，与乙酰胆碱脂酶抑制剂(achl)(如新斯的明、腾喜龙或吡啶斯的明，它们优选与阿托品或甘罗溴铵联合使用)联合施用，提供一种特别有效的通用抗麻痹药，其显著的抗-血毒性活性是由伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪、卡莫司他和/或加贝酯赋予的。在某些实施例中，施用的组合物至少包含有效剂量的伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪，甲基伐瑞拉迪代谢为伐瑞拉迪，是哺乳动物中伐瑞拉迪的前体药物。
在另一个实施例中，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，任选与一种或多种其它pla2抑制剂组合，但优选至少伐瑞拉迪，与至少一种金属蛋白酶抑制剂(如普啉司他、马马司他或巴马司他，优选普啉司他)和/或至少一种乙酰胆碱脂酶抑制剂(achel)(如新斯的明和/或阿托品)联合施用。在其它一些优选实施例中，一种或多种金属蛋白酶抑制剂及一种或多种乙酰胆碱脂酶抑制剂与伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪一起使用，降低毒虫咬伤患者因出血、凝血或麻痹导致死亡或永久性虚弱的可能性。
令人十分意外的是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪单独使用抑制范围广泛的各种毒性成分的活性，表明它们中的任一种或两种对pla2在许多酶类和非酶类毒液成分的活性方面及宿主-介导的反应方面都具有调节作用，如果不直接抑制非-pla2蛇毒酶的话，宿主-介导的反应会促进非酶类组织破坏毒素进入宿主细胞。在此之前，科学文献中对这两种制剂没有这方面的描述。此外，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪具有消炎活性，减少血管渗透性和降低毒液扩散能力，而小分子治疗剂可以扩散到毒液沉积点。这种让人吃惊的有益效果组合(伐瑞拉迪及其前体药物甲基伐瑞拉迪直接抑制毒液)，使它们单独使用或与其它治疗剂和/或抗蛇毒血清一起使用时，是蛇咬伤理想的多功能解毒剂候选方案。
值得注意的是，与抗蛇毒血清不同，本发明的组合物可以扩散或渗透通过毒液蛰入部位的神经系统组织、血块和/或死组织，从而在抗蛇毒血清效果降低或几乎无效的地方提供有效治疗。包含利多卡因和/或布比卡因对所述制剂有帮助，一旦施用，使所述制剂更快地到达活性部位，同时可能减轻咬伤部位的痛苦，消除任何肠胃外机制给药的痛苦，及用于普通镇痛。
本发明的治疗方法、药物组合物、系统和试剂盒不仅可用于治疗人类，而且可用于治疗本发明其它地方描述的动物，如家畜或宠物。
在下述非限制性实例中进一步说明本发明。
实例1：体外实验
实例2：小分子筛选和剂量-响应实验
小分子筛选和剂量-响应实验在耶鲁大学分子发现中心进行。采用的仪器包括tecanevo(2)、tecanaquarius、matrixplatemateplus(2)、,matrixplatemate2x2液体传输机器人及titertekandthermo多分液体分配器(7)、perkinelmerenvision(3)和tecaninfinitem1000(2)酶标仪，灵敏地测定96-孔和384孔板中的吸光度、荧光、荧光偏振和发光。geincellanalyzer2200成像系统获取各板的多色荧光和透射光影像。筛选第一阶段采用的先行采集由发明人选择或从开展有关选定毒液的实验时可以利用的已知化合物库和天然产品库中选择，这些库包括：ncc、genplus、pharmakon、生物活性脂类库、蛋白酶抑制剂库、采购药品库和fda批准药品库。microsourcediscoverysystems的genplus(thenindscustomcollection)包含960种化合物。这种已知生物活性化合物的独特选择允许同时对市场上数百种药物和生化标准进行评价。pharmakon1600库(microsource)包括全球使用或临床试验研究的已知药物。fda-批准药品的enzo640化合物库收集了生物活性、安全性和生物利用性已知的每种代表性药品。
在每种情况中，对多个普通实验参数进行经验评估，包括板的类型、试剂稀释、等分协议、参考标准、光谱滤光片设置、检测参数和二甲亚砜(dmso)灵敏度。在通用协议中，采用aquarius(tecan)或platemateplus(matrix)液体递送机器人或multidrop(titertek或thermo)，按顺序加入各试剂，在384-孔板中实现总孔体积28μl。采用aquarius或platemateplus上的384-头带衬点样工具，加入化学库中的化合物，最终浓度大约10μm/孔。信号在酶标仪或配备集成图像分析算法或cellprofiler脚本的成像系统上量化。采用商业软件和数据库包actvitybase(idbs)分析初步筛选数据，根据试验信号监测试验性能和确定阈值，辨别具有显著活性的化合物，保证进一步表征。在药物化学家评估后，将选中的化合物安排到任何孔数的板内，进行确认、人工检测、在哺乳动物细胞系内试验或开展剂量-响应试验。正如所指示的那样，对数据作图，并拟合为模型，从而获得ic50或ec50值。
实例3：spla2活性试验
进行筛选毒液spla2、mp和sp的抑制剂。采用浓度10mg/ml的毒液储备溶液，不进行典型的稀释，分析spla2、mp和sp的各种抑制剂。试验中毒液的最终浓度非常高，是0.444mg/ml。令人吃惊的是，尽管对照孔中底物消耗过多，几种抑制剂都表现出显著的抑制底物消耗能力。其中最值得注意的是伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪，即使在毒液浓度比优化浓度超出10万倍时，它们也显示出效果(参见图4同一试剂盒和方法的毒液浓度对比)。检查针对毒液储备溶液开展的三个试验的数据，进一步出乎意料的观察结果是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪对几种毒液在几种情况下都显示出mp和sp抑制性，表明它们是非常有价值的多功能解毒剂，是范围广泛的各种蛇和无脊椎动物毒液解毒剂的核心要素。
实例4mp活性试验
据发明人了解，伐瑞拉迪对蛇毒mp的抑制活性以前未见报道。这些发现表明了其mp直接抑制性、对这些关键蛇毒成分活性的pla2调节作用，或它们两者。这表明单试剂或仅两种或三种药物组合可以成功地治疗几种重要致命蛇的咬伤，不需要抗蛇毒血清，这一想法在实例8中进行了试验。
实例5sp活性试验
图3示出了同一系列的数据，其中采用实例1所述方法，采用高浓度毒液(最终浓度0.444mg/ml)试验spla2、mp和sp活性。体外试验中，与相同浓度(100μm)的马马司他和巴马司他相比，即使在极高毒液浓度时，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪都对蛇毒丝氨酸蛋白酶表现出令人意外的抑制效果。
实例6：spla2活性试验
为了确认早期实验的结果，其中仅采用高浓度毒液溶液来测定spla2的作用，且底物消耗是在更低浓度条件下进行在更合适的优化试验条件下并遵照制造商的建议进行选择pla2抑制剂，如伐瑞拉迪和戴拉普迪(darapladib)。该试验与图1、2a和3所述的区别是试验在25℃进行。可以看到它们对印度“四大蛇”：印度眼镜蛇、印度环蛇(和金环蛇)以及锯鳞蝰和圆斑蝰蛇毒pla2的抑制性。值得注意的是，伐瑞拉迪或戴拉普迪(darapladib)都未能抑制蜂毒spla2的活性。
图4表明，伐瑞拉迪而非戴拉普迪(darapladib)(lp-pla2抑制剂)能够体外抑制蛇毒pla2。令人吃惊的是，伐瑞拉迪或戴拉普迪(darapladib)都未能抑制蜂毒pla2。当伐瑞拉迪和戴拉普迪(darapladib)联合使用时，这两种制剂并未表现出明显的协同效应(数据未示出)。数据针对毒液对照进行归一化。如实施例1进行试验，除了在药物试验之前，对毒液活性进行优化，并且测试更低浓度的伐瑞拉迪，但得到了相同的结论：有效抑制了蛇毒pla2酶的活性。
图5a-5r表明，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪体外抑制医学上非常重要的几种蛇毒的spla2活性(实例2的剂量-响应方法)。5a)眼镜蛇5b)印度环蛇5c)圆斑蝰5d)锯鳞蝰5e)太攀蛇和5f)金黄珊瑚蛇5g)。这些图表明，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪在浓度达到1um时，是效果较差的蜂毒spla2抑制剂，在浓度到达100um时，仅仅是中等效果的抑制剂。5h)黑曼巴蛇5i)南棘蛇5j)极北蝰5k)a.白眉蝮5l)东部菱背响尾蛇5m)铜头蝮蛇5n)大响尾蛇50)小盾响尾蛇5p)水蝮蛇5q)西部菱斑响尾蛇重复实验5r)绿色响尾蛇(crotalusscutalatus)重复实验。伐瑞拉迪(v)和甲基伐瑞拉迪(v-m)对世界各地代表性蛇毒pla2的作用宽度和高效力令人非常吃惊。
实例7：伐瑞拉迪对小鼠和大鼠中的金黄珊瑚蛇蛇毒具有保护作用和治疗效果
实例8(图7)；伐瑞拉迪疗法防止响尾蛇毒液中毒引发的死亡
实例9(图8)：伐瑞拉迪防止小鼠因圆斑蝰蛇毒而死亡
实例10(图9)：伐瑞拉迪对小鼠体内的极北蝰蛇毒具有保护作用和治疗效果
实例11：抗蛇毒血清和伐瑞拉迪组合
该实验的目的是确定伐瑞拉迪和抗蛇毒血清(响尾蛇科(crotalidae)多价免疫fab(绵羊)抗蛇毒血清；btgpic.)如何相互作用，阻断关键毒性成分pla2。采用实例2描述的方法，测定单独使用、伐瑞拉迪单独使用及伐瑞拉迪和联合使用时的ic50％。无法预测这两种组合物是否会彼此干扰或具有加成效果。令人吃惊的是，观察到协同效应。
bliss独立计算(采用cokol等.(2011)systematicexplorationofsynergisticdrugpairs.molecularsystembiology.7:544建立的回归方法开展分析)。主要的量是第一公式中的“β”。β值小于1表明存在协同效应，而β值大于1表明存在拮抗效应。分析结果如下，“p-值”是β值的显著性水平。β值(括号内)表明伐瑞拉迪和多价抗响尾蛇蛇毒血清亦即之间存在协同效应：铜头蝮蛇(0.86)、西部菱斑响尾蛇(0.848)、东部菱背响尾蛇(0.855)和南棘蛇-一种澳大利亚眼镜蛇(0.725)。在这四个实例中，每个实例的p-值都<0.0001。该实验的ic50见下表1。
表1抗毒血清和spla2的小分子抑制剂(伐瑞拉迪)的协同活性
然后，所选mp抑制剂单独使用、仅与组合使用及与伐瑞拉迪组合使用，开展上述实验程序，结果见表2。表2表明了不同抑制剂和抗蛇毒血清联合使用的效果。
在此实例中，得到了抑制50％蛇毒mp活性的浓度，然后，加入其它抑制剂，以确定是否能够有效中和剩余的50％mp活性。给出了组合使用的数据。其中加入伐瑞拉迪(1μm)，这样做是为了中和背景pla2活性。根据表1实验测定的它们中和蛇毒mp的能力，选择普啉司他、马马司他和巴马司他。加入白眉蝮蛇蛇毒，查看采用并非用于特定蛇的抗蛇毒血清是否能够因加入一种或多种小分子抑制剂而变得更有效。
表2不同抑制剂与抗蛇毒血清联合的效果
说明不同抑制剂对蛇毒金属蛋白酶的效果。白眉蝮并非抗毒血清指定治疗的蛇，但是，在抗蛇毒血清中加入普啉司他或普啉司他+伐瑞拉迪的组合但不使用抗毒血清，表明了在后两种新的方法(小分子+抗蛇毒血清或小分子，如普啉司他+伐瑞拉迪-分子)中，特异性多价抗蛇毒血清或副特异性抗蛇毒血清可以发挥效力。
按照上文实例2使用的方法，得到伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪(pla2抑制性)及普啉司他、马马司他、巴马司他、伏立诺他、伊洛马司他、加贝酯和萘莫司他对表3-8，图15-20和图10-14中各种蛇毒的ic50值。这些实验的结果在表中及图中列出。结果表明，在许多情况下，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪抑制许多蛇毒的pla2的ic50值都出乎意料的低。普啉司他、马马司他和巴马司他抑制金属蛋白酶，其ic50值的情况同样如此。如结果所示，伏立诺他、加贝酯和萘莫司他的效果在某种程度上略弱，ic50值通常是微摩尔范围。人们以前并不知道普啉司他对蛇毒具有如此广泛的抑制效果。
实例13有用的西部菱斑响尾蛇(代表新世界毒蛇)蛇毒mp抑制剂的hts发现
按照实例2所述，进行高通量筛选(hts)，以确定可与伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪联合使用的响尾蛇蛇毒mp抑制剂，用于治疗西部菱斑响尾蛇咬伤和其它新世界毒蛇咬伤。结果以mp活性的减少百分数(％)表示。筛选的制剂包括fda批准药品库、生物活性脂质库和蛋白酶抑制剂库(ycmd库：genplus、fda批准药品库、ncc、pharmakon1600、生物活性脂质库和蛋白酶库)。下述制剂抑制至少1％mp活性。出乎意料的是，加贝酸表现出mp抑制性。加贝酯是一种批准上市的药物，对炎症通路具有广泛的效果，是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。未预期sp抑制剂也将抑制锌蛋白酶，如mp家族。cgs27023的抑制效果大于>95％。放线酰胺素的抑制效果是92％，可认为在急性情况时有用。伏立诺他非常显著，具有42％抑制效果。阿斯巴甜具有6.31％抑制效果，其它人工增甜剂可用作部分抑制剂，同时改善伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪的味道，后两者具有轻微苦味，当伐瑞拉迪与碳酸氢盐及10％葡萄糖混合时(个人观察)，还有盐味。
实例14锯鳞蝰(代表老世界蛇毒)mp抑制剂的hts发现
按照实例2所述，进行高通量筛选(hts)，以确定可与伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪联合使用的锯鳞蝰蛇毒mp抑制剂，用于治疗锯鳞蝰和其它旧世界毒蛇毒液蛰入。高通量筛选包括fda批准药品库、生物活性脂质库和蛋白酶抑制剂库(ycmd库：genplus、fda批准药品库、ncc、pharmakon1600、生物活性脂质库和蛋白酶库)。具有67％抑制效果。头孢克肟和其它头孢菌素对锯鳞蝰mp具有令人吃惊的强大效果，可用于防止毒液蛰入效应、感染和炎症，特别是与伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪组合使用时及与下述一种或多种制剂组合使用时：具有28％的效果。去甲肾上腺素和其它治疗帕金森疾病有用的交感神经剂和多巴胺能制剂出乎意料地有用，它们获得了fda批准，而且容易获得，其中锯鳞蝰是本地的。具有28％的效果。萘莫司他和fda批准的丝氨酸蛋白酶抑制剂对太攀蛇蛇毒丝氨酸蛋白酶具有出乎意料的活性，在结构上与具有23％效果的加贝酯类似。阿斯巴甜的效果是6％，与西部菱斑响尾蛇类似，可包括在伐瑞拉迪类治疗方法的口服配方中，用于改善味道(本发明人的观察)。基于伐瑞拉迪的治疗与布比卡因联合注射使用时，实现>10％的效果，并可减轻注射疼痛和麻痹淋巴肌肉，减慢蛇毒的扩散。
实例15采用金黄珊瑚蛇蛇毒的眼镜蛇pla2抑制剂的hts发现
按照实例1所述，进行高通量筛选(hts)，以确定可与伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪联合使用的金黄珊瑚蛇蛇毒pla2抑制剂，用于治疗眼镜蛇的毒液蛰入。(ycmd库：genplus、fda批准药品库、ncc、pharmakon1600、生物活性脂质库和蛋白酶库)。神经酰胺(ceramine)具有43％效果(％抑制)。还发现其它制剂有用，以及苏拉明和其它混合物及它们的组合物，与伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、b-维生素、抗生素、花生烯酸和下面提到的其它制剂组合，其中一些也具有有用的mp和sp抑制性。抗寄生虫药苏拉明具有21％的效果，利多卡因11％，托品酰胺>15％及阿托品>20％效果，它们可以与伐瑞拉迪类治疗策略联合使用，经肠胃外、口、鼻和眼睛给药，特别是与新斯的明、卡巴拉汀和毒扁豆碱一起使用，对眼镜蛇spla2具有15％至20％抑制效果，非常实用和有效，另外还可中和导致虚弱的突触后蛇毒α毒素。
实例16：制剂实例–剂量和剂型
a.示例性注射液
本发明的示例性注射液包括下述(如美国专利申请文件no.20120232031所示的赋形剂)：
1.含水注射液，包括溶于含10％β-羟丙基环糊精(bhpc)的水中的pla2抑制剂；
2.含水注射液，包括pla2抑制剂(1.0g)、乙醇(0.5ml)、维生素c(0.5g)、氯丁醇(0.1ml)、透明质酸钠(10g)和氯化钠(0.9％)补足至100ml；
3.含水注射液，包括pla2抑制剂(2.0g)、聚(乳酸)(pla)(1.0g)、柠檬酸钠(1ml)、林格氏溶液补足至100ml；
4.含水注射液，包括pla2抑制剂(1.5g)、乳酸和羟基乙酸共聚物(plga)(1.5g)、苄醇适量至2％、维生素e1ml、玉米油适量至100ml；含水注射液，包括pla2抑制剂(2.5g)、乳酸和羟基乙酸共聚物(plga)(1.5g)、苄醇适量至2％、维生素e1ml、玉米油适量至100ml。
b.鼻腔喷雾吸入剂
示例性鼻腔喷雾吸入剂包含喷雾剂配方，包括：
(a)金属蛋白酶抑制剂，如巴马司他或丝氨酸蛋白酶抑制剂；
(b)磷脂酶a2(pla2)抑制剂，例如，选自埃菲普迪(effipladib)、lilly315920(伐瑞拉迪)、ly311727、bms181162、ym26567、variabilis、sb203347、重组paf-ah、达普拉缔等，及包括至少一种磷脂的组合物，所述磷脂选自磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰丝氨酸(ps)、磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰肌醇(pi)和磷脂酰甘油(pg)及它们的混合物，所述磷脂与至少一种选自羧甲基纤维素(cmpe、cmc-pe或cme)、透明质酸(hype、hype和hyal-pe)、肝磷脂(heppe、heppe、heppe、hepa-pe)、硫酸软骨素(csape、csape、csape)、聚明胶肽(海脉素)(hempe、hempe)、羟乙基淀粉(hespe、hespe)的化合物及它们的混合物连接(结合)。
(d)药学上可接受的分散剂；
其中所述鼻腔喷雾吸入器经计量，通过形成包含一剂量的金属蛋白酶抑制剂或丝氨酸蛋白酶抑制剂和磷脂酶a2(pla2)抑制剂的喷雾，而分散一定量的气雾剂，所述气雾剂对治疗毒液蛰入有效。
治疗毒液蛰入有效的金属蛋白酶抑制剂和磷脂酶a2(pla2)抑制剂的示例剂量范围包括大约0.01、0.1、1、10、100和1000mg金属蛋白酶抑制剂和磷脂酶a2(pla2)抑制剂，或大约分散、溶解或稀释在药学上可接受载体中的0.001、0.01、0.1、1、10、20、30、40、50、60、70、80、90至大约100g每种金属蛋白酶抑制剂和pla2抑制剂，以得到抑制剂的浓度是大约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、230、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725至大约750μm或高达800、850、900、950或1000μm。
实例17：蛇咬伤的反应
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