内容详见印刷版《动物行为实验指南》。
3、TST是否适用于基因分析?
4、TST是抑郁症模型还是抗抑郁作用的模型?
实验材料
1.悬尾盒。悬尾测试涉及将小鼠的尾巴悬挂起来。该过程最基本的只需要悬尾杆或应变式压力传感仪和胶带。一般使用专门制造的悬尾盒,由塑料制成,尺寸(55cm高x60cm宽x11.5cm深)。为了防止动物相互观察或互动,每只小鼠都悬挂在自己的矩形隔间(55cm高x15cm宽x11.5cm深)内。
如果使用大型远交小鼠品系(例如CD-1),则可以增加悬尾盒的各个隔室的尺寸。小鼠悬挂在该隔间的中间,宽度和深度足够大,使小鼠无法与墙壁接触。在这种情况下,小鼠鼻子和设备地板之间的大约距离为20–25cm。设备中有n个这样的相同隔间,允许一次测试n只小鼠。
铝制悬尾杆(1cm高x1cm宽x60cm长)用于悬挂每只小鼠的尾巴,位于盒子顶部。如果使用挂钩应变仪,则可以拾取小鼠的所有动作,并测量应变片上力的变化,将其传输到中央单元,该单元将信号数字化。
信号使用LED直观显示。中央单元中包括一个水平过滤装置(从1到9),可以将其设置为所需的灵敏度,以最大程度地区分大幅身体运动与动物或其内部器官的其他微运动。但是,实验者应考虑使用提供最佳对比度的背景。对白化动物使用深灰色盒子,为其他毛色的小鼠使用乳白色盒子,因此测试的行为评分更可靠。
在每个隔间的底部,可以放置一个可拆卸的铝托盘,用于收集动物的粪便或尿液。
-小鼠悬尾箱,型号:XR-XX203,上海欣软-
3.VisuTrack视频分析软件。由于该测试通常涉及同时测试多只动物,因此实时评分将必须借助于软件。摄像机应以足够高的分辨率进行录制,以呈用于行为评分的高质量录像。在开始测试之前,请务必确保软件的正确使用。
4.白噪声发生器。噪声发生器应掩盖间歇性环境声音。特别建议在实验室环境中使用噪声发生器,因为听到突然的巨响,这可能会吓到小鼠。一般建议环境噪声水平(未激活白噪声发生器)约为60dB。在TST传导位置激活白噪声发生器时,总声级为70-72dB。然而,需要注意的是,这些仅作为示例提供,每个实验室应根据其独特的环境和情况选择合适的噪音水平。
5.清洁用品。每次使用灭菌溶液彻底擦拭悬尾盒。
6.攀爬塞。(可选:取决于使用的品系)某些背景的小鼠,例如C57BL/6,可能会在测试过程中向上攀附在尾巴上。将透明空心聚碳酸酯管(4cm长,1.6cm外径,1.3cm内径,1.5g)放置在小鼠尾巴周围,以防止这种尾巴攀爬行为,这些设备可以在任何实验室中使用通用工具和材料制造。
实验程序
整体实验设计应反映特定于实验的变量之间的适当平衡。例如,在每个TST测试中同时测试每个处理组。此外,小鼠的测试位置在每次测试中旋转轮换。
1.将相机放置到位。相机应尽可能靠近测试盒,以获得动物图像的最高分辨率。
2.提前准备好测试用的胶带,剪切并标记好。
3.如果使用白噪声发生器,则应在小鼠进入测试室之前将其启动。白噪声水平应该只足以掩盖外部噪声,而要避免高音量,并确保对所有动物使用相同水平的白噪声。
步骤4-11,
请参考印刷版《动物行为实验指南》!
行为分析
1.一般来说,TST测试持续6min。与FST不同,TST测试整个过程都是评分的。这是由于一般发现小鼠倾向于在TST早期表现出不动。
后续4-8,
与FST的比较
与FST类似,在TST中,小鼠被置于不可避免的但中等压力的情况下,是评估药物抗抑郁效果的最佳验证测试,但也用于评估环境,神经生物学和遗传操作的影响。实验者应该记住,虽然FST和TST在表面上是相似的,但它们的灵敏度和表现存在各种重要差异,并且一项测试的结果不一定会在另一项测试中复制。
两种测试之间重要的区别包括:
(一).与FST相比,在TST中,没有由于浸入水中体温过低的风险,因此避免了体温过低暴露引起的任何可能的混杂,特别是如果目标基因参与体温调节过程。事实上,像许多急性应激源一样,TST会在动物中引起高热反应。
(四).基线不动水平在两种测试之间也可能有很大差异。研究人员表明,NIH-Swiss品系的小鼠在TST中的不动水平比在FST中少七倍。有趣的是,使用C57BL/6小鼠的两种测试之间的基线不动水平是相似的。
参考文献
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