导语：如何才能写好一篇姊妹情深，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
如果说，丰子恺先生的画给俞平伯(忆)中的“薄薄的影”“着了颜色”，使诗的影子显得“格外分明”，使“梦的颜色加添了梦的滋味”，那么朱自清先生的(跋)则为俞平伯的(忆)谱上了清亮悠扬的曲，自然巧妙地征服了读者的心，为(忆)赢得了广大的“听众”。《歌声》让人不禁想起了“余音绕梁三日不绝”的美誉，但细细品来仍觉模糊不甚清晰，至少离身心较远。而“昨晚中西音乐歌舞大会里‘中西丝竹和唱’的三曲清歌，真令我神迷心醉了。”因为它“清爽”是可以触摸到的。歌声如“一个暮春的早晨”，爽人心脾。音乐如“霏霏的毛雨默然洒在我脸上、引起润泽、轻松的感觉。”他的手感觉到了“新鲜的微风吹动”，他的脚感觉到了“经了那细雨”，变得“滑腻可爱”的雨道。“微雨偷偷洗去了”花园里做着“清梦”的群花的尘垢，“她们的甜软的光泽便自焕发了”，有“恬静的红”、“冷落的紫”、“苦笑的白与绿”。音乐如“涓涓的东风只吹来一缕缕饿了似的花香”，吹来了“潮湿的草丛的气息和泥土的滋味”，还有“清新的蒸气”。这些朴素、淡雅、清爽的语言，表达了富有朝气的青年诗人的内心世界。
(阿河)与(女人)等散文中，都有关于人物的描写，同样给人以清爽、清秀的感觉。
阿河“有一套和云霞比美，水月争灵的曲线。”她的两颊“白中透着微红，润泽如玉”;她的皮肤“嫩得可以掐出水来”;她的眼睛“像一双小燕子;老是在淞淞的春水上打着圈儿”;她的笑脸“像一朵桃花.”，微笑时便是盛开的时候;她的头发如纯丝，柔软而光滑。
在(女人)中，作者看到了“在薄薄的香泽当中，一群白上衣，黑背心，黑裙子的女人，默默的，远远的走进来了。”仿佛看见了“安琪儿”;“在暮霭四合”的湖上、艇里“坐着八九个雪白雪白的白衣的姑娘，湖风舞弄着她们的衣裳，便成一片浑然的白。”她们成了“湖之女神”;“淡月微云之下”的桥上，相依的十来个姑娘，“朦膝胧胧的与月一齐白着”，她们是月姊儿的化身。
每年1月1日在美国南加州帕萨迪纳市举行的玫瑰花车游行，是美国有着悠久历史的著名大众性元旦庆贺盛典。2008年元旦，在众多玫瑰装点的花车当中，以2008年北京奥运会为主题的花车格外美丽，激起了游行线路两侧观众们一阵阵热烈的掌声和欢呼声。
在现场观众当中，一群头戴印有奥运标志帽子的中国人分外抢眼，他们就是由200多名来自加州大学洛杉矶分校，南加州大学，加州理工学院等南加州各高校的留学生和访问学者组成的美西南中国学生学者联谊会主席联席会“奥运花车喝彩团”。
当奥运花车经过“喝彩团”的时候，整个观众区沸腾了!中国学生学者们手挥奥运标语和旗帜，齐声呼喊着“北京!奥运!”“同一个世界、同一个梦想!”同学们手中小旗上的袖珍福娃，仿佛为花车上大大的福娃跳起欢快的舞蹈。花车正前方的北京奥运会主题口号“同一个世界、同一个梦想”，在同学们欢乐的喊声中显得愈加意味深长。观众区内的许多美国朋友也被这热烈的气氛感染，一起高呼“北京!奥林匹克!奥林匹克!北京!”花车放慢了速度让道路两边的观众尽情欣赏奥运花车行进队伍中精彩的杂技，舞蹈表演，掌声、欢呼声也变得更为热烈。可爱的福娃、欢腾的人群，成了花车游行现场一道激动人心的风景。
这激动人心的风景里，包含着海外学子对北京奥运的深情。想看花车游行的人很多较高的看台有十几层座位，而为了能站在路边的位置，在最近的距离为花车喝彩助威，现场的多数同学整夜未眠，联席会的主要骨干甚至从前一天早晨开始就守在路边。中国留学生们三五成群聚在一起，有的点上应急灯打扑克有的借着路灯做起了小游戏。帕萨迪纳的冬夜寒气逼人但是，大家对奥运的热情却不能不让人心中感觉到阵阵暖意。一位70多岁的中国学者因年纪太大，实在熬不了一夜但还是天没亮就早早出了家门，坐上公共汽车，辗转10余公里，愣是在奥运花车到达以前加入了“喝彩团”。
这次为奥运花车的喝彩活动，是美西南中国学生学者联谊会主席联席会迎奥运系列活动里的重头戏。包括留学生足球赛，羽毛球赛等在内的一系列迎奥运活动的成功举行，体现了美西南地区(含南加州、亚利桑那州、新墨西哥州，夏威夷州)广大中国学生学者对北京奥运会的无限热情与良好祝愿――今年玫瑰花车游行的主题是“通向世界庆典的护照”，我们也衷心祝愿北京奥运会这一世界庆典圆满成功!
因在合资企业工作的关系，经常到亚欧和北美一些国家出差。行走于各个国家期间，给我留下深刻印象的，除了当地旖旎的自然风光和带着历史印痕的名胜古迹外，还有各个国家的人文风尚，最近一次美国之行中遇到的一件事就令我至今难忘。
达尼埃尔是3年前大学毕业应聘到这家公司的，接触中我很快发现，他是一个性格大方开朗，很有工作能力的年轻人，几天下来我们相处得非常愉快。一周后，我所带的难题大部分已圆满解决，只剩下一个问题的技术指标需要到芝加哥一家权威检测机构再做些检测。这样，我便在达尼埃尔的陪同下，来到了位于密歇根湖畔的美国名城芝加哥。在芝加哥期间，有了达尼埃尔的协助，一切进行得十分顺利。
吃完中午饭，我们来到位于芝加哥市中心的艺术博物馆，到了售票处，看到上面标明门票的价格：成人18美元。我迅速走上前，打开钱包拿出40美元递给售票员，说要买两张门票。谁知就在这时，站在一旁的达尼埃尔一把将钱夺了过去，我先是一愣，转而即明白了达尼埃尔的用意，立即边往回夺钱，边说：“达尼埃尔，你这是干吗呀！门票由我来买，你别这样！”可达尼埃尔像是没听见一样，一声不吭地从刚刚夺下的两张20美元中拿出一张塞到我手里，然后才一脸严肃地对我说：“参观艺术博物馆，是我的个人消费，门票必须我自己买！”话语之坚定，毫无回旋余地。大庭广众之下，看着达尼埃尔不置可否的神情，我只好由他去。看我不再争执，达尼埃尔脸上露出笑容，自己买了门票。
一下午的参观，达尼埃尔看得兴致勃勃，参观结束时已是傍晚时分。我们在外面吃完饭回到酒店，聊了一通参观的感受后，我拿出18美元递给达尼埃尔，真诚地对他说：“今天的参观是我提出的，帮你买门票，是为了感谢这些天来你在各方面给了我许多帮助，这区区十几块钱请你务必收下！”达尼埃尔看了我一眼，非常认真地回答：“协助你完成任务，是我的工作，分内的事，你能满意就是对我最好的肯定。参观艺术博物馆，纯属工作之外的事，因此这钱我不能收！”我一听有点急了：“达尼埃尔，我这也是代表我们公司表达一点心意……”我的话还没说完，达尼埃尔便做了个篮球场上暂停的手势，拦住了我的话头：“不论你是个人意思，还是公司的心意，这钱我都不能收，如果让你花钱买门票，满足我个人的爱好，那不成了借工作之便徇私了吗？”我一听马上说：“问题没那么严重吧！”“怎么不严重，这绝不是多少钱的事，而是涉及到一个人做人处世标准的原则问题！”
一、《柏子》中人物展现的独特“生命形式”
《柏子》讲述的是一个水手和的故事，水手终年在海上漂泊，但每月都会花完自己用性命换来的钱，去和自己相好的见上一面，在见面过程中他们并没有感到生活的不易以及这种生活的荒谬，他们反而感到非常的满足。水手认为能够在保证自己基本生活的前提下，花光所有的钱和会一次面就是最幸福的事！这部作品的故事相当地简单，水手在上岸之后和会一次面，之后又返回船上，这样就完成了他们之间的一次约定，这件事在当时那个年代是一件非常平常的事。但是从这个故事本身进行分析，我们不难看出，即使是生活在社会最底层的湘西人民，他们也始终以一种最本真的形式生活着。虽然故事中的主人公只是水手和，但是他们之间的感情却是发自内心的，我们给他们同情和怜悯，因为他们感到的是幸福和满足。故事中展现出来的生存满足和本望，就是湘西底层人民一种独特的“生命形式”。
柏子是一个出身低微的水手，由于社会对他狠狠的压榨，他只能冒着生命危险去工作，这样才能保证自己的基本生活，不然随时都有饿死街头的可能性。在工作过程中，唱歌是他最好的发泄方式。《柏子》中的是湘西文化中的另外一种“生命形式”，她们过着屈辱的生活，但是她们的人性并没有被这种生活所吞没。文中的柏子把辛辛苦苦挣来的钱留下生活的必需，全部都花费在身上，我们在柏子的身上找不到道德的枷锁，只有最本真的野性。也把所有的感情都倾注在柏子身上，关心着柏子，在她身上我们找不到那些的低俗趣味。作者没有对柏子和这两种“生命形式”有任何的鄙夷之情，而是对他们在压抑的生命下，坚持着生命的本能倔强地生活着带有一定的赞美之情。柏子和是人性最本真、最自在的展现，这种特殊的“生命形式”也只有在湘西文化中才能找到。在阅读《柏子》的过程中，我们虽然可以明显地感到柏子和生命的压抑，但是也可以看出在他们压抑的生命下人性的张扬，他们大胆、自然、没有丝毫心机地保持着这种让人又悲又赞的“畸形”恋爱，这种张扬的方式似乎超脱了道德的限制，是人追求自由生命的最高形式，实现了人性和“无道德”最完美的统一。
二、《柏子》中冷漠与狂欢并存的叙事风格
这些“柏子”们在离去的时候，头顶着大雨，对于自己花光的钱做了什么，得到了什么，都不去想，他们只是把曾经用手抚摸那女人的身体当成是以后的所有快乐。这些“柏子”们把自己永远地束缚在自己的梦中，远离尘世的羁绊，挣脱现实的束缚，就像是把自己永远地固封在了一个虚幻的茧里，过着属于自己的狂欢日子，但从中我们也会不自觉地看到这些“柏子”们的可怜之处，看到这个世界的冷漠，看到他们的灵魂在苦苦挣扎下，最终做出的悲凉选择。
作者借助于这种叙事风格，也体现了当时那个时代下知识分子的脆弱灵魂。当时正是“五四”运动的大潮退去之时，中国的新文化阵营面临着崩解的局面，有的知识分子移居国外，有的开始韬光养晦，有的退隐林泉。沈从文在1928年从北京逃到了上海，但是上海是冒险家和投机者的乐园，不是一个可以放置自己灵魂的净土，最后沈从文不得不把眼光投向了自己的家乡――湘西。只有在这里他才能感受到一份安静；只有在这里他才能找到他梦想中的那份古朴和原始；只有在这里他才能把外界的一切喧嚣当成不存在；只有在这里才能让他过着冷漠与狂欢并存的生活，可是这又何尝不是当时知识分子追求的最终结果呢？
三、《柏子》中蕴涵的人性哲学
1、肉没合上劲或瘦肉太多。
2、没兑鱼红或者生粉兑少了。
制作清汆丸子的要点如下：
1、选肉方面。肉要7分瘦，3分肥。
2、1斤肉要兑2-3两鱼红。
3、合肉丸要先撒盐，撒了盐后就开始顺着一个方向合，等肉起劲，然后再兑水，继续合。这样反复几次，就可以往里面放鸡蛋，再继续合，合均匀后，就可以加生粉。
兄妹之间永牵绊
医院里：
空中弥漫着刺鼻的消炎水。最普通的的一间病房里，阳光洒满整个房间。无形的风把白色窗帘上下飞扬，像一场早来的葬礼。窗户旁有一张小床，床上坐着一个骨瘦如柴的小女孩，大约只有八九岁。虚弱的仿佛一碰就要散架，脸上没有一点血色，他看着窗外的风景，心里充满向往。
哥，你说我还会好起来吗？她吃力的张开嘴唇问自己的哥哥。
正在收拾餐具的少年，听见这虚弱的声音，心狠狠的的揪了一下。他放下手中的饭盒，转身看自己的妹妹。女孩正在伸手捉被风吹落的蒲公英，开心地笑着。望着妹妹的笑脸，眼圈微微泛红，他好久没看到妹妹是那样开心的笑了。
少年沙哑着嗓子说：欣欣一定会好起来的”少年也好累好累。少年坐在床上搂着欣欣换了好多表情，终于努力扯起一丝微。
太好了，哥哥我太高兴了。欣欣也勉强的笑了一下，她怎么不知道自己的身体状况呢。哥，再带我去一次游乐园吧。
好，等欣欣好了我们在去。说完这句话，泪水已奔涌而出了。少年清楚记得，欣欣住院前，他第一次带欣欣去游乐园，欣欣当时的喜悦表情都印在少年脑海。也可能也是最后一次了。
哥我想睡觉。他不想回忆太美好的记忆。越美好越让她心痛。你唱歌哄我睡吧，我们家的歌。
少年沙哑着唱完欣欣最爱的歌。
一、申报煤矿二级安全培训机构资质理由
1.国家对煤矿安全生产提出越来越高的要求，要满足国家对煤矿安全生产的要求，必须建立更高层次的安全培训机构，能够培养更多的煤矿负责人和安全生产管理人员，建立强有力的安全生产管理队伍，提高集团公司的安全生产管理水平，确保不出安全生产事故，促进集团公司的可持续发展。
2.容易通过国家安全生产检查，根据考察单位经验，安全培训机构资质高的煤矿企业，各项安全生产指标容易达标，比起安全培训机构资质低的煤矿企业，安全生产检查容易通过。
3.二级安全培训机构资质申报成功，提高了集团公司办学层次，可以举办煤矿总工程师培训，这极大方便了集团公司的工作，不必去求别人，既可以完成培训煤矿总工程师的任务，又可以不影响集团公司的正常工作。
二、申报煤矿二级安全培训机构资质条件
按照《安全生产培训管理办法》（国家安全生产监督管理总局令第44号）、《国家安全监管总局关于实施〈安全生产培训管理办法〉有关事项的通知》（安监总厅培训〔2012〕50号）等有关文件精神，申报煤矿二级安全培训机构资质需要具备以下基本条件：、
1.具有独立法人资格；注册资金或者开办费300万元以上；固定资产100万元以上。
2.有3名以上具有大专以上学历的专职管理人员。
3.有健全的机构章程、管理制度、工作规则。
4.有10名以上具有本科以上学历的专职或者兼职教师，其中至少有6名具有中级以上职称并且经省安全监管局考核合格的专职教师，专职教师中至少有3名取得注册安全工程师执业资格；教师所学专业应与申请的培训范围相适应。
5.有固定、独立和相对集中并且能够满足同期80人以上规模培训需要的教学及生活设施，其中专用教室使用面积120平方米以上；能够适应计算机在线考试的需要。
6.配备能够满足培训教学需要的教学仪器设备和图书资料。
同时，安全培训机构申请承担特种作业人员安全技术培训的，还应当具备下列基本条件：
1.每个作业类别不得少于2名专科以上学历、相应专业的专职教师，从事实际操作教学的教师应当有相应专业技师以上等级证书。
2.具备相应作业类别的有安全保障的实际操作设施、设备和场地条件。
三、申报煤矿二级安全培训机构资质要做的工作和所需专项资金
2.朝暮与年岁共往，然后与你一同行至天光。
3.晚是全世界的晚，安是只给你的安。
4.我快写不出情话了，只想见你一面。
5.我喜欢安于现状，也喜欢来日可期。有你的时候，安于现状；没你的时候，来日可期。
6.夜幕深沉里，你就是我的星。
7.你的名字，是我见过最短的情诗。
8.十几岁的时候，我遇见了一个清风明月般的人，我什么都没想，我只想爱他。
9.你一定也是某个人翘首以盼的惊喜。
10.愿同一粒流星，即便燃其所有，也想跌跌撞撞地闯入你的眼眸。
11.听喜欢的人说晚安，就像是天上的星星掉下来跌进梦里，只为我一个人闪闪发亮。
12.万物皆有不同，比如，我有你，而他们没有。
13.所有的晦暗都留给过往，从遇见你开始，凛冬散尽星河长明。
14.星河璀璨，阳光干净，在人间所有美好的存在里，不论是活着或者死去，我总是最爱你。
15.我半生穿过枫叶,抖落白雪，就为奔向你面前，由你在我手心,塞一片春天。
16.龙应当藏在云里，你应当藏在心里。
17.这世上美好的东西不太多，立秋傍晚从河对岸吹来的风，二十来岁笑起来要人命的你。
18.爱情是一件得体的事，可是爱你我从来没有分寸。
19.见不到想，见到便笑。见不到思之如狂，见到便心花怒放。
20.能让我狂奔的，除了大雨就只有你了。
21.你身上有我余生的味道。
22.即使我张牙舞爪，也希望在你眼里我是最好的宝贝.
23.想牵你的手，从心动，到古稀，到尽头。
24.在一起，鸡毛蒜皮也是故事。
25.温山软水繁星千万不及你眉眼半分。
26.我以为我看够了阳光，它泛滥得多廉价而寻常，直到与你人海相望，才知我从未曾真的见过阳光.
27.像星星燃烧天空，像花坠落在春天，像大雪覆盖冬天。你也这样，点亮了我所有的世界。
28.半途而废不好所以我建议你喜欢我到老。
29.我喜欢你就像是烟火升空，会在心里每一个小地方，都绽放小小的烟花，在心里噼里啪啦的炸开。
美国男子申请与电脑结婚遭拒控诉政府歧视
点评：政府，这就是你的不对了，我和我的电脑可是真爱！
旧金山富豪网上公布藏宝图钞票藏于公园及厕所
点评：中国的富人们，你们在哪里？让我看到你们，我们也来玩藏宝游戏吧。
萌宠
恶犬撕咬小主人家猫飞身将其击退
点评：俺可是小猫中的战斗机，话说，下次能多给点鱼吃吗？
宠物犬坐副驾飞满250小时获机务人员证件
英国一只3岁的棕色拉布拉多犬卡利在飞行员主人格雷厄姆的带领下，飞行满250小时后成功获得了国际飞行员组织认可的机务人员证件。此后，卡利在飞机上会受到贵宾待遇，有一条通道专门为它而开设。格雷厄姆成为私人飞行员已有13年，他拥有一台塞斯纳210型6人座私人飞机。他在自己的宠物犬卡利仅仅3个月大的时候就带着它飞行。格雷厄姆说：“卡利非常喜欢坐副驾驶的位置，来享受飞行的乐趣。卡利一穿上自己的荧光夹克就知道自己马上就要飞行了，便表现得非常兴奋。”他又接着说道，“这个证件使我们走到哪里都能够得到一些优惠，在乘坐其他飞机的时候人们看到此证件都会捧腹大笑。”
点评：对于这个幸福的小狗，小编想说：让开，让我来坐这里！
科技
美国发明“读梦机”可从人脑提取梦中人物形象
点评：万一夫妻双方从“读梦机”上看到对方梦里的男神女神不是自己呢？这得毁了多少家庭啊。
基因相似的人易成夫妻如何相吸暂未确定
都说夫妻缘分天注定，但美国学者的最新研究表明，这也可能与脱氧核糖核酸（DNA）有关。相较于两个陌生人之间，丈夫和妻子之间往往拥有更为相似的DNA。也就是说，多数人倾向选择与自己DNA相似者结婚。这项研究由美国科罗拉多大学的多明戈牵头进行。他的研究小组分析了825对白人夫妇的基因组，特别是DNA基本组成单元，即决定个体独特性的单核酸间的碱基差别，再与随机选择的非配偶个体对比。结果显示，婚姻配偶在DNA上更相似，这种现象被称为遗传型婚姻配对。至于人们如何找出与自己基因相似的人，多明戈表示目前还无法确定。有报道称，这一研究结果可能会改变医学界对一些遗传疾病的评估方法，目前统计模型的计算方法都是基于配偶基因随机配对的假设，新发现对改善这些模型有重要意义。
点评：终于明白了，两口子之所以成为两口子，是因为基因相似。
奇趣
美国推“租用绅士”网站200美元/小时起价
日前，美国一家公司推出了“租用绅士”网站，每小时起价200美元，顾客能够从许多帅气又聪明的男性中挑选并预订“临时伴侣”。报道称，这些“绅士”可以担任约会对象、为对方做饭，甚至修下水管道。但他们在工作期间不做的事情就是“真正上钩”，不能接吻，更不能与顾客发生关系。网站的一位客户玛丽娅表示，想要找一个“品质好”的男人度过时光很难，想要了解一个人需要经过整个约会程序，而在这个网站，只需要点击几下鼠标就能够做到。然而，人际关系专家巴恩斯表示，雇用临时伴侣可能破坏妇女找到真爱的机会。
点评：什么时候中国推出这项服务呢？这样那些大龄剩女就不用再发愁被逼婚了，想要什么型号就租什么，这个“feel”倍儿爽！
西伯利亚“睡美人”小镇居民连续6天昏睡不起
[关键词]人参皂苷Rb1；阿霉素；自噬；H9c2细胞
ProtectiveeffectofginsenosideRb1ondoxorubicin
inducedmyocardialautophagy
LILongfei，MAZengchun*，WANGYuguang，TANGXianglin，TANHongling，XIAOChengrong，GAOYue*
（InstituteofRadiationMedicineScience，AcademyofMilitaryMedicalSciences，Beijing100850，China）
[Abstract]GinsenosideRb1（Rb1），whichisoneofthemainingredientsderivedfromPanaxginseng，hasbeenfoundtohaveextensivepharmacologicalactivitiesincludingantioxidant，antiinflammatory，anticancerproperties.Inthisstudy，theeffectofRb1ondoxorubicininducedmyocardialautophagywasstudiedwithH9c2asthestudyobject.CCK8method，transmissionelectronmicroscopeobservation，fluorescencestainingobservationandWesternblotwereusedtodetectchangesinH9c2cellproliferationandautophagyaftertreatment.Accordingtotheresults，doxorubicincouldcausecellviabilitydecrease，significantincreaseintheLC3Ⅱ/LC3Iratioanddownregulationoftheexpressionofp62.PretreatmentwithginsenosideRb1inhibitedcellviabilitydecreaseandincreaseindoxorubicininducedautophagicstructureandLC3Ⅱ/LC3Iratio，anddownregulationoftheexpressionofp62.Inconclusion，doxorubicincouldinduceH9c2celldeathandinduceautophagy，andginsenosideRb1showedaprotectiveeffectonDOXinducedcardiotoxicity，whichmaybecorrelatedwithsuppressionofDOXinducedautophagy.
[Keywords]ginsenosideRb1；doxorubicin；autophagy；H9c2cell
自噬是细胞受到刺激后产生双层膜囊泡包裹胞内物质运送到溶酶体降解的过程，是真核生物所特有的进化保守过程，其主要功能是清除和降解细胞内受损的细胞结构和衰老的细胞器以及外来物，保持细胞稳态[1]。近年研究发现，自噬不但参与心血管系统稳态的调控，而且在心肌肥大、心肌纤维化、心肌缺血再灌注损伤、心力衰竭等多种病理过程中发挥重要作用[25]。人参为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根和根茎，是我国传统名贵中药材，在我国药用历史悠久，对多种疾病具有防治效果。人参皂苷Rb1是人参的主要有效成分之一[6]。现代药理研究证明，人参皂苷Rb1可明显改善缺血性心脏病、各型心律失常、急性或慢性心力衰竭等心脏疾病[7]。阿霉素属于周期非特异性抗肿瘤药。文献报道，其具有心脏毒性并且会导致心肌细胞自噬性死亡[810]。因此，本研究拟用阿霉素建立心肌细胞自噬损伤模型，探讨人参皂苷Rb1对阿霉素诱导心肌自噬的影响。
1材料
1.1药品与试剂人参皂苷Rb1购于上海一飞生物科技有限公司（批号E049517，纯度98%）；阿霉素（doxorubicine，DOX）、3MA购自美国SelleckChemicals公司；DMEM高糖培养基、青霉素链霉素双抗溶液购于GE医疗公司；胎牛血清（FBS）购自天津康源生物技术有限公司；磷酸盐缓冲液（PBS）、PremoTMAutophagyTandemSensorRFPGFPLC3BKit购于美国赛默飞世尔科技公司；CCK8试剂盒购于日本同仁化学研究所；AntiSQSTM1/p62抗体购自英国Abcam公司；LC3B抗体购自美国CST公司；实验用水为超纯水；其他试剂均为国产分析纯。
1.2仪器VICTORX型多标记酶标仪（美国PerkinElmer公司）；SM510META激光扫描共聚焦显微镜（德国Zeiss公司）；日立透射扫描电子显微镜H7650（日本日立集团）；Microfuge22R型离心机（美国Beckman公司）；CO2培养箱（美国Thermo公司）；MilliporeSimplicityTM185超纯水机（德国Merck集团）；VIBS223S电子天平（德国Sartorious公司）。
1.3细胞系本研究采用大鼠胚胎心肌细胞系H9c2（21）作为实验对象，此细胞系购自北京协和细胞资源中心（CellResourceCenter，IBMS，CAMS/PUMC）。
2方法
2.1细胞培养H9c2细胞培养于含10%FBS的DMEM高糖培养液中（含青霉素钠100unitsmL-1，链霉素100mgL-1），放入37℃，5%CO2培养箱中培养。2d更换1次培养液，待细胞生长至约80%时用0.25%胰蛋白酶消化传代。取对数生长期细胞进行实验。
2.3电镜观察自噬体细胞给药处理后采用刮刀法收集细胞，经过前固定、漂洗、后固定、漂洗、脱水、浸透、包埋、切片等步骤制成超薄切片进行透射电镜观察。
2.4RFPGFPLC3B融合蛋白示踪自噬形成按照PremoTMAutophagyTandemSensorRFPGFPLC3BKit说明书，每1万细胞中加入2μL转染试剂，孵育16h，将RFPGFPLC3B融合蛋白转染至H9c2细胞。转染成功后进行给药处理，采用激光共聚焦显微镜进行观察。
2.6稻莘治数据用±s表示，计量资料组间比较采用单因素方差分析；统计分析软件使用GraphPadPrism5.0，以P
3结果
3.1人参皂苷Rb1减轻阿霉素引起的细胞损伤阿霉素0，0.5，1，2.5，5，10，20μmolL-1处理24h后，采用CCK8法检测H9c2细胞活力的变化。结果显示，阿霉素在1～20μmolL-1对H9c2细胞活力具有显著的抑制作用，且呈明显的量效关系（图1）。不同浓度的人参皂苷Rb1预处理6h后加入5μmolL-1DOX共孵育24h，采用CCK8法检测细胞活力。结果显示，人参皂苷Rb1可以逆转阿霉素导致的H9c2细胞活力下降，表明人参皂苷Rb1可以抑制阿霉素诱导的H9c2细胞死亡（图2）。
3.3人参皂苷Rb1抑制阿霉素诱导的H9c2自噬活化50μmolL-1人参皂苷Rb1预处理6h加入1μmolL-1DOX共孵育12h后，收集细胞，制备超薄切片，采用透射电镜观察自噬体。与对照组相比，DOX组可以明显观察到自噬结构，人参皂苷Rb1预处理组自噬结构则不明显（图4）。
将RFPGFPLC3B融合蛋白转染至H9c2细胞后，50μmolL-1人参皂苷Rb1和5mmolL-13MA分别预处理6h加入1μmolL-1DOX共孵育12h后，进行荧光观察。与对照组相比，DOX组merge后红色荧光明显增强，提示RFPGFPLC3B融合蛋白多定位于溶酶体或自噬溶酶体内，即自噬流活化（图5）。人参皂苷Rb1预处理与自噬抑制剂3MA预处理组merge后红色荧光减弱，提示其抑制DOX诱导的自噬活化（图5）。
4讨论
[16]OrogoAM，GustafssonB.Therapeutictargetingofautophagy：potentialandconcernsintreatingcardiovasculardisease[J].CircRes，2015，116（3）：489.
[17]KlionskyDJ，AbdelmohsenK，AbeA，etal.Guidelinesfortheuseandinterpretationofassaysformonitoringautophagy（3rdedition）[J].Autophagy，2016，12（1）：1.
[18]WangRX，HeRL，JiaoHX，etal.GinsenosideRb1attenuatesagonistinducedcontractileresponseviainhibitionofstoreoperatedcalciumentryinpulmonaryarteriesofnormalandpulmonaryhypertensiverats[J].CellPhysiolBiochem，2015，35（4）：1467.
[19]WangXF，LiuXJ，ZhouQM，etal.GinsenosideRb1reducesisoproterenolinducedcardiomyocytesapoptosisinvitroandinvivo[J].EvidBasedComplementAlternatMed，2013，2013：454389.