2、学实验室操作规程，具体注意事项如下：1接近患病动物或进行实验操作时，必须穿着工作衣帽，必要时（接触或操作危险材料时），要佩戴口罩、眼罩、穿戴胶靴及手套等。上述衣物在实验结束后需要立即就地消毒清洗；必须携回处理时，要包扎严密，保证安全，防止病原体散播。2实验操作期间，务须严肃认真、聚精会神。操作时，不得进食、饮水和吸烟，勿以手指或其他器物等接触口唇、眼、鼻及面部。手及面部有伤口时，应避免操作危险材料，必要时应涂碘酒，或用胶布包扎伤口或戴防护手套。3危险材料及污染器物的处理（1）使用病理性材料，尤其是危险材料时应严格遵循无菌操作，盛放液体的器皿应轻拿轻放，确保液体不外溢。（2）实验用过的动物尸体
3、、内脏、血液等废弃病料，以及废弃的病原培养物、生物制品等须深埋或经过严格消毒处理（焚烧、煮沸、高压灭菌等）后丢弃到公共垃圾处理场，严禁将未经消毒的危险性材料直接丢弃。（3）用过的棉球、纱布、吸水纸等污物须置于固定容器内统一消毒处理，不得任意丢弃。44）使用后被污染的器械、器具应定点存放，统一清洗、消毒。4意外事故的处理：一旦危险性材料滴出或打翻，或出现其它意外，应立即报告指导教师，以便及时、正确处理。（1）皮肤被扎伤、污染，应立即用2来苏儿（或其他适当的消毒药）洗涤，或2碘酊棉球擦拭，然后75酒精棉球再次涂擦。（2）危险性材料溅入眼中，应立即用清水或5硼酸溶液冲洗，必要时立即就医。（3
4、）危险性物品吸入口时，应用清水或10硼酸溶液漱口，必要时立即就医。（4）衣帽被污染，可用5石炭酸、10福尔马林等浸湿消毒，必要时须用碱水煮洗或高压灭菌。（5）桌面或地面被污染时，应用5石炭酸或10福尔马林或其他适当消毒药液浸湿污染面，经30分钟后拭去洗净。5实验完毕，必须洗手消毒后方可离去。消毒时可先用1-3来苏儿溶液或其他适当消毒药液洗涤，然后在普通水中用肥皂及指刷充分洗刷干净。二、一般要求1实验前应预习实验内容。明确实验目的，复习有关基础知识及操作技术，以免因实验计划不周，徒劳忙乱，影响实验效果。2实验时应做记录。实验时应就实验的题目、内容、方法和结果等做好详细记录，以供日后查阅参考。3
5、遵守实验规程，服从教师指导，尤其应注意外出实验时的组织性和纪律性。4要有谦虚认真、实事求是的科学态度，对任何细微或简单的操作，均不可草率应付。5爱惜药械和仪器。使用药品力求节省，不可浪费；对器械，特别是精密仪器，必须按照教师指导的方法和步骤进行操作，切不可粗心大意。第一章动物传染病学实验基本操作实验一消毒方法及其效果评价实验目的1认识消毒在动物传染病防控中的重要作用。2掌握畜舍、场地、粪便等对象的消毒操作要领。3了解不同对象的消毒效果评价方法。实验概述对于动物养殖场以及病原体污染场所来说，消毒的目的是通过物理性或化学性方法，最大限度地降低环境或畜舍中病原微生物数量，减少疾病在动物个体间或群
7、，因此常用的指示微生物是总肠道杆菌和大肠杆菌，总肠道杆菌数量的降低程度可间接反映其他致病菌数量级的减少。由于许多肠道病毒对化学消毒剂有更强的抵抗力，因此总肠道菌群数并不足以反映病毒、原生动物和寄生虫的状况,从而使总肠菌群数和大肠菌群数作为安全控制指标的科学性受到了挑战。目前，不少研究者正在寻找新的指示微生物或能够直接检测病原微生物的方法。实验材料试剂：生石灰、漂白粉、氢氧化钠、福尔马林、高锰酸钾、环氧乙烷等；碘淀粉、次亚硫酸盐、次亚硫酸盐、氢氧化铵、无菌生理盐水碘淀粉配制方法：将6碘化钾和4可溶性淀粉等量混合，即成为含3碘化钾和2淀粉糊的碘淀粉。器材：喷雾器可选择手动或机动喷雾器，前者常用于小
9、一步实施的化学性消毒奠定了良好的基础。2.化学性消毒是在机械清扫和冲洗的基础上，进一步减少环境中病原微生物的有效方法。实践表明，在上述机械清扫和冲洗工作实施后，再通过化学性药物的喷雾消毒可将环境中病原微生物数量进一步减少90%左右。化学性消毒时常用程序是：按每平方米面积1000毫升计算消毒液用量选用消毒剂并查阅不同消毒店象的推荐使用浓度计算消毒剂原虐或粉剂用量量取消毒剂原液或粉剂置于木制或铁制桶内充分溶解补加清水配制规定浓度的消毒剂过滤除去消毒剂内残渣（防止喷雾器喷嘴堵塞）装入喷雾设备喷雾消毒动物舍喷雾消毒时，建议先地面，然后墙壁，再喷天花板；先由离门远的地方开始，逐渐推移到门口。消毒后开门
10、窗通风30分钟，然后用清水冲刷饲槽。为了防止动物入舍过程中受周围环境污染，在对动物舍消毒的同时，应将附近场院以及患病动物污染的场所和物品也进行消毒，即在基本清扫后按照一般污染地面或场地的消毒方法，喷洒10%20%的石灰乳或10%氢氧化钠溶液。常规消毒方法主要用于场地或地面日常消毒、患病动物留居场所临时应急性消毒、“全进全出”制养殖场消毒以及产房消毒。常用消毒剂包括10%-20%石灰乳、5%-10%漂白粉溶液、2%-10%氢氧化钠溶液等。二、其他消毒方法1.熏蒸消毒：常用于动物舍，在动物进入前、出栏后或疾病发生时的带动物消毒，所用的消毒药品包括福尔马林、乳酸或醋酸等。以福尔马林熏蒸消毒为例的程
11、序是：计算消毒空间,、3按15-50ml/M空间量取36%昌尔马林溶披计算药物用量并加入等量水稀释加热蒸发关闭门窗保持12-24小时开启门窗通风直到室内无强烈刺激性气味【注意事项】福尔马林对皮肤、黏膜有很强刺激性，可引起湿疹性皮炎、支气管炎，甚至窒息，操作时应佩戴口罩、手套。熏蒸消毒时最低室温应为15CO动物舍内缺乏加热源时，可按每立方米空间准备高镒酸钾14g,福尔马林（40%的甲醛溶液）28毫升，然后将福尔马林溶液倒入含高镒酸钾的容器内，关闭门窗，12-24小时后打开门窗通风换气。急需使用的动物舍可用氨蒸气中和舍内的甲醛气味，即按每100立方米加入500g氯化俊、1kg生石灰和750ml水混
13、土壤混合运出掩埋。如无条件将表土运出时，应将表土多加干漂白粉（按1m2面积加漂白粉0.5kg）,将漂白粉与表土混合，加水湿润后原地压平。3粪便消毒：根据污染物类型选用适当的消毒方法。发酵池法适用于饲养大量动物的农牧场，可用于稀薄粪便（如牛、猪粪）发酵，发酵后不丧失粪便的肥料价值。化学消毒法可选用含2-5有效氯的漂白粉溶液、20石灰乳，但由于粪便有机质含量高，会直接影响消毒效果，实践中不常用。掩埋法是将重大疾病病原体或芽孢杆菌类病原体污染的粪便与漂白粉或新鲜的生石灰混合，深埋于地下2m左右，但未经完全杀灭的病原微生物可经地下水散布，应谨慎处理。4污水消毒：污水处理方法有沉淀法、过滤法、化学药品处
15、容器内进行气体熏蒸消毒；环氧乙烷用量和用法是病原体繁殖型按每立方米300-400g，作用8小时；芽胞和霉菌按每立方米700-950g左右，作用24小时。三、消毒效果的检查消毒效果的检查需要根据消毒方法、消毒剂、消毒对象和病原体种类而定，常见方法包括：1机械清除效果检查：主要观察地板、墙壁及舍内设备的清洁程度。2消毒剂选择正确性的检查：检查消毒工作记录表，消毒药种类、浓度、用量和消毒时环境温度。检查消毒剂浓度时可采集剩余消毒液作样品，测定氢氧化钠、甲醛或活性氯的浓度。检查含氯制剂的消毒效果时，可应用碘淀粉法。即用棉拭子沾取碘淀粉混合液，擦拭消毒对象的表面，呈现蓝棕色代表游离氯的存在，着色强度代表
16、游离氯的含量，颜色愈强表明消毒剂浓度愈高。这种颜色可被浸有次亚硫酸盐溶液的棉拭子消退。3.细菌学检查：消毒后的地板、墙壁、墙角以及饲槽等表面，可划出大小为10X10cm的正方形数块。取含有10ml中和剂溶液的试管一支，用灭菌的棉拭子沾取中和剂在每个正方形内擦拭被消毒物体的表面，通过沾取、擦拭、洗涤、压出步骤循环数次，最后将拭子放入中和剂溶液中作用5-10分钟，用镊子拧干弃去，液体经过系列稀释后涂板计数。中和剂主要包括：次亚硫酸盐用以中和漂白粉；0.01醋酸中和碱性消毒剂；1-2氢氧化铵作为福尔马林中和剂；其他消毒剂如克辽林、来苏儿等，若无适当的中和剂，可将棉拭子在灭菌PBS中上下浸洗2次，时
17、间为2-5min,依次从一个管内移入另一个管内稀释，然后分别系列稀释计数。经过系列稀释的样品，分别取0.1ml接种普通营养琼脂或远藤氏培养基，经37培养24小时检查初步结果，48小时后检查最后结果。如在远藤氏培养基上发现可疑菌落时，即用常规方法鉴别菌落。如无肠道杆菌存在时，证明消毒效果良好，若有肠道杆菌生长，说明消毒效果较差。结果与分析消毒药物选择、清扫、检查指标及其意义。思考题1试述消毒的意义和消毒剂种类。2分别列举适用于杀灭芽胞菌、非芽胞菌和病毒的化学消毒药。3试拟定用漂白粉消毒畜舍后的消毒质量检查方案。实验二传染病患病动物尸体的处理实验目的掌握传染病患病动物尸体的运送及处理办法。实验概述
18、人和动物疫情屡屡发生的重要原因之一是缺乏严格的动物尸体管理办法，因此降低疫情突发事件的措施之一就是依法制订并执行相应法规，对患病动物尸体进行严格管理。动物尸体处理不当的危害性包括疾病传播、食品安全隐患及生态环境污染等。例如，疯牛病事件告诫全世界人们，不能再简单地将“动物尸体”废物利用、变废为宝，提示人们不能忽视“动物尸体”的危害和潜在威胁；高致病性禽流感病毒通过禽类尸体传播的事实也已被多次确认。目前已知能够感染人类的病原体达1415种，60以上能在人和动物间交叉感染和传播。这些传染病的病原体都可以通过动物尸体散播，导致疫病流行，甚至危害人类健康。据估计我国每年因动物死亡造成的直接经济损失可达2
19、00-300亿元，死亡动物尸体处理不当将严重冲击正常的经济秩序，扰乱社会安全。同时，未经处理的动物尸体腐烂变质，散发恶臭气味，污染空气。因此，建立动物尸体收集制度，指定专门人员对动物尸体进行处理，禁止非法运输、销售、加工、私自处理，建立和完善动物尸体的无害化处理制度，对传染病的防制和维护公共卫生都具有重大意义。实验材料特制的运尸车（此车内壁衬钉有铁皮，可以防止漏水）、工作服、口罩、风镜、胶鞋及手套；消毒药液、纱布和棉花等。实验方法一、尸体运送尸体运送前，所有人员均应穿戴工作服、口罩、风镜、胶鞋及手套。将尸体各天然孔用蘸有消毒药液的湿纱布、棉花严密填塞，以免流出粪便、分泌物、血液等污染周围环境。
20、然后将尸体装入运尸车，铲去尸体污染的表层土，连同尸体一起运走，并以消毒药液喷洒消毒。运送过尸体的用具、车辆应严格消毒，被污染的手套、衣物、胶鞋等亦应及时消毒。二、尸体处理方法1掩埋法：这种方法虽不够可靠，但比较简单，所以在实际工作中仍较常用。在进行尸体掩埋时，分为以下几步：（1）墓地的选择：选择远离住宅、农牧场、水源、草原及道路的僻静地方；土质宜干而多孔（沙土最好），以加快尸体腐败分解；地势高，地下水位低，并避开山洪的冲刷；墓地应筑有2cm高的围墙，墙内挖一个4m深的围沟，设有大门，平时落锁。（2）挖坑：坑长度和宽度能容纳尸体侧卧即可，从坑沿到尸体表面不得少于1.5-2m。（3）掩埋：
21、坑底铺以2-5cm厚的石灰，将尸体放入，使之侧卧，并将污染的土层、捆尸体的绳索起抛入坑内，然后再铺2-5cm厚的石灰，填土夯实。也可先在坑内放一层0.5m厚的稿草（干树枝，木柴或木屑等亦可），将其点然，趁火旺时抛入尸体，待火熄灭时，填土夯实。2焚烧法：焚烧法是毁灭尸体最彻底的方法。焚烧通常在焚尸坑或焚尸炉中进行。焚尸坑有以下几种：（1）十字坑：按十字形挖两条沟，沟长2.6m,宽0.6m,深0.5m。在两沟交叉处坑底堆放干草和木柴，沟沿横架数条粗湿木棍，将尸体放于架上，在尸体周围及尸体上放上木柴，并倒以煤油，压盖砖瓦或铁皮，从尸体下点火，将尸体烧成黑炭后掩埋在坑内。（2）单坑：挖一长2.5m,宽
22、1.5m,深0.7m的坑，将取出的土堆在坑沿两侧。坑内用木柴架满，坑沿横架数条粗湿木棍，将尸体放在架上，以后处理如上法。（3）双层坑；先挖一长、宽各2m深0.75m的大沟，在沟的底部再挖一长2m,宽lm、深0.75m的小沟，在小沟沟底铺以干草和木柴，两端各留出18-20cm的空隙，以便空气流通，在小沟沟沿横架数条粗湿木棍，将尸体放在架上，以后处理如上法。3化制法：尸体的化制法是处理尸体较好的一种方法，因为这种无害处理可保留许多有价值的畜产品，如工业用油脂及骨、肉粉，但进行尸体化制时要求有一定设备条件。尸体化制应在化制厂进行。修建化制厂的原则和要求是，所出产品保证无病原菌；化制厂人员在工作中没有
23、传染危险；化制厂不能成为传染源，对尸体做到最合理的加工利用；化制厂应建在远离住宅、农牧场、水源、草原及道路的僻静地方，生产车间应为不透水的地面和墙壁，以便于洗刷消毒；生产中的污水应进行无害处理，排水管应避免漏水。化制尸体时，对烈性传染病，如鼻疽、炭疽、气肿疽、绵羊快疫等患病动物尸体可用高压灭菌，对于普通传染病可将尸体切成4-5kg的肉块，煮沸2-3小时。在小城市及农牧区可建立设备简单的废物利用场，处理普通患病动物尸体应尽量做到合乎兽医卫生和公共卫生的要求。4发酵法：尸体的发酵处理就是将尸体抛入专门的尸体坑内，利用生物热的方法将尸体发酵分解达到消毒的目的。这种专门的尸坑是贝卡里氏设计出来的，所以
24、叫做贝卡里氏坑。这种方法最初用于城市垃圾处理，使之转变为混合肥料，后来也用以处理尸体。建筑贝卡里氏坑应选择远离住宅、农牧场、草原、水源及道路的僻静地方。尸坑为圆井形，坑深9-l0m,直径3m,坑壁及坑底用不透水材料做成，可用水泥或涂以防腐油的木料。坑口高出地面约30cm,坑口有盖，盖上有小的活门，平时落锁，坑内有通气管。如果条件许可，坑上修一小屋更好。坑内尸体可以堆到距坑口1.5m处，经3-5个月后，尸体即可完全腐败分解。如果土质干硬，地下水位又低，加之条件限制，可以不用任何材料，直接按上述尺寸挖一深坑即可，然而需在距坑口lm处用砖或石头向上砌层坑缘，上盖木盖，坑口应高出地面30cm,以免雨水
25、流入。思考题1运送传染病患病动物尸体时应注意哪些事项2常用的处理尸体方法共有几种？各述其优缺点。实验三免疫接种技术实验目的1认识免疫接种在动物传染病预防中的重要作用。2了解不同免疫接种方法在动物传染病预防中的应用。3熟悉兽医生物制品的保存、运送和用前检查方法。实验概述疫苗免疫接种的途径是根据病原体侵入门户、在机体内的定居场所、疫苗菌（毒）株的活性、佐剂及其使用等特点，经过动物免疫学试验确定的。不同疫苗的接种途径不完全相同，合理选择免疫途径不仅能充分发挥全身性体液免疫和细胞免疫应答的能力，同时也能大大提高机体局部的免疫应答。在实践中，应严格按照商品疫苗的使用说明和预先制订的免疫程序进行，不能随
26、意更换免疫接种途径。对于特定疫苗具有多种可选择的接种方法时，选择的接种方法则要根据动物群状态、当地疾病流行形式以及养殖场内部可用资源等情况确定。每种接种方法都具有优缺点，生产中可以根据情况灵活选用。实验材料酒精棉球、碘酒、注射器、针头、气雾发生器实验方法一、免疫按种的方法免疫接种的方法很多，主要有注射免疫法、经口免疫法、气雾免疫法等数种。注射免疫法中又可分为皮下接种、皮内接种、肌肉接种及静脉接种等四种。1皮下接种法：马、牛等大动物皮下接种一般采用颈侧部；猪在耳根后方；家禽在胸部、大腿内侧。根据药液浓度和动物大小，一般用16-20号针头，长约1.2-2.5cm，但家禽则应采用针孔直径小于20号的
27、针头。皮下接种优点是操作简单、剂量分布均匀、吸收较皮内接种为快；缺点是剂量大，群体免疫时费时、费力；且疫苗皮下接种的反应较皮内大。大部分常用的疫苗和免疫血清，一般均采用皮下接种。2皮内接种法：马皮内接种采用颈侧、眼睑部位；牛、羊除颈侧外，可在尾根或肩胛中央部位；猪大多在耳根后；鸡在肉髯部位。现用兽医生物制品中仅有羊痘弱毒菌苗为皮内接种，但诊断液皮内接种的应用较多。皮内注射一般用专门注射器，容量2-l0ml，针孔直径19-25号；也可使用蓝心注射器，容量lml。皮内接种的优点是使用药液少，同样的疫苗皮内注射较之于皮下注射反应小。同时，真皮层的组织比较致密，神经末梢分布广泛，特别是猪的耳根皮内比其
28、他部位容易保持清洁。同量药液皮内注射时所产生的免疫力较皮下注射为高。皮内接种的缺点是程序比较繁琐。3肌肉接种法：马、牛、猪、羊肌肉接种，一律采用臀部或颈部；鸡可在胸肌部接种。现有兽医生物制品，除猪瘟弱毒疫苗、牛肺疫弱毒疫苗和多种灭活疫苗以及在某些情况下接种血清可以采用肌肉接种外，其他生物制品一般都不应用此法进行接种。一般使用16-20号针头，长约2.5-3.7cm。肌肉接种优点是药液吸收快、免疫效果可靠、注射方法也较简便；缺点是群体免疫费时、费力，接种部位不当易引起跛行。4静脉接种法：马、牛、羊静脉接种一般在颈静脉部位；猪在耳静脉部位；鸡则在翅下静脉部位。现用兽医生物制品中的免疫血清，除了皮
29、下或肌肉接种外，亦可采用静脉接种，尤其用于急性传染病患畜的治疗。疫苗、菌苗、诊断液一般不作静脉注射。静脉接种优点是应用剂量大、奏效快速，可以及时抢救患病动物。缺点是程序比较繁琐，如用异种动物血清可能引起过敏反应。5经口免疫法：分饮水免疫和喂食免疫两种，前者是将可供口服的疫（菌）苗混于水中，动物通过饮水而获得免疫，后者是将可供口服的疫（菌）苗用水稀释后拌入饲料，动物通过饮食而获得免疫。经口免疫时，应按动物头数和每头动物平均饮水量或饮食量，准确计算需用的疫（菌）苗剂量。免疫前一般需要停饮或停喂半天，以保证饮喂疫（菌）苗时每头动物都能饮用一定量的水或吃入一定量的料。应用冷清水稀释疫（菌）苗，混有疫
30、（菌）苗的饮水和饲料也要注意掌握温度，一般以不超过室温为宜。已经稀释的疫（菌）苗应尽快饮喂。此法可用于猪肺疫弱毒菌苗和鸡新城疫弱毒菌苗等免疫接种。本法具有省时、省力的优点，适用于大群动物免疫；缺点是由于动物饮水量或吃饮量不同，每头动物体内摄入的疫（菌）苗量有差异，因而容易出现群体免疫不均匀现象，不适合初次免疫。6气雾免疫法：此法是通过压缩空气，借助于气雾发生器将稀释疫（菌）苗喷射出去，使疫（菌）苗形成直径1-l0m的雾化粒子均匀地浮游在空气之中，动物将雾化粒子吸入肺内刺激产生的免疫。气雾免疫装置由气雾发生器（即喷头）及动力机械组成。压缩空气的动力机械，可因地制宜，利用各种气泵或用电动机、柴油
31、机带动空气压缩泵。雾化粒子大小是影响免疫效果的最重要因素，大小为1-10m的粒子为有效粒子，气雾发生器能产生70以上有效粒子时为合格。测定雾化粒子大小时，取一干净玻板，周围涂以凡士林油，在玻板中央滴一小滴机油，用拇指和食指转动玻片使其均匀分布。将玻片在距离喷头10-30cm处迅速通过而使雾化粒子吹于机油面上，然后将玻片液面朝下放于凹玻片上，在显微镜下观察，移动视野，用目测微尺测量其大小，并计算其有效粒子的比率。每次使用气雾发生器时最好进行粒子大小测定，合格后方能使用。（1）室内气雾免疫法：此法需有一定的房舍设备。免疫时菌苗用量主要根据房舍大小而定，可按下式计算：菌苗用量=DXA/TXV式中
33、，朝动物头部方向喷射。操作人员要随时走动，使每一动物都有吸入机会。如遇微风，还须注意风向，操作者应站在上风，以免雾化粒子被风吹走。喷射完毕，让动物在圈内停留数分钟即可放出。进行野外气雾免疫时，操作者更需注意个人防护，应穿工作衣裤和胶靴，戴大而厚的口罩，如出现症状，应及时就医。本法优点是省时、省力，免疫效果优良，适于动物群体免疫；缺点是疫（菌）苗用量大、容易诱发呼吸道感染，尤其在呼吸道疾病多发季节。二、免疫接种用生物制品的保存、运送和用前检查1兽医生物制品保存：各种生物制品应保存在低温、阴暗及干燥的场所，死菌苗、致弱菌苗、类毒素、免疫血清等应保存在2-15，防止冻结；弱毒疫苗，如猪瘟兔化弱毒疫苗
34、、鸡新城疫弱毒疫苗等应在0以下保存。2兽医生物制品运送：要求包装完整，防止碰坏瓶子和散播活的弱毒病原体，并尽快送到保存地点或预防接种的场所。弱毒疫苗应放在装有冰块的广口瓶内运送，以免其性能降低或丧失。3兽医生物制品用前检查：各种兽医生物制品在使用前，均需详细检查，不得使用没有瓶签、瓶签模糊不清、瓶塞不紧、过期失效或玻璃破裂的制品。三、动物免疫接种注意事项1接种前健康检查：待免疫接种的动物营养和健康状况必须良好。营养状态差、患有寄生虫病或其他慢性病的动物免疫接种时副反应较大，应尽量避开。同时，从接种安全性和保证接种效果考虑，应对接种动物进行临床检查，包括体温检查。2接种后动物护理和临床观察：动物
37、。实验材料试剂：甘油、氯化钠、碱性磷酸钠、酚红、酸性磷酸钠、蒸馏水、鸡蛋、福尔马林、酒精、碘酒、乙醚等病料保存试剂的配制方法130甘油缓冲盐水溶液纯中性甘油30ml氯化钠0.5g碱性磷酸钠1.0g0.02酚红1.5ml中性蒸馏水加至l00ml混合后，在151b*高压灭菌器中灭菌30分钟。250甘油缓冲盐水溶液：纯中性甘油150ml氯化钠2.5g酸性磷酸钠0.46g碱性磷酸钠10.74g中性蒸馏水50ml混合分装后，在151b*高压灭菌器内灭菌30分钟。310福尔马林溶液：取福尔马林10ml加入蒸馏水90ml即可。4饱和盐水溶液：取一定量的蒸馏水加入纯氯化钠，不断搅拌至不能溶解为止，然后用
40、或刀片烙烫心肌表面，然后用灭菌外科刀在烙烫处刺一小孔，用灭菌吸管或注射器吸出血液，盛于灭菌试管中。（2）淋巴结及内脏：将淋巴结、肺、肝、脾及肾等病变部位各取1-2cm3小方块，分别置于灭菌试管或平皿中。若为病理组织切片材料，应将典型病变部分及相连健康组织一并切取，组织块大小每边约2cm左右。（3）脑、脊髓：如采取脑、脊髓作病毒检查，可将脑、脊髓浸入50甘油盐水液中或将整个头部割下。包入浸过0.1升汞液的纱布或油布中，装入铁桶中送检。（4）肠：将灭菌棉签插入肠内，可采取肠管粘膜或其内容物；也可用线扎紧一段肠道两端，将两侧多余肠管切断，置于灭菌器皿内。（5）胎儿：将流产后的整个胎儿，用塑料薄
41、膜、油布或数层不透水的油纸包紧。（6）乳汁：将乳房附近的毛刷湿，用消毒药水洗净乳房，弃去最初所挤的34股乳汁，然后采集l0ml左右乳汁于灭菌试管中。（7）皮肤：取大小约10Xl0cm2的皮肤一块，保存于30%甘油缓冲溶液中，或l0饱和盐水溶液中，或10福尔马林液中。（8）胆汁：用灭菌吸管或注射器刺入胆囊内吸取胆汁，盛于灭菌试管中。（9）小动物及家禽：将整个尸体包入不透水塑料薄膜、油纸或油布中即可。（10）供显微镜检查用的脓、血液及粘液抹片：先将材料置于载玻片上，再用另一载玻片抹之。组织块、致密结节及脓汁等亦可压在二张玻片中间，然后沿水平面向两端推移即成。用组织块做触片时，持小镊将
42、组织块的游离面在载玻片上轻轻涂抹即可。二、病料的保存诊断结果的正确性，一方面取决于病料采集的代表性、取样部位和采集方法，另一方面就是病料的新鲜程度。因此，病料的保存具有重要的意义。常用的保存方法如下：1病理组织材料：常用10福尔马林液或95-100酒精等保存用于病理学检查的组织脏器，保存液用量为标本的10倍左右。但应注意：用10福尔马林液固定组织24小时应重新换液；神经组织需固定于10中性福尔马林溶液内，中性福尔马林溶液的配制方法是在福尔马林液中加510碳酸镁。2细菌检验材料：用于细菌学检查的病料常用灭菌的液体石蜡、30甘油缓冲盐水或饱和氯化钠溶液保存。供细菌学检验的液体样品，可用封闭的巴斯德
43、毛细玻管或试管运送。肠道应先清除肠内粪团，用灭菌盐水清洗后，将肠管置于装有上述保存液的试管中即可。3病毒检验材料：一般用灭菌的50甘油缓冲盐水或鸡蛋生理盐水溶液保存。4血清学检验材料：固体材料可用硼酸或食盐处理，液体材料每毫升需加入3-5石炭酸溶液1-2滴。三、病料的记录、包装和运送方法1病料送往检验室时应附病料送检单，该单需复写三份，其中一份存根，两份寄往检验室，待检查完毕后，退回一份。2病料的包装和运送：（1）液体病料，如粘液、渗出物、尿及胆汁等最好收集在灭菌的细玻璃管中，管口用火焰封闭，将封存的玻管用废纸或棉花包裹，装入较大的试管中运送。鼻液及脓汁等物，可用棉签蘸取后置于灭菌试管内，
45、际意义。2现有疑似猪瘟病猪尸体，以及疑似脑炎病马尸体各一具，试分别叙述其病料采取、包装和运送方法。第二章动物细菌病诊断技术I教师预备试验及材料准备I实验目的1确定实验的可行性及实验条件。2实验材料的准备。实验概述多杀性巴氏杆菌为两端钝圆、中央微凸的革兰阴性短杆菌，大小为0.2-0.4mK0.4-23多单个存在。病料涂片用瑞氏、姬姆萨或美兰染色具有两极浓染现象，但其培养物的两极着色现象不明显，这些特点是该类疾病诊断的要点之一。本菌为需氧及兼性厌氧菌，在加有血清或血液的培养基中生长良好，37培养24小时，菌落为灰白色、光滑、湿润、隆起、边缘整齐的中等大小菌落；有荚膜的光滑型菌落具有荧光性，但不具有
46、溶血性；在麦康凯和含胆盐培养基上不生长。按照荚膜抗原差异可将多杀性巴氏杆菌分为A、B、D、E、F5个型，但根据菌体抗原将其分为116型，二者结合构成该菌不同的血清型，这些血清型的致病性和宿主特异性有明显差异。多杀性巴氏杆菌对多种动物和人均有致病性，牛、猪、兔、绵羊、山羊、鹿、骆驼、马、驴、犬、水貂、鸡、火鸡、鸭、鹅、鸽等都可感染。发病动物临床症状和病理学变化具有较明显的特点。急性型一般呈败血症经过，病菌可存在于患病动物的各组织器官、体液、分泌物和排泄物中。由于致病性明确、分离培养简便、细菌特性明显、鉴定方法简单，因此可利用该菌作模式菌演示动物细菌病诊断技术。实验材料1菌种：禽源多杀性巴氏杆菌2
47、实验动物：12周龄健康商品代肉鸡、小白鼠（6-10周龄BALB/c雌鼠）实验方法1病鸡准备取对数生长期的多杀性巴氏杆菌液0.1ml，肌肉注射于12周龄左右的商品肉鸡，感染后，观察其临床症状及病理变化。2病鸡检查、剖检和病料涂片检查按照常规病鸡检查方法检查、剖检病鸡，无菌取肝脏，将其断面涂布于载玻片，自然干燥后通过瑞氏染色，镜检菌体应为两极着色现象。3病原菌分离与培养无菌取急性死亡鸡心血、肝脏病料分别接种血液琼脂平板、营养肉汤、麦康凯培养基等培养基，37培养24h，血液琼脂平板上该菌生长出稍突、白色、半透明、奶油状、不溶血的菌落；营养肉汤中轻度混浊；麦康凯培养基上不生长。4病原菌耐药性试验
48、将分离纯化的细菌涂布于血清琼脂平板上，贴上相应的药敏试纸，37培养24h观察药敏试纸抑菌圈大小。5病原菌生化鉴定6病原菌血清学鉴定优化反应的最佳条件7.病原菌致病力检测将分离纯化的细菌接种营养肉汤，37C培养1824h,按10-5、10-6、10-7、108等不同滴度稀释后腹腔注射小白鼠各5只（0.1mL/只），设生理盐水对照5只，同时进行细菌计数。了解菌株对小白鼠的致病性及其接种剂量。实验五细菌病病鸡剖检及细菌学检查实验目的1认识尸体剖检及细菌学检查在畜禽细菌病诊断中的作用。2掌握禽细菌病病畜剖检的一般原则。3掌握禽霍乱病鸡的剖检和细菌学检查方法。实验材料1实验动物:多杀性巴氏杆菌感染病鸡
49、2试剂:革兰染色染料（草酸铵结晶紫、革兰氏碘液、95乙醇、蕃红染液）、美兰染液、瑞氏染液；鲜血营养琼脂培养基、血清营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基4器材：解剖刀、骨钳、镊、解剖板、毛刷、无菌容器、剪刀、镊子、接种环、酒精棉、酒精灯、显微镜、载玻片等实验方法1病鸡的外观检查仔细观察病鸡的临床症状。全身羽毛的状态，是否有光泽，有无污染、蓬乱、脱毛等现象；泄殖腔周围的羽毛有无粪便黏污，有无脱肛和血便；营养状况及死鸡尸体变化（尸冷、尸僵、尸体腐败）；皮肤及脸部有无肿胀和外伤；冠和肉髯的颜色、厚度、有无痘症、脓痂；口腔和鼻腔有无分泌物及其性状，两眼的分泌物及虹彩的颜色；关节及脚趾有无肿胀或异常；骨骼有无
50、增粗和骨折；触摸胸腹部是否变软或有积液；足底、鳞片等是否有异常。2.病鸡的内部检查剖检如是活鸡，可采用颈侧动脉放血方法处死。最好用水或2%-5%的来苏尔将尸体表面及羽毛润湿，防止剖检时有绒毛和尘埃飞扬。同时尽量要多剖几只鸡，进行对比和统计病变分析。（1）皮下检查尸体仰卧（背位），切开大腿和腹部之间皮肤，用力掰开两腿，将大腿向外侧转动，使髋关节脱臼，将鸡固定于解剖盘内；横向切开腹底部皮肤，一手压腿与翅膀，另一手抓住皮肤沿胸骨嵴部由下向上纵行剥离皮肤，将皮肤向后翻开，暴露皮下组织与肌肉。观察皮下脂肪含量，皮下血管状况，全身肌肉有无出血和水肿，胸肌的丰满程度、颜色，观察龙骨是否弯曲和变形。22）内
51、脏检查按照一定的顺序检查各内脏的病理变化。在后腹部横行剪开腹部肌肉和腹膜，顺切口分别沿左右侧肋软骨剪至胸背部，然后一手压住躯干，另一手抓住胸骨向上掀开，暴露体腔。在不触及的情况下，注意观察各脏器的位置、颜色、浆膜的情况（是否光滑、有无渗出物，血管分布情况）；体腔内有无液体，各脏器状况及其之间有无黏连。检查胸、腹气囊是否增厚、浑浊，有无渗出物；气囊内有无干酪样团块，团块上有无霉菌菌丝。腹腔器官的检查观察了内脏器官整体状况后，进行各组织器官的具体检查。在肝门处剪断肝与心包囊、气囊之间的联系，拉提出肝、肌胃、腺胃于腹腔，并用剪刀剪开各连接处（非器官），直至将直肠从泄殖腔拉出，在幼鸡泄殖腔的背面可看到
52、腔上囊（成年鸡已退化），小心剪开与其相连的组织，摘取腔上囊。检查腔上囊的大小，观察其表面有无出血，然后剪开腔上囊检查黏膜是否肿胀，有无出血，皱襞是否明显，有无渗出物；而后剪断胆管，取出肝脏，纵行切开肝脏，检查肝脏切面及血管情况，肝脏有无变性，坏死点及肿瘤结节；检查胆囊大小、颜色等。在腺胃和肌胃交界处的右方，找到脾脏；检查脾脏大小、颜色，表面有无出血点和坏死点，有无肿瘤结节；剪断脾动脉，取出脾脏，将其切开，观察脾脏切面及脾髓状况；剪开腺胃、肌胃，检查腺胃内容物的性状、黏膜及腺乳头有无充血和出血（用剪刀背侧轻轻刮），胃壁是否增厚，有无肿瘤；观察肌胃浆膜上有无出血，肌胃的硬度，检查内容物及角质膜的情
53、况，再撕去角质膜，检查角质膜下情况，观察有无出血和溃疡；从前向后检查十二指肠、小肠、盲肠和直肠，观察各段肠管有无充气和扩张，浆膜血管是否明显，浆膜上有无出血、结节或肿瘤；然后，沿肠系膜附着部剪开肠道，检查各段肠内容物的性状，黏膜有无出血和溃疡，肠壁是否增厚，肠壁上的淋巴集结和盲肠起始部的盲肠扁桃体是否肿胀，有无出血、坏死，盲肠腔中有无出血或土黄色干酪样栓塞物，横向切开栓塞物，观察其断面情况；检查卵巢发育情况，卵泡大小、颜色和形态，有无萎缩、坏死和出血，卵巢是否发生肿瘤；剪开输卵管，检查黏膜情况，有无出血及渗出物。产蛋母鸡，在泄殖腔右侧，常见一水泡样结构，这是退化的输卵管（公鸡应检查睾丸的大小和
54、颜色，观察有无出血、肿瘤，两者是否一致）；检查肾脏颜色、质度，有无出血及花斑状条纹，肾脏和输卵管有无尿酸盐沉积。胸腔器官的检查纵行剪开心包囊，检查心囊液的性状，心包膜是否增厚和浑浊；观察心脏外型，纵轴和横轴的比例，心外膜是否光滑，有无出血、渗出物、尿酸盐沉积、结节和肿瘤；将进出心脏的动、静脉剪断，取出心脏，检查心冠脂肪有无出血点，心肌有无出血和坏死点，剖出左右两心室，注意心肌切面的颜色和质度，观察心内膜有无出血。从肋骨间剥离出肺脏，检查肺的颜色和质度，有无出血、水肿、炎症、实变、坏死、结节和肿瘤。头颈部器官的检查拉直颈部，剪刀沿口腔上面口角往左侧剪，直至与前面已剪开的皮肤会合，检查胸腺颜色或是