2、已知抗凝血酶物质，含有的生物活性成分的活性特别强，而且还有非凡的渗透能力，它本身能直接渗透皮肤深层，加速细胞新陈代谢，疏通毛细血管，改善面部微循环，抑制和减少黑色素细胞的生长目前有养殖价值和医用价值的蛭类种类较多.在医学上应用较广泛的是日本医学蛭,宽体金线蛭和茶色蛭.目前我国中草药市场上经营的主要蛭类为宽体金钱蛭.1,日本医蛭日本医蛭;体狭长,稍扁,略呈圆柱形.体长36厘米,宽0.40.5厘米分布.俄罗斯,日本也有大量分布2,宽体金线蛭宽体金线蛭;是金线蛭属中个体较大,分布较广的一种.身体扁平,略呈纺锤形.体宽大,长613厘米,大的可达20厘米,体宽1.32厘米两排钝齿生活在湖泊，稻田和
3、河流中，不血，以水中软体动物，浮游生物或水生昆虫为食我国的大部分地区都有分布3,茶色蛭茶色蛭（Whitmaniaacranuiata),又名尖细金线蛭，牛鳖.身体比金线蛭略小,扁平,呈柳叶形.背部为茶色,有细密的绿黑色斑点组成的纵线5条,其中以中间1条纹线最宽,背中纹两侧的黑色素斑点呈新月形,前后连接两条波浪形斑纹.腹面平坦,呈淡黄色,有不规则的暗绿色斑点散布.主要分布于我国黄河下游的河流,湖泊中,食性较杂,但最喜欢吸食牛血.4,菲牛蛭菲牛蛭是最近两年来市场上比较紧缺的水蛭品种之一,目前在药材市场问不出价格来,因为在市场上多以活体和冷冻体出售,目前体内水蛭素含量比较高的水蛭品种之一,
4、一般出口较多,多用于提取水蛭素,其食性比较杂,尤以血液为主,但是我国适宜菲牛蛭养殖基地的地点仅限福建,广西,广东,海南,云南等热带地区,其它比较寒冷的地区要是能解决冬季冬眠问题则也可以养殖.第3章,养殖水蛭应该注意的问题1,防逃,要在池塘外围砌防逃墙,墙的高度应在8090厘米左右,其中地下部分应在30厘米以下,墙的内侧用水泥,沙子抹成麻面,(墙面越光滑越容易逃跑).2,多放养水生植物,应以水葫芦和浮萍为主,因为水蛭怕阳光直射,它们即是田螺的饲料,又可为水蛭遮光,水蛭还可以在上面产卵.3,每亩水田一次性应投入90公斤左右的田螺,田螺应选择体形大的,田螺繁殖能力很强,可持续为水蛭提供饲料来
5、源.另外,每周应为水蛭投放一次畜生血块,但血块中不能含盐,(切记).为不影响水质,能直接投入水中,可将血块放在木板上,使其浮在水面上,水蛭嗅到味后便可爬上去采食,但血块不能超过两天才捞出来,要尽早处理残食.4,引种后不得直接将水蛭投放到池塘里,因为在运输过程中水蛭自身将产生出一层黏膜作为保护层,应在池塘周边选择一块有阴凉潮湿的地方,将水蛭放到那里,使自然爬进池塘,以免减少死亡.5,水蛭繁殖时是在覆盖物下边的泥土中,并不是在水中繁殖.在繁殖期如水满过产卵平台7天左右,水蛭卵因缺氧而死亡,要注意观察,以确保养殖成功.6,收获期一般在10月份,将打捞出的水蛭应按大,中小分开,大的要选出来放到留
9、.0-1.5g，1.5-2.0g，大于2.0g)和孵化温度处理6组(22，24，26，28，30和32)；结果表明茧重1.0-2.0g时具有最高孵化数和孵化率，最适孵化温度为26-28。在体重、年龄和应激刺激实验中，设置亲蛭体重处理3组(5-10g、10-15g和15-20g)，蛭龄处理3组(8月龄、2年龄、3年龄和4年龄)和应激处理3组(操作应激1次、2次和3次)；结果表明10-15g34)，4种饵料(新鲜牛血、活体牛蛙、饲料NP-2002a和饲料NP-2002b)，秋冬和春夏2个季节，越冬期4种实验措施，3个初始体重组(0.04g)，(0.04-0.10g)和(0.10g)
11、，其中日本医蛭最多，达28个，并且吸血蛭类的蛋白数要大于非吸血蛭类，而3种不同产地菲牛蛭间表达蛋白无差异；最佳提取方法是低温下丙酮抽提，抗凝血物质有无与水蛭食性有着直接关系，非吸血蛭类无抗凝活性，而吸血蛭类具有较高抗凝活性，同时人工养殖对菲牛蛭抗凝物质等药用成分无影响。本研究分析不同地域分布的野生和不同食性的养殖菲牛蛭营养成分，并与其它4种水蛭作比较。结果表明水蛭具有高蛋白和低脂肪，吸血蛭类的氨基酸总含量明显高于非吸血蛭类，并含有丰富的脂肪酸，非吸血蛭类的脂肪酸组分种类明显高于吸血蛭类，但吸血蛭类的不饱和脂肪酸含量明显高于非吸血蛭类，Zn、Mn和Fe元素的含量较高且较合理，有毒元素Pb和Cd
13、体内抗凝血物质含量的动态变化情况，同时优化了菲牛蛭活体、干体、唾液腺分泌物中的抗凝血活性物质的提取方法和检测方法。1由于菲牛蛭抗凝血活性物质提取方法的多样性，我们选择了一些具有代表性的方法(蒸馏水直接提取、有机溶剂去除杂质蛋白、盐析等方法)进行提取以体外抗凝血活性为指标，通过定性(凝血酶直接滴定法)和定量(ChromonymTH为生色底物的比色法)的方法检测后，选定了最适合提取抗凝血活性物质的方法。同时优化了提取工艺和检测方法。2人工养殖条件下，由于菲牛蛭取食机会比较多，所以菲牛蛭的生长动态曲线，类似于连续生长动态曲线。在不同的养殖时期，随着菲牛蛭年龄的增加，每条菲牛蛭体内的抗凝血物质含量
14、逐渐增加，但增长速度比菲牛蛭体重增加速度要低，因此单位质量菲牛蛭体内的抗凝血物质含量反而逐渐减少。由于菲牛蛭体内的抗凝血物质含量在前三个月增长速度比较快，所以考虑到养殖成本，提取抗凝血物质的菲牛蛭应该最好是三月龄以上的菲牛蛭。3菲牛蛭是一种重要的中药材，在加工菲牛蛭时候，一般采取直接晒干的方法，而本实验研究结果显示，菲牛蛭体内抗凝血活性物质含量在晒干过程中会急剧下降，所以如果是利用菲牛蛭提取抗凝血物质时候，应该直接利用菲牛蛭的活体进行快速处理，而不要采取晒干的方法进行处理。4菲牛蛭体内的抗凝血物质大多分布在头部，当吸取血液后，会有一小部分抗凝血物质随体液流到全身，这导致空腹时候的菲牛蛭和饱
15、食时候的菲牛蛭的尾部抗凝血物质含量不一样。在空腹时候，菲牛蛭尾部抗凝血物质含量比较低；而饱食时候，菲牛蛭尾部抗凝血物质含量显著高于空腹时候(P<0.05)。5菲牛蛭吸取血液后，会有一部分抗凝血物质随吸取的血液流到全身，利用一种特殊的诱吐剂处理后，使菲牛蛭将体内部分抗凝血物质分泌出来，再进行高效提取，结果提取的抗凝血活性物质含量也比较高，这样就得到一种既能够取出这一部分抗凝血物质，又能够不处死菲牛蛭的方法，可以对菲牛蛭进行重复利用，可以大大缓解菲牛蛭的供求矛盾，保护菲牛蛭这种中药材。作者汪波学科专业水生生物学授予学位硕士授予单位中山大学导师姓名吕军仪学位年度2007关键词人工