动物实验研究范文

导语：如何才能写好一篇动物实验研究，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

【关键词】结肠损伤；肠管吻合术；造口术

1材料及方法

1.1结肠损伤腹腔感染动物模型制作

健康新西兰白兔50只，体重2.0～2.5kg。用氯氨酮(20mg/kg)肌肉注射麻醉，无菌操作下由中下腹正中线剖腹，切口长约4～6cm，进腹后轻缓找出盲肠，在盲肠中部用14号套管针头贯穿三处挤出肠内容物后放回腹腔，关腹。盲肠穿孔后动物予以统一摄食和饮水。于术后24小时随机分为实验、对照两组，每组25只。

1.2结肠切除吻合术模型制作

对照组：入腹后探查到穿孔处肠段，将损伤肠段切除，注意保护肠管良好的血供，吻合术采用“0”线双层间断缝合，后壁10～12针，前壁12～14针，两侧端行半荷包缝合，术毕检查吻合口通畅无出血、无漏针，关闭肠系膜裂孔以防内疝。腹腔用0.4%替硝唑液约10ml保留腹腔，关闭腹腔。

1.3结肠切除吻合加近端结肠造口术模型制作

实验组：损伤段肠管切除方法同对照组，完成肠吻合术后，距吻合口近端6～8cm处，选结肠系膜无血管区肠段提出腹壁外，将腹壁肌层用“4”线水平褥式缝合1针，结肠近、远端与腹膜腹壁肌层用“1”线各间断缝合3针，将结肠固定在腹壁上，防止肠管滑脱入腹腔，造成狭窄、梗阻或出血。术后用4号圆刀片切开结肠前壁，使粪便流出，碘伏纱布保护造瘘口防止感染。腹腔用0.4%替硝唑液约10ml保留腹腔内，关闭腹腔。

1.4手术后治疗方案

计量资料以均值±标准差(±s)表示，作单因素方差分析，分类资料作χ2检验数据用SPSS14.0统计软件处理，P

1.5实验结果

两组动物手术顺利，术后均能迅速蹲立位。对照组18例存活，7例因肠吻合口瘘于术后72～168小时死亡。实验组24例存活，1例因严重消耗于术后240小时死亡，无吻合口瘘发生。两组白兔血清中TNFα、IL8、血糖(Glu)、胰岛素(INS)、C肽、AMY、CK、CKMB、AST、ALT检测值与术前对照、组间对照均无显著性差异，无明显统计学意义。

2讨论

盲肠是兔结肠重要组成部分，长约50～60cm，其病理生理、形态学特点、解剖学特点与人体左半结肠相近，但在功能上要比人类复杂的多，其细菌含量高，一旦损伤极易造成腹腔感染。因此，选择白兔盲肠制作模型更具代表性。

成功制作结肠损伤伴腹腔感染动物模型是本研究课题的关键条件。本组采用改良盲肠结扎针刺穿孔法(CLP)法Flammand［3]的方法制作结肠损伤伴腹腔感染动物模型，并于结肠损伤24小时后手术，开腹探查见腹腔内肠穿孔处肠壁肿胀明显，并可见肠内容物外溢及脓苔附着，证实结肠损伤伴腹腔感染动物模型制作成功。

文献报道TNFα、IL8对人类严重创伤后并发症的发生有预警作用［4]，本项研究对实验动物按实验标准要求每天抽血监测，连续10天，结果显示两组白兔血清中血糖(Glu)、胰岛素(INS)、TNFα、IL8、C肽、AMY、CK、CKMB、AST、ALT检测值只有3例升高，与术前对照、组间对照均无显著性差异，无明显统计学意义。

本项研究表明结肠损伤段肠管切除吻合加结肠造口术安全可靠。由于结肠壁薄，血运较差，肠内容物流动性差，其细菌含量高，易胀气，损伤后周围污染重等原因，结肠破裂缝合后愈合能力差，容易导致吻合口瘘和腹腔感染。本项研究对照组7例吻合口瘘并腹腔严重感染死亡，尸体解剖切取心、肝、肺、肾病理学检查，病理证实吻合口瘘并脓肿形成，心、肝、肺、肾脏器有一定程度病理形态学改变及器官功能障碍。实验组1例于术后240小时死亡，死于严重消耗。对实验结果进行分析，P

参考文献

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[关键词]牙周炎；动脉粥样硬化；C反应蛋白；白细胞介素-6；白细胞介素-1β

[中图分类号]R781.4[文献标志码]A[doi]10.3969/j.issn.1000-1182.2012.03.021

AnanimalexperimentstudyontheeffectofperiodontitisonatherosclerosisWangZhou1,ZhangMingzhu1,YuZhuo2,ShuiYanqing1,DingYun1,LeiYayan1.（1.Dept.ofOralMedicine,TheAffiliatedStomatologyHospitalofKunmingMedicalUniversity,Kunming650031,China;2.Dept.ofCardiovascularMedicine,TheFirstAffiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity,Kunming650031,China）

[Abstract]ObjectiveTomakeananimalperiodontitisandatherosclerosiscompoundmodel,andtostudytheeffectsofperiodontitisonatherosclerosis.Methods36Japanrabbitswererandomlydividedintofourgroups:Includingperio-dontitismodelgroup,periodontitisandatherosclerosiscompoundmodelgroup,atherosclerosismodelgroupandcontrolgroup.PeriodontitismodelwasinitiatedbyligatingflossaroundteethcervicalandoralinoculatingwithPorphyromonasgingivalis（P.gingivalis）.Atherosclerosiswasestablishedbysingleiliacarteryofballoon-injuredrabbit.Histopathologicalchangeofinjurediliacarterywasobservedunderopticalmicroscopeafterhematoxylin-eosionstain.ElasticavanGieson-

stainedsectionswereusedforthemorphometricanalysis.Wemeasuredintimalandmediallesionareasiniliacarterycross-sectionsaswellastheintimal/medialratio（I/M）.WealsoanalyzedP.gingivalis16SrDNAamplificationwith

目的:探讨小儿珠珀散治疗感冒的药物效应，为临床应用提供参考。方法:针对感冒过程中儿童可能出现的发热、咳嗽、痰多、消化不良等症状，分别利用脂多糖(LPS)致热家兔，氨水诱发小鼠咳嗽，酚红排泌法、半固体营养糊小鼠肠推进实验探讨小儿珠珀散对症治疗的作用。结果:小儿珠珀散可降低小鼠耳肿胀程度、家兔体温上升幅度;延长小鼠咳嗽潜伏期，减少咳嗽次数，减少小鼠气管酚红排出量;促进小鼠胃排空，增加小鼠小肠推进率(P均<0.05)。结论:小儿珠珀散可缓解感冒过程中的多种症状。

关键词：

小儿珠珀散感冒咳嗽发热胃肠动力

WangMinLiPengfeiLiYaqiMaQuantaoWangJingkangZhangChiQiuMinyiZhangCaijuanYanQizhiWangTingZhaoBaosheng

SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine;HongKongBaohetangPharmaceuticalCo.,Ltd.;BeijingInstituteofChineseMedicine,BeijingUniversityofChineseMedicine;

Abstract：

Keyword：

感冒一年四季均可发生，但以冬春季节为多[1]。现代医学认为感冒为多种病原体引发的急性上呼吸道感染，可引发鼻、咽、喉、扁桃体等黏膜充血水肿，上皮细胞破坏、浆液、黏液及脓液渗出产生鼻塞、咳嗽等上呼吸道炎性症状，并有头痛、恶寒发热等全身症状，主要病原体为病毒，其中鼻病毒占30%～40%，冠状病毒占10%～15%[2]。针对普通感冒病毒，当前尚无特效药，临床一致认为普通感冒对症治疗即可，无需服用抗微生物药物。儿童由于呼吸系统及免疫系统发育不成熟，更容易受到病毒侵袭，为感冒高发群体。临床上治疗感冒的药品种类繁多，主要是成人型感冒药，儿童专用型感冒药相对匮乏，但由于儿童身体机能与成人区别较大，不宜将成人型感冒药直接用于儿童。市售儿童感冒药主要为化学药物，不合理使用极易引发严重后果[3]。这些儿童感冒药主要为减充血剂、抗组胺药、解热镇痛药、镇咳药、祛痰药等，而复方制剂通常为上述两类或几类药物合用，不良反应较多，使用不当会对儿童机体造成较大的损伤[4-5]。

中国传统医学认为感冒多为外感六、时疫所致。风邪为六之首，流于四时之中，与不同季节之邪气相合伤人，临床可见风热、风寒、暑湿等证。小儿体性纯阳，外感风邪，易入里化热，热多于寒，风寒证也易寒从热化，或热为寒闭，故小儿外感以热证多见。风邪伤人，先从口鼻而入，肺为华盖，首当其冲，感冒病位在肺卫，肺主皮毛，其宣发之功使皮毛得以温润，皮毛受病，肺失宣发，则为感冒。又因小儿肺脏娇嫩，不耐邪扰，肺气失宣，肃降无权，水失通调，聚湿成痰，痰阻气道。脾为后天之本，主运化水谷，小儿脾常不足，饮食不知自节，感邪之后，肺病及脾，脾失健运，乳食停滞，积而不化，阻滞中焦。故小儿感冒初起以发热、恶寒、鼻塞、流涕、喷嚏、咳嗽、头痛等为主要表现，并伴随有感冒夹痰、食滞之证[6]。故治疗小儿感冒需以解表散热为主，治疗兼夹证则在解表的基础上分别配合化痰、消导之法，虚弱者可采用扶正解表法[7]。

本实验受试药物小儿珠珀散由保和堂儿童感冒治疗验方珠珀猴枣散演变而来，具有多年儿童感冒治疗史，复方由13味中药组方而成，其中金银花、防风、薄荷疏风散热;猴枣、天竺黄清心化痰;珍珠、琥珀、茯苓、钩藤安神定惊;冰片醒神开窍;麦芽、神曲消食化积，健脾和胃;甘草祛痰止咳，补脾益气。诸药合用，共奏祛风清热、安神定惊、化痰顺气、开胃消积之功效[8-10]。本实验拟利用经典的药理学实验方法探讨小儿珠珀散的解热、止咳祛痰作用及其对消化道的影响。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物

美国癌症研究所(ICR)小鼠，体质量18～22g，雌雄各半，购于斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号:SCXK(京)2016-0002;清洁级新西兰白兔，雌雄各半，2.0～2.5kg，购于北京兴隆实验动物养殖中心，许可证号:SCXK(京)2016-0003，饲养于北京中医药大学屏障环境动物室，许可证号:SYXK(京)2016-0038。

1.1.2药品和试剂

小儿珠珀散(香港保和堂制药有限公司，实验剂量依据临床儿童用药设定);醋酸地塞米松(天津力生制药股份有限公司，批号1605019);沐舒坦(上海勃林格翰药业公司，批号A42044);咳必清(国药集团容生制药有限公司，批号16090711);健胃消食片(江中药业股份有限公司，批号16120095);阿司匹林泡腾片(阿斯利康制药有限公司，批号H32026201)。二甲苯(北京化工厂，批号20170506);羧甲基纤维素钠(CMC-Na,Whatman，批号BS0308);酚红(Sigma，批号51N00120);碳酸氢钠(国药集团化学试剂公司，批号20160819);可溶性淀粉(国药集团，批号20170414);石蜡油(北京鼎国生物技术有限公司);安琪高活性酵母(安琪酵母股份有限公司)。

1.1.3仪器

YLS-25A型电动耳肿打孔器(济南益延科技发展有限公司);ME104E型分析天平(METTLERTOLEDO);YLS-7C型足趾容积测量仪(济南益延科技发展有限公司);FLUOstarOmega全自动多功能酶标仪(BMGLABTECH);MNT-150型游标卡尺(上海美奈特实业有限公司);980型医用超声雾化器(上海新天缘医疗用品有限公司);ST5000型pH计(奥豪斯仪器有限公司);BiofugePrimo型离心机(美国Thermoscientific);兽用体温计(山东尚农电子科技有限公司)。

1.2方法

1.2.1用药剂量

小儿珠珀散儿童最大用量为1.8g/d，实验用动物均为成年动物，因此用药剂量按照成年人推算，拟定儿童体质量为20kg，成人体质量为60kg，实验用药拟按照儿童用药3倍计算，实验剂量换算为5.4g/d，经换算得小鼠等效剂量为0.9g/kg，家兔等效剂量为0.36g/kg。

1.2.2小儿珠珀散抗炎作用研究

小鼠适应性饲养1周后，按体质量随机分为6组，即正常组、模型组、地塞米松组(1.90mg/kg)、小儿珠珀散高剂量组(1.80g/kg)、中剂量组(0.90g/kg)、低剂量组(0.45g/kg)，每组16只。受试药物均以0.5%CMC-Na混悬，灌胃给药，0.1mL/10g，每日1次，连续7d，正常对照组及模型组灌胃等量CMC-Na。实验前禁食不禁水12h，末次给药1h后，移液器吸取二甲苯20μL均匀涂抹于右耳(两面)，0.5h后，颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用电动耳肿打孔器于左右耳相同部位取直径8mm的耳片，称质量，观察各组差异，并计算肿胀度及肿胀抑制率。肿胀度(mg)=右耳片质量-左耳片质量;肿胀抑制率(%)=(模型组肿胀度-给药组肿胀度)/模型组肿胀度×100%。

1.2.3小儿珠珀散祛痰作用研究

小鼠适应性饲养1周，按体质量随机分为5组，即正常对照组、沐舒坦组(20mg/kg)、小儿珠珀散高剂量组(1.80g/kg)、中剂量组(0.90g/kg)、低剂量组(0.45g/kg)，每组16只，雌雄各半。受试药物均以0.5%CMC-Na混悬，灌胃给药，0.1mL/10g，每日1次，连续7d，正常组灌胃等量CMC-Na。末次给药30min后，腹腔注射0.5%的酚红溶液0.1mL/10g,30min后处死动物，背位固定，沿颈部正中剪开皮肤，剥离气管周围组织，暴露气管，自甲状软骨下及气管分支处分别结扎，剪下气管，放入盛有2mL5%的碳酸氢钠溶液的EP管中，静置30min。酶标仪测定546nm波长处OD值。做酚红标准曲线，根据标准曲线计算气管酚红排泌量。

1.2.4小儿珠珀散止咳作用研究

1.2.5小儿珠珀散解热作用研究

家兔适应性饲养3d，适应性测定家兔体温:将涂有石蜡油的电子体温计插入家兔直肠内6cm(在6cm处用胶带固定，确保插入的深度一致)，待稳定后记录肛温。选取基础温度在38.5℃～39.5℃，且波动在0.4℃内的家兔纳入实验。选取符合标准的家兔共50只，雌雄各半，按给药剂量随机分为5组:模型组、阿司匹林组(0.13g/kg)、珠珀散高剂量组(0.72g/kg)、中剂量组(0.36g/kg)、低剂量组(0.18g/kg)，每组10只，受试药物均以0.5%CMC-Na混悬，灌胃给药，10mL/kg，每日1次，连续7d，模型组灌胃等体积CMC-Na。末次给药前测定基础体温，并于给药后40min，耳缘静脉注射LPS200ng/kg(1mL/kg)，于注射后0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0h检测体温，计算各组家兔体温差(致热后体温-基础体温)。

1.2.6小儿珠珀散促胃肠运动作用研究

小鼠适应性喂养1周，按给药剂量随机分为5组，即正常组、吗丁啉组(5.50mg/kg)、小儿珠珀散高剂量组(1.80g/kg)、中剂量组(0.90g/kg)、低剂量组(0.45g/kg)，每组16只。受试药物均以0.5%CMC-Na混悬，灌胃给药，0.1mL/10g，每日1次，连续15d，正常对照组灌胃给予等量CMC-Na溶液。参考文献报道[11]，实验前禁食不禁水24h，末次给药后1h，灌胃营养性半固体糊(10gCMC-Na，溶于蒸馏水250mL中，分别加入奶粉16g、糖8g、淀粉8g和墨汁2mL，搅拌均匀，配制成300mL(300g)黑色半固体营养糊，每只小鼠灌胃0.5mL。20min后，脱颈椎处死动物。打开腹腔，结扎贲门、幽门，取出胃，称质量(胃全质量)，沿胃大弯剪开，洗净胃内容物，称质量(胃净质量)，计算胃排空率;分离肠系膜，剪取幽门至回盲部的肠管，置于平板上，轻轻拉成直线，平铺于白纸上，分别测量从幽门到回盲部和从幽门到墨汁前沿的距离，计算小肠推进率。胃排空率(%)=[灌胃量-(胃全质量-胃净质量)]/灌胃量×100%;小肠推进率(%)=墨汁推进长度/小肠总长度×100%。

1.3统计学方法

应用SPSS22.0软件，计量资料以±s表示。若符合正态分布，采用t检验，若不符合正态分布，采用非参数检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1小儿珠珀散对小鼠耳肿胀度的影响

与正常对照组比较，模型组小鼠耳肿胀度增加(P<0.01)，表明模型建立成功;与模型组比较，各给药组小鼠耳肿胀度均减少(P<0.01)，但量效关系不明显。小儿珠珀散高、低剂量组肿胀抵制率较高，与地塞米松作用相近，表明小儿珠珀散对二甲苯引起的小鼠耳肿胀具有一定的抑制作用，见表1。

表1小儿珠珀散对小鼠耳肿胀的影响(n=16)

2.2小儿珠珀散对小鼠气管酚红排泌量的影响

与正常对照组比较，沐舒坦可以显著增加小鼠气管酚红排出量(P<0.01)，小儿珠珀散不同剂量均可显著增加小鼠气管酚红排出量(P<0.01)，并表现出一定的量-效关系，但酚红排出促进作用低于阳性药沐舒坦(P<0.05)，见表2。

表2小儿珠珀散对气管酚红排泌量的影响(n=16)

2.3小儿珠珀散对小鼠咳嗽的影响

与模型组比较，咳必清可延长小鼠咳嗽潜伏期(P<0.05)，减少咳嗽次数(P<0.01)。小儿珠珀散低剂量可延长小鼠咳嗽潜伏期，减少咳嗽次数(P<0.05)，其延长咳嗽潜伏期作用与咳必清相近;中剂量减少小鼠咳嗽次数(P<0.01)与咳必清较为接近，但对潜伏期延长作用不明显;高剂量表现出延长咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数的趋势，与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3小儿珠珀散对小鼠咳嗽的影响(n=16)

2.4小儿珠珀散对家兔体温的影响

与模型组比较，阿司匹林在1～4h均可抑制家兔体温升高(P<0.05)。小儿珠珀散高剂量在3～5h可抑制家兔体温升高(P<0.05);中剂量在2～5h具有抑制家兔体温升高的作用(P<0.05);低剂量在1.5h以及5h时与体温变化与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。小儿珠珀散与阿司匹林比较，起效较慢，表明小儿珠珀散有一定的抑制LPS引发的家兔发热的作用。见表4。

表4小儿珠珀散对家兔发热的影响(n=10)

2.5小儿珠珀散对小鼠胃肠推进作用的影响

与正常对照组比较，吗丁啉可增加小鼠胃排空率和小肠推进率(P<0.05)。小儿珠珀散低剂量可增加小鼠胃排空率和小肠推进率，作用与吗丁啉相近(P<0.05);小儿珠珀散高、中剂量增加小鼠胃排空率(P<0.05)，对小肠推进促进作用不明显。见表5。

表5小儿珠珀散对小鼠胃肠动力的影响(n=16)

3讨论

小儿珠珀散中多味药物均为临床常用药，现代药理研究已证明组方中多味药物对感冒具有一定的治疗作用。谢新华等[12]研究表明，金银花单用具有一定的解热作用，并初步探索其解热机制。KuangY等[13]发现甘草多种成分均可有效降低氨水诱咳动物的咳嗽次数，亦有研究表明神曲中多种消化酶对消化不良具有一定的治疗作用。小儿珠珀散通过合理组方，可针对性治疗儿童感冒过程中出现的多种症状。

感冒通常被认为是上呼吸道急性炎症，呼吸道分泌多种炎症产物，即为痰液[14]。痰液可刺激呼吸道黏膜，引发咳嗽，加重感冒病情。咳嗽是机体正常的保护反应，使机体排出病原物，但频繁剧烈的咳嗽可能会造成支气管痉挛，加重肺部疾病[15]。同时由于病毒、细菌等外源性致热原侵入机体刺激致热原细胞产生和释放内生致热原，刺激机体体温调节中枢，升高体温[16]。持续高热，会威胁患者生命安全，应及时进行干预。儿童往往由于高热不退，出现食欲不振，消化不良等情况[17]。

二甲苯可诱导组胺、激肽及纤维蛋白溶解酶等炎症介质释放，引起局部毛细血管通透性增加、急性渗出性炎性水肿等，中药新药抗炎实验中常以二甲苯为致炎剂评价药物抗炎作用[18];祛痰实验利用酚红为指示剂，在祛痰药的影响下，支气管分泌液增加，呼吸道黏膜排出的酚红越多，支气管中酚红浓度越高[19];止咳实验中采用氨水雾化吸入刺激小鼠副交感神经系统，引发咳嗽反射[20]。发热实验常选用内毒素刺激家兔，使其体温调节中枢的调定点上移[21];胃肠蠕动实验中常采用营养性半固体糊模拟食物在小鼠胃肠道的消化作用。本实验中，小儿珠珀散可降低小鼠耳肿胀度，抑制炎症反应;可增加小鼠气管酚红的分泌量，具有显著的祛痰作用;同时小儿珠珀散可有效减少氨水刺激小鼠咳嗽的次数，说明其具有一定的止咳作用;还具有抑制LPS引起的家兔体温升高、促进小鼠胃排空、增强小肠推进的作用。

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【摘要】

目的:通过卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖及动物荷瘤实验探讨siRNA沉默Her2/neu基因的表达效果。方法:靶向Her2/neu的siRNA经脂质体LipofectAMINE2000介导转染到SKOV3中，通过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2/neu基因表达的SKOV3/siRNA细胞株，通过RTPCR和免疫组化方法检测Her2/neu基因抑制效果，运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖水平并将SKOV3/siRNA细胞接种到裸鼠皮下检测荷瘤情况。结果:建立了稳定抑制Her2/neu基因表达的细胞株SKOV3/siRNA，RTPCR和免疫组化结果显示Her2/neu基因表达受到较强抑制，MTT检测结果显示SKOV3/siRNA组细胞增殖较SKOV3明显下调（P

【关键词】Her2/neu基因RNA干扰卵巢肿瘤

1材料和方法

1.1材料SKOV3细胞株购自上海细胞所，McCoy’s5A改良培养基、胎牛血清为Gibco公司产品（SKOV3细胞在37℃50mL/LCO2饱和湿度下培养）;BALB/c系雌性裸小鼠(14只，8周龄，质量20～25g)，购自上海实验动物中心;脂质体LipofectAMINE2000、总RNA提取试剂TRIzol购自Invitrogen公司;逆转录试剂盒购自Promega公司;TaqDNA聚合酶购自华美生物工程有限公司;siRNA载体、上、下游引物由上海生工合成;免疫组化试剂盒SAP9102和Her2/neu小鼠抗人单克隆抗体（mAb）购自北京中杉金桥生物技术有限公司;四甲基偶氮唑蓝（MTT）为Sigma公司产品。

1.2.1人卵巢癌细胞株SKOV3细胞培养与siRNA转染对数生长期SKOV3细胞按1×105/孔移至6孔板以含100mL/L胎牛血清的McCoy’s5A改良培养液培养。实验对照组不转染siRNA，转染试验组转染siRNA质粒。细胞80%融合时进行转染。转染按照LipofectAMINE2000说明书进行，4h后更换完全培养液，48h后更换含嘌呤霉素的完全培养液筛选培养，每3～4d换液，约20d后筛选成活并完全汇合的细胞，传代培养。转染组细胞株命名为SKOV3/siRNA。

1.2.2RTPCR检测Her2/neu基因mRNA的表达提取各组SKOV3细胞的总RNA，按逆转录试剂盒说明逆转录成cDNA，逆转录体系25μL。随后行PCR反应，以βactin为内参，Her2/neu上下游引物为5′TGCGGCTCGTACACAGGGACTT3′和5′TGCGGGAGAATTCAGACACCAACT3′，反应体系为25μL，产物大小420bp，βactin大小500bp。10g/LTAE琼脂糖凝胶电泳检测。

1.2.3免疫组化检测p185蛋白的表达将细胞分别接种在置有无菌处理过盖玻片的6孔板中，细胞融合80%时收获细胞爬片，采用免疫组化检测p185蛋白的表达，通过SAP9102试剂盒检测，Her2/neumAb稀释度为1∶100，DAB显色，细胞质或膜出现棕褐色为阳性染色，阴性对照片用PBS代替Her2/neumAb。免疫组化半定量分析采用病理科医学彩色图像分析系统（ImageProPlus）:在光镜(×400)下随机选取40个染色较好的视野，细胞染色阳性部位的颜色深浅及范围以平均积分光密度值（IOD）表示，该值越大，p185蛋白表达量越多。

1.2.5裸鼠卵巢癌移植瘤模型的建立采用常规培养细胞移植法，实验分SKOV3/siRNA实验组和SKOV3对照组，取对数生长期的SKOV3/siRNA、SKOV3细胞，分别制成1×1010个/L的细胞悬液0.1mL，用1mL注射器接种于每只裸鼠背部皮下，每组7只鼠。观察肿瘤生长情况，分别于接种后35、45、55、65、75d测量2组瘤体积，用游标卡尺测量肿瘤3个方向的直径，分别记为a，b，c，按公式V=πabc/6计算瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。

1.2.6统计学处理采用统计学软件SPSS13.0分析，实验数据以x±s表示，两两比较采用t检验。

2.1siRNA对Her2/neu基因的抑制RTPCR检测结果表明siRNA可以有效沉默Her2/neu基因mRNA的表达，SKOV3/siRNA组Her2/neu基因mRNA的表达明显弱于SKOV3组（图1）。

图1siRNA对Her2/neu基因表达的影响（略）

M:DNAmarker;1:SKOV3;2:SKOV3/siRNA.

2.2干扰后SKOV3细胞p185蛋白的表达免疫组化半定量分析结果显示SKOV3/siRNA细胞P185蛋白的表达明显减弱（图2），其细胞染色阳性部位平均积分光密度值（IOD:416.2±89.4）只有SKOV3组（IOD:192.6±58.4）的46.3%。两组IOD值比较，差异有统计学意义（P

图2转染前后2种细胞爬片免疫组化结果比较（×1000）（略）

A:SKOV3细胞株的细胞膜可见强烈的Her2棕黄色膜反应;B:SKOV3/siRNA细胞株细胞膜棕黄色膜反应明显减弱.

2.3MTT细胞增殖结果MTT检测结果表明靶向沉默Her2/neu基因后，细胞增殖下调，SKOV3/siRNA的生长曲线明显比SKOV3生长曲线右移，其生长速度明显慢于SKOV3组，二者在2、4、6、8、10d的A值比较，差异均有统计学意义（P

图3siRNA处理后SKOV3生长曲线（略）

图4裸鼠荷瘤实验肿瘤生长曲线（略）

Her2/neu基因又称cerbB2，是种原癌基因，主要在胚胎发生时开始表达，成年后在少数正常组织中低表达或不表达，而在多种恶性肿瘤中有不同程度的Her2/neu异常表达，尤其在乳腺癌（44%）、卵巢癌（20%～40%）等组织中存在着扩增和（或）p185的高表达状态。主要包括胞外区、跨膜区、胞内区3个部分，其中胞外区富含半胱氨酸，含2个配体结合域;跨膜区起锚定作用;胞内区具有内在酪氨酸激酶活性，且含自身酪氨酸磷酸化位点[3]。Her2/neu是表皮生长因子受体（EGFR）家族中的一员，易与EGFR家族其他成员形成异二聚体，激活自身酪氨酸激酶活性产生强烈的致瘤作用。参与抑制细胞凋亡，促进肿瘤细胞存活;上调血管内皮生长因子(VEGF)和血管通透性因子，促进肿瘤新生血管生成，增加肿瘤细胞的侵袭力，破坏机体组织抗侵袭屏障等。因此，Her2/neu基因被认为是上皮细胞起源的肿瘤治疗的有效靶点之一[4]，同时还认为检测Her2/neu基因的表达可提供一项有效的临床预后指标[5]。本研

究中建立了稳定抑制Her2/neu基因表达的SKOV3细胞株，实验结果显示转染后的SKOV3细胞Her2/neu基因的表达受到明显抑制，RTPCR和免疫组化的结果共同验证了抑制的效果，MTT结果显示抑制Her2/neu基因后，转染组细胞增殖也有明显下调，说明抑制Her2/neu基因表达后，SKOV3细胞的恶性生物学行为得到一定控制，为动物体内荷瘤试验提供一定体外实验基础。

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骨关节炎(Osteoarthritis)是一组有不同病因但有相似的生物学、形态学和临床表现的疾病。该病不仅发生关节软骨损伤，还累及整个关节，包括软骨下骨、韧带、关节囊、滑膜和关节周围肌肉，最终发生关节软骨退变，纤维化，断裂，溃疡及整个关节面的损害。

本病的病理过程是以应力较高部位的关节软骨接触面广泛纤维化为特点，并伴有软骨下骨的骨质象牙化和硬化，关节边缘常常出现骨赘形成和骨的改建活动，关节滑膜囊的纤维化，与常见的滑膜非特异性炎症[1]。但是骨关节炎的致病机理仍然是一个充满争议和需要继续探索的课题，为了澄清骨关节炎发病和病程进展过程中，在关节组织中细胞分子水平的变化，这就需要使用实验动物模型观察。通过动物实验可以确定软骨基质的降解方式以及滑膜、软骨中的生物合成作用是如何被抑制的，同时还可以用来评价潜在的拮抗药物，为发现新的抗骨关节炎药物奠定基础。现就常用的骨关节炎实验动物模型的制备方法，应用优缺点和意义讨论如下。

1关节腔内注射化合物诱导骨关节炎

2骨关节炎制动造模方法

保证关节的正常活动和负重才能维持关节软骨的构成成分、结构和功能。固定肢体使关节制动可以诱发关节软骨萎缩，致使软骨变薄、水肿，蛋白聚糖含量下降，结构改变以及合成数量的下降，同时还有胶原合成及含量的增加。因为这些软骨改变与我们所见的人类骨关节炎病理改变相似，所以这种模型特别用于软骨退变过程的研究。但在着重软骨基本形态学的研究差别上，这一模型的使用逐渐减少。骨关节炎的软骨中，软骨细胞灶性增殖呈细胞团或细胞巢，通常活跃至骨关节炎的后期，而与此对比的固定关节的观察发现，软骨细胞没有这种变化，不形成灶性细胞团却常出现坏死，特别是在夹板固定牢靠无任何活动的时候。软骨的这种改变可能是软骨细胞缺乏营养造成的，因为制动肢体缺乏运动和负重。而且，如果允许制动的肢体小范围活动，那么软骨退变的范围将明显减少。

3自发性骨关节炎模型

许多种类的动物可以自发形成骨关节炎，如拉布拉多犬，德国牧羊犬和比格犬，可随年龄增加发生骨关节炎，但在此模型中，早期的病理形态变化特征和人的骨关节炎相比，出现了更为严重的滑膜炎和关节囊的纤维化。许多品系的小鼠都可以出现自发性骨关节炎，较常用的有：斑点杂交鼠，STR/ORT，C57Bl品系小鼠。该模型骨关节炎病程的典型特征包括：关节间隙变窄，骨赘形成，局部软骨损伤，染色显示的蛋白聚糖减少。恒河猴和食蟹猴都有较高的自发性骨关节炎的发病率，其流行病学和病理学改变与人相似，其关节的大小可以满足放射学、组织学和生物化学的研究，另外对实验研究广泛使用的平行对照而言，这种动物也容易找到与实验组年龄相匹配非骨关节炎的对照。但缺点是此动物活动范围大又有较长的生命跨度，研究可能要持续许多年，还可能受到无法控制的环境因素以及伦理和资金条件的限制。

4前交叉韧带横断模型（ALCT模型）

Stoop等[4]切断Wistar大鼠的膝关节前交叉韧带，于第2、3、14、28、70天处死动物，取膝关节软骨常规组织学及免疫组化检测变性的Ⅱ型胶原，在前交叉韧带切断后软骨损害最早改变发生于表层带的软骨细胞和软骨基质。术后14天出现表层带软骨细胞数量减少，剩余的软骨细胞肿胀，表层带纤维化。术后4周、10周，上述改变更明显。在纤维化的区域，变性的Ⅱ型胶原降解产物染色明显增加，胶原酶分裂位点染色与变性胶原分布相同，但染色明显较淡；在胶原发生纤维化前及没有出现纤维化的部位不能检测到胶原的损害。Myers证实在开放手术中使用电烧止血和关节内冲洗与不使用止血方式的手术相比，滑膜炎的发生率由原来的69％下降到24％。但开放性横断前交叉韧带后会造成早期软骨增生，并在4~5年后形成骨关节炎，以及包括软骨全层侵蚀及关节内的多种改变[8]。

常用的Hulth造模法，切除兔膝关节前后交叉韧带及内侧副韧带，切除内侧半月板，破坏家兔膝关节正常的力学轴线，由正常的外翻10度变为内翻，关节最大压力由正常的外侧胫骨平台转移到内侧胫骨平台与股骨内髁关节承担，关节的负重面减少，局部关节软骨所承受的压应力相对增加，韧带的破坏加重关节的不稳定，从而形成了关节软骨变形的起始环节。

5骨关节炎负重模型

家兔全身麻醉后，在右后腿膝关节内侧作切口至关节腔，推开髌骨、髌韧带，屈曲膝关节，暴露前交叉韧带并切断，以前抽屉实验确认断裂后，逐层缝合，3天后以石膏将左腿固定于腹部，右腿负重，每日跑步训练2小时，术后1周伤口络合碘护理，分笼饲养，每兔一笼。

6动物半月板切除骨关节炎模型

半月板是膝关节的缓冲装置，是位于股骨和胫骨的髁部之间的半月形纤维软骨盘。半月板的作用在于承重，并使压力分布均匀；增加关节稳定性；作用并且通过滑液的表面扩散，有助于关节软骨的营养；并且具有保护关节软骨的作用。Lozoya等[7]切除Wistar大鼠膝半月板的30％~50％，致膝关节不稳，关节载荷传导紊乱，所有大鼠均出现关节软骨退行性变，软骨表面粗糙、侵蚀、纤维化，甚至完全缺失。Colombo及同事切除兔外侧半月板的同时还切除外侧副韧带及籽骨，此方法造成的家兔骨关节炎的病变一致性好，并在后来的研究中被广泛用来评估众多抗骨关节炎药物在软骨病变进程中的药效作用。

7其他的动物骨关节炎模型

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【关键词】关节炎，类风湿；动物模型；实验；综述

doi：10.3969/j.issn.2095-4174.2015.12.019

类风湿关节炎（rheumatoidarthritis，RA）是一种以滑膜的持续增生、软骨及骨破坏的病理学特征为主的自身免疫性疾病，主要以慢性炎症、多发关节肿胀、疼痛及其引起的关节僵硬，甚至功能丧失为临床表现[1]。其病因和发病机制尚不明了。本文对几种常用的类风湿关节炎模型的建立、发病机制及特点做一综述，为更好地研究其机制以及寻求防治方法提供依据。

1佐剂性关节炎（adjuvantarthritis，AA）模型

AA是比较经典的RA动物模型[2]。弗氏佐剂包括不完全佐剂（incompleteFrennd'adjuvant，IFA）

和完全佐剂（Freund'scompleteadjuvant，CFA）。

CFA是将减毒卡介苗（BCG）10mg经80℃水浴灭活1h，与高压灭菌的液体石蜡和无水羊毛脂的混合液1mL充分乳化混匀制成。此法多用大鼠。

1.1造模方法在消毒后的大鼠足跖皮下注入已经乳化混匀的CFA，浓度为10mgmL-1，每侧注射0.1mL。原发病变主要是注射部位的炎症表现，踝关节及足跖部红肿，可侵及足垫、全足。继发病变则呈现对侧踝关节和前足肿胀，呈不断加重趋势，耳朵和尾根部出现“关节炎”结节，这些表现与人RA类似[3]。病理改变表现为关节周围及软组织的炎症，可造成滑膜增生，血管翳形成，软骨破坏，后期关节间隙变窄，关节粘连，以致形成不可逆的改变。

1.2发病机制AA的发病机制主要为分子模拟理论。关节软骨的自身抗原Hsp60与结核杆菌中一个相对分子量为65ku热休克蛋白（Hsp65）结构高度相似，可以通过分子模拟或交叉反应，被同一株T细胞克隆识别，进一步引起自身的免疫反应[4]。有研究表明，T淋巴细胞免疫功能异常在RA的发生和发展中起着重要作用。AA造模成功后，检测指标中CD3+、CD4+、CD8+下降，CD4+/CD8+升高，表现有明显的免疫功能紊乱现象，提示T细胞亚群紊乱是AA大鼠的病理机制之一[5]。另一方面，细胞因子在AA发病的免疫调节中也起着核心的作用[6]。有研究证实，AA的发病过程中有氧化应激反应发生[7]，发病过程中产生大量的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）[8]。Stoop等[9]研究表明，佐剂的选择可影响Th1和Th17细胞的总比例，而不一定影响细胞因子的产生以及疾病的发生率和严重的水平。

2胶原诱导性关节炎（collagen-inducedarthritis，CIA）

模型

1977年，Trentham等[10]根据动物可被Ⅱ型胶原诱导产生免疫性关节炎这一理论，初次成功建立了由Ⅱ型胶原诱导的大鼠实验性关节炎模型。该模型随着研究的深入进一步发展和完善，目前造模动物多选用SD或Wistar大鼠、DBA/l或C57BL/6

小鼠。

CIA模型是一种免疫炎症模型，主要表现为多发性末端关节炎。通过抗原刺激引起自身免疫反应诱导关节炎产生，并形成抗CⅡ抗体，且可持续发展，并且更加符合人类疾病特点，包括关节红肿、滑膜增生、炎性细胞浸润、血管翳形成、关节软骨和骨破坏等，与RA临床表现更相似，是研究以及筛选治疗RA药物的理想模型。

2.1造模方法以DBA/1小鼠为例，首先将CⅡ（Ⅱ型胶原）溶于0.1molL-1的醋酸中，浓度为2gL-1，在4℃环境中过夜后与等量CFA充分乳化，制得CⅡ乳剂（即每毫升含1mgCⅡ和1mgBCG），可于冰上配制，现配现用。免疫时，在小鼠尾根部、背部多点进行皮内注射0.1mL，21d后，对每只小鼠进行腹腔内注射CⅡ乳剂0.1mL，达到加强免疫的目的。

2.2发病机制经研究发现，该模型建立的主要原因是CⅡ在免疫系统的高敏感性[13]。CIA的机制主要通过体液及细胞免疫完成，依靠于自身

T细胞和B细胞的激活。有研究发现，CIA的发生和发展主要由Th1、Th2这两种T细胞共同调节，正常状态下处于平衡状态，而初次免疫和加强免疫后小鼠外周血出现Th1/Th2亚群失衡状态[14]。此外有研究表明，IL-1β、TNF-α在CIA模型建立过程中起重要的诱导作用，且在病变过程中血清

IL-1β、TNF-α水平持续升高[15-16]。

2.3特点CIA模型与人RA的相似之处包括易侵犯肢体远端关节、关节滑膜增生、血管翳形成、软骨与骨的破坏，以及免疫反应等。目前，CIA是公认的RA最佳模型，在免疫学、治疗效果评价及药物筛选等方面的研究中，CIA模型为研究者提供了极大帮助。但是，CIA是在一定实验条件下形成的疾病，不会出现病情的波动和复况，以及类风湿因子和抗核抗体，也没有RA的皮下结节、浆膜炎、血管炎等表现，这表明CIA仍有一些不足之处，仍然需要继续探索更加符合RA特征的动物模型。

3卵清蛋白（ovalbumin，OVA）诱导的关节炎模型

1962年由Dumonde和Glynn首次建立[17]。OVA作为一种外源性抗原已被广泛运用于主动致敏建立如支气管哮喘等病的动物模型[18]。

3.1造模方法用生理盐水溶解OVA配成浓度为20mgmL-1的溶液，与等量CFA混匀，在动物肩胛部及背部5个部位皮下注射，每周1次，连续注射3周，第4周于双膝关节腔内注入OVA5mg[19]。

3.2发病机制OVA在关节内作为抗原长期存在，刺激滑膜产生抗体并形成抗原-抗体-C3复合物，激活补体造成局部滑膜炎症反应。另一方面，T细胞引起的免疫反应，使炎性细胞浸润于滑膜，使血管翳逐步形成，进而出现软骨及骨破坏[20-21]。

3.3特点该模型方法简单，易制备，适合较大病变关节的研究，比如兔、羊等动物。其病理过程与人RA相似，但免疫学指标有一定的差异，因此该模型有其局限性。

4Ⅱ型胶原抗体诱导性关节炎（collagen-antibody-

inducedarthritis，CAIA）

CAIA是抗体诱导性关节炎模型中较常用的模型之一，多采用C57BL/6小鼠，通过注射Ⅱ型胶原抗体诱导模型的发生，后期注射脂多糖以增加疾病的发生率及严重程度。该模型被用来研究基因、年龄、性别，以及效应细胞在关节炎终末阶段的发病机制中的影响。发病部位组织学检查发现大量中性粒细胞浸润，伴随着骨与软骨的侵蚀，血管翳形成以及纤维蛋白沉积。

研究表明，CAIA的发生与MHC等位基因相互独立，而CIA则主要依赖于MHC等位基因，其中Aq分子是最易感的等位基因之一。这表明，CAIA与MHC限制性T细胞以及T细胞依赖性

B细胞无关[22]。

5自发性关节炎模型

转基因动物是指将外源重组基因整合在动物受体基因组内，将其遗传给后代的动物。常用的转基因动物模型有K/BxN模型、人TNF-α转基因模型、IL-1Ra基因敲除小鼠模型、SKG模型、TS1×HACⅡ模型等。

5.1K/BxN小鼠模型K/BxN小鼠模型是KRN转基因小鼠（携带有TCR基因）与非肥胖糖尿病（non-obesediabetes，NOD）小鼠杂交的后代[23]。在3周龄左右，小鼠可出现对称性关节炎，最开始表现为关节肿胀，进一步发展为关节损伤、畸形（远端关节表现最明显）；组织病理学表现为滑膜及血管增生，血管翳形成，软骨及骨破坏等。

该模型血清中存在大量自身抗体，可造成关节破坏。其主要发病机制是T细胞受体可特异性识别自身葡萄糖-6-磷酸异构酶（glueose-6-phosphate-isomearse，GPI），导致针对GPI的自身抗体（anti-GPI）分泌增加。该抗体属于致病性抗体，从而诱导小鼠发展为RA。GPI在体内还可同时诱导T细胞、B细胞产生抗体，导致关节及软骨损

5.2人TNF-α转基因模型1991年Probert等通过修饰3'端的UTR区域，使C57BL/6小鼠高表达人TNF-α，从而建立此模型[25]。小鼠在4周左右可出现自发性慢性炎症，主要表现为对称性关节炎、血管翳增生、关节软骨及骨破坏等，这些都与RA临床表现相似，同时还可有小肠透壁性炎症，生长缓慢等症状。病理表现主要为大量纤维组织增生、软骨损伤及骨质溶解；新骨形成的缺乏和生长发育迟缓也见于这些小鼠，可能是由钙稳态受损与肠道对钙吸收的减少而造成。该模型成模率100%，且模型的同质性高，并有利于衡量TNF-α抑制剂相比其他治疗方法的优势，表明TNF-α抑制剂的作用取决于病变初始阶段，可明显减轻

损害[26]。

5.3IL-1受体拮抗剂（IL-1Ra）基因敲除小鼠模型IL-1是由多种细胞类型产生的促炎细胞因子，包括活化的单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和滑膜细胞，这些都是在RA中导致关节炎症及破坏的重要因素。天然存在的IL-1Ra对限制过度的炎症反应有至关重要的作用。IL-1Ra缺失突变（敲除）小鼠与BALB/c小鼠的后代自发形成关节炎，其病变类似于RA，表现为炎症细胞浸润、滑膜细胞增殖、血管翳形成、软骨破坏与骨质溶解，还有关节中类风湿因子以及IL-6、TNF-α等炎症因子表达升高。与人RA相比，在IL-1Ra基因敲除小鼠模型中T细胞的作用同样是关节炎发病机制的核心[27]。

5.4SKG模型SKG小鼠是通过选择具有隐形突变基因的BALB/c小鼠培育出来的自发关节炎模型，其病理机制主要通过T细胞介导，小鼠在

8周左右即出现对称的足趾及踝关节肿胀，呈慢性进行性发展，后期多发生关节强直[28]。关节外的病变可表现为肺炎、皮炎和淋巴结节，其表现与RA类似，适合研究RA发展与T细胞的关系。研究表明，SKG模型的发生发展与TCRVβ2和Vβ8.2的T细胞克隆型关系密切[29]。

5.5TS1×HACⅡ模型将HATⅡ转基因小鼠与TS1小鼠培育的后代可自发关节炎，其机制为TS1小鼠通过转基因能够表达针对HACⅡ小鼠产生流感病毒PR8HA特异性的TCR，主要表现为长期的关节肿胀，关节外病变表现为间质性肺炎。研究表明，TS1×HACⅡ模型是由CD4+CD25+调节性T（Treg细胞）细胞识别新的自身抗原通过全身性分布的抗原呈递细胞表达的。可见，CD4+

CD25+Treg细胞在预防自身免疫性疾病中发挥关键作用[30]。

除此以外，还有油诱导的关节炎、链球菌诱导的关节炎、佐剂角叉菜胶诱导的关节炎、蛋白多糖诱导的关节炎等，这些模型目前运用较少，主要应用于某一方面的研究，尚不够成熟，仍需进一步的研究观察[31]。

在对RA动物模型的长期研究过程中，随之发展的是对RA病因及发病机制的进一步认识。但是仍存在一些问题：①RA动物模型均是在一定实验条件下，针对某单一方面的因素建立起来的，不能全面反映RA遗传、感染、免疫等特点；②不同的RA动物模型，其发病机制和病理特点的异同有待进一步阐释；③RA动物模型中一些指标如关节肿痛、晨僵、发热等不适不能够被客观地体现出来，因此模型评价标准仍需完善。综上所述，探寻一种能完全符合RA特点的动物模型仍是今后的重中之重。

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论文摘要：董事的注意义务和忠实义务是董事义务的两个重要组成部分，对董事注意义务的判断标准的不断发展完善对公司、企业的健康发展有着十分重要的意义。

一、董事注意义务的内容和演变

董事的注意义务，是指董事在实施行为时应达到一定的标准的义务。它要求董事在管理公司业务时，应当尽一个理性、谨慎的人在同样情况下能够尽到的注意，积极谋求公司利益的最大化。董事的注意义务包括勤勉、注意、技能三个方面的内容。

因此，董事注意义务的产生源自董事管理职能的独立和强化，源自法律对股东利益的保护需求。

二、国外关于董事注意义务判断标准的规定

（一）英国

（二）美国

《1984年模范公司法》对董事的注意义务进行了规定。该法第8.03条规定：第一，一个人作为董事，包括作为董事会下属委员会成员，应该这样履行其义务：以诚信方式；以普通谨慎之人处于相似职务、在相似环境下能够做到的注意；并且，按照一种其合理相信是符合公司最佳利益的方式。第二，在履行其义务时，董事有权利信赖由下列人员准备或呈报的信息、意见、报告和报表，包括财务报表和其他财务数据：一个或多个公司高级职员或雇员，董事合理相信他们提供的有关材料是可信赖的，并且是胜任其工作的；法律顾问、注册会计师或其他人员，董事合理地相信他们所提供的材料是属于其能胜任的职业或专业领域；董事会的一个下属委员会，他虽不是该下属委员会的成员，但他合理相信该委员会值得信赖。第三，如果一个董事知道有关材料有问题，从而使所允许的信赖变得不可靠，则该董事的行为就不是诚信的。第四，一个董事根据本条规定履行了他的职责，就无须为他作为一名董事所实施的任何行为或不采取任何行动而承担责任。

这是一种典型的客观标准。类似地，日本法中规定董事的注意义务标准为善良管理人的标准，即善良家父的标准，这也是一种客观标准。

三、注意义务的缓解——商业判断原则的引入

董事的注意义务并不是要求董事对所有的决策失误和经营损失承担责任，而是要对未尽到合理注意的行为和没有达到公司的经营能力要求时造成的损失负责。如果对董事的注意义务要求过高，则很多有能力的人会对董事职位望而却步，即使担任董事职位之人，也会畏首畏尾，在做出决策时过于保守，以一种不求有功但求无过的心态履行自己的职责。这显然不利于公司和整个国民经济的发展，因此，在美国首先发展了商业判断原则作为对诚实董事的保护手段。董事的注意义务要求董事具有进行经营管理所必备的经营技能，并且勤勉地参与公司的管理。

（一）商业判断原则的含义

商业判断原则是指如果董事和经营管理者在执行的业务在公司权力和管理者权限范围之内，并且有合理的理由表明该行为是以合理注意和善意的方式为之，则免除董事和经营管理者对合理的经营失误所应承担的责任。对上述概念可以做如下理解：

董事主张商业判断原则的保护，应具备以下条件：第一，董事的行为只限于商业判断的场合。第二，董事遵守了忠实义务，商业判断中不含有其个人利益与公司利益之间的冲突。即商业判断原则仅适用于董事对注意义务的违反，而不适用于董事对忠实义务的违反。第三，董事获取的据以做出商业判断原则的信息在当时有理由被其认为是充分和准确的。第四，董事有充分的理由认为其商业判断原则最为符合公司利益。第五，董事在做出商业判断时不存在重大过失。第六，商业判断本身不违反法律、法规或公司章程的规定。

（三）不适用商业判断原则的情形

具体内容包括以下方面：第一，董事所从事的不是根据有关决定的行为，或者所做的为失败的失职行为，不适用商业判断原则。第二，商业判断原则仅适用于慎重且审慎地做出的决定。即在做决定时，不仅要做出积极行为的决定，而且要做出消极行为的决定。第三，商业判断原则不适用于修改或变更按照法律而确定的董事或管理管理者的义务。也不适用于必须获得董事会承认的重要财产的处分，公司重要组织的变更以及不需要董事会承认的决议。第四，商业判断原则不适用于企图或者允许董事或者管理管理者从事违法行为的决定。第五，商业判断原则不适用由于董事或高级管理者对某种决定缺乏充分自信而做出的违法的决定。第六，商业判断原则不适用于董事或者管理者没有充分地收集资料并慎重地进行准备而做出的决定。第七，商业判断原则不适用于董事或者高级管理者不诚实地或具有同公司相反利益关系而做出的决定。第八，在提起追究董事或者高级管理者责任的原告，在证明董事或高级管理者的决定中没有任何合理的理由时，不适用商业判断原则。

（四）董事会权利委托时董事注意义务的判断

董事会是公司的经营决策机构和执行机构。董事会的决策职能是由全体董事通过董事会形式来行使，而董事会的执行职能一般是通过执行董事、董事长、董事会专门委员会、公司雇员和其他人来行使的，即董事会的执行职权可以委任第三人行使。例如，新西兰1993年公司法第130节规定了董事的委任：首先，董事会可以将权力授予董事会委员会、董事、公司雇员或其他人，这些权力包括一项或更多的董事会职权。其次，董事会要对他们授予权力的受托人的行使权力的行为承担责任，就像这些权力是由董事会行使的一样，除非董事：在合理的基础上相信被任命人在行使其权力时会遵守法律或公司章程所强加于其的责任；已经通过正确的使用合理的方法对被任命人的行为进行了监督。

总之，通过对董事注意义务的判断标准的研究和合理应用，可以使我国公司、企业吸引更多的优秀人才，为公司、企业的健康发展起到良好的保障作用。为社会经济的整体健康发展发挥积极作用。

传统的展陈设计多以实物展柜、图文展板、说明文字、影视动画、雕塑场景等手段向观众传播信息,这些手段所提供的多是以强制性为特征的被动式参观体验,观众是在固定的模式下参与展示流程,信息传达的方式是直线型、单向型的。因而,观众所获得的知识信息也是灌输式的,缺少对信息的反馈渠道,更没有对观众反馈做出回应的机制。如今,伴随观众需求的提升,博物馆的功能和内涵也在不断发展,展示设计不再停留于静止的陈列,而是逐渐趋向与参观者平等对话、交流的模式,借助充满想象力的设计手法调动情绪,激发观众主动探索的欲望和能力,完成自主的学习的过程。

欧美国家在博物馆的体验性实践方面比较领先,博物馆内充实着各式各样的寓教于乐的展示项目。遍布美国各大、中城市的科教场馆内容丰富、讲解生动、鼓励观众动手参与,是科学教育最生动、直接的场所,其中旧金山探索馆首开风气让观众亲身参与互动展示,90年代后期已开发超过800多件互动式展览与活动,在这个充满活力、刺激想象力、扩展各感官经验的地方,人们可以随心所欲的实验、讨论、研究。[1]由此可见互动体验在展示设计中的普及性和可行性。进入信息时代以来,观众的生活习惯、学习方式已发生了颠覆性的改变,他们越来越需要多维度的认知和学习渠道。当他们审视一件展品时,早已不满足于单一的视觉认知和简单的说明性文字,而是渴望看到、感受到更多关于展品内涵的信息,比如展品背后的历史故事、展品之间的比较、展品在某些层面的详细介绍等等一系列更有深度和广度的信息。观众越来越希望在心理、生理、精神上都能从博物馆的展示中获得满足。

二、博物馆互动体验展示设计的特点

展示设计是一门综合性的艺术学科,涉及社会科学、心理学、人机工程等众多层面,其评价标准也受这些因素的影响而变化。博物馆职能属性的发展,决定了其展示设计中互动性体验具有如下特点。

(一)主动参与性

任何形式的互动体验,如果缺少观众作为主体的参与就无从谈起。因此,我们可以认为参与性是互动性体验所具有的基本特性之一。通过调动求知欲等情绪,引导观众参与,促成对设计意图和展示内容的认知。随着参与进程的深入,信息也借助互动设计形成反馈,使观众对展示内容逐步加深了解,进而引发观众的成就感等情绪体验,最终构建出以人为主体的螺旋形信息展示模式。

以当前博物馆普遍运用的虚拟技术为例,观众首先会从虚拟的情境中感知到初步信息,在做出分析选择后实施相应的动作或策略。此时,就需要通过交互界面或感应设备等介质,将指令意图输入系统,再由系统做出相应指令或条件下的反馈,完成互动过程的完整循环。参与性同时也意味着自由度和主导性的加强,这里主要体现在观众能在一定程度上独立地主导系统的运行。虚拟技术条件下的互动系统设计,往往致力于为观众打造可完全置身其中的沉浸式影像体验,并提供实时性的、以直接动作或操作影响虚拟世界系统的设定,彻底改变了传统模式中被动接收信息的局面。

(二)信息双向性

根据互动一词的释义,我们不难理解,形成观众与博物馆展示内容的相互作用、相互影响是互动性体验的重要目的。在展示内容和观众之间传递信息的过程中,观众、内容、场地之间的信息构成一个闭合的体系,而他们之间的信息传递是双向的、循环往复并不断深入的,个体彼此都在相互反馈影响下进入新的境界。展示设计中的互动性体验即在场地中,通过设计者的计划与构想,设置互动性的媒介形式,为观众和展示内容之间搭建一座桥梁,达到信息的双向快速传导和沟通。而这种双向性,才是创造互动体验的关键所在,是观众真正希望在体验过程中所能提供或者达到的状态。

(三)情感性

互动性体验在博物馆展示设计中愈加重要,体现着以观众为中心的建设原则,针对不同层次观众的不同需求,设计者和运营者应当在广泛学习和理解的基础上,提供观众以所期望的情绪体验,这种以人为本的理念是互动性体验具有情感特性的重要表现,也是当代博物馆理念的重要发展趋势。观众对博物馆的期待或者说情感需求,主要包含了对未知的探索欲;对展品、场地空间的审美要求;获得挑战自我的成就感;以及寻求一定感官刺激等。

(四)动态性

(五)多元性

信息媒介的更新换代,使信息的传播方式和速度呈现颠覆式的发展。以互动为主要特征的体验设计的多元化、复合化应用成为必然趋势。静态陈列不再是博物馆展示内容的全部,互动性体验借助网络、数字等新技术和多元媒介,开始逐渐成为展示信息的主流模式,大量的衍生技术实现了大容量信息的整合,极大丰富了展示方式的可能性,即观众参与和体验方式的多元性。展示信息的表现和传达方式的多元化、虚拟化,催生出更多基于不同媒介的互动方式,反过来又推动了技术层面的革新。

三、博物馆互动体验展示设计的应用

(一)故事性演绎

大多数博物馆展示内容都需要一定逻辑性的支撑,这种逻辑性一般依附于主题的故事性。故事性是主导布展思路的关键,也是对观众起到吸引作用的重要因素。博物馆的互动性体验设计包含清晰的故事性,并采用合理的表现方式是吸引观众的有效方法。通过故事性推动体验的设计构思,把故事讲好,从而感动观众、引人入胜,已成为优秀博物馆的衡量标准之一。展示的故事性演绎,能够为观众提供一个由各种时空要素相互联结而形成的虚构世界。参观的过程也是各要素相互影响变化、组成信息的过程,沉浸其中,观众的心理和感受随故事推进而起伏跌宕,获得兴奋、满足、反思等不同情绪体验。文学性的故事都具有自身的叙事主线,博物馆的体验设计也应具备清晰的线索、有序的情节,使展示内容从发生、发展到、结尾,呈现完整故事性。观众在设计的精心策划下,以一定的节奏吸收展示所传达的信息。

(二)场景化环境

实现人与环境的互动,一般需先设置特定的环境,使观众置身其中,这种条件下的互动能使展示所传达的信息更为真切可信,观众的感官及情绪均会受到这一预设环境的影响。坐落于安徽泾县的宣纸博物馆,开辟了专门的古作坊,将传统宣纸制作工艺按流程逐次排开,打造开放式体验长廊。就某些具有大体量等特殊条件的展示内容而言,不可能总是完整呈现最原始的信息。此时互动体验的实现,就需仰仗场景来完成,同时借助相应技术手段,实现更强的真实感、空间感和代入感等要求。博物馆的场景设计应对观众起到暗示、引导和启发的作用。互动媒体技术与场景的有效结合,可以激发观众的好奇心,提供多层次的感官体验。

(三)趣味性打造

趣味性是博物馆吸引大众的另一重要基础。展览的趣味性可以借助展览具体形式、道具、互动设计等加以强化:例如等比例环境、器具的模拟;采用丰富多变的道具,包括衣食住行在内都可以成为表现对象。再者,可以利用夸张、对比、置换等基本艺术手法组织具体展示细节,跳出固有的思维方式。最后,通过设计互动游戏环节,同样可以极大提高展示活动的趣味性。

(四)技术性运用

1.实体化互动

以博物馆中设置的实验、动手、游戏项目等为典型,通常需要挖掘展示信息中较为有趣、新奇、能激发挑战欲并且具有可操作性的内容。这类项目符合一般观众的行动特征与兴趣点,能更好地调动参与的热情,促进体验行动的发生。大同市博物馆内设置的考古园地,就是面向儿童的实体互动类型项目。

2.可互动装置

一般指把互动行为作为设计目标的艺术装置类作品。这些装置作品惯用隐喻、暗示的手法,激发观众对自身生活经验的条件反射,观众需要通过一定的互动行为和思考才能揭开其表面的面纱,显现包含在内的深层内容。若缺少观众主动参与的行为,这种装置便会失去其存在的意义。以可互动装置引导观众的体验行为,是博物馆期望构建的综合体验系统的重要组成。

3.人机交互

操作界面的进化很大程度上反映了数字技术的发展过程,并开始逐渐超越以键盘鼠标为代表的物理媒介的局限性。例如多点触摸技术的成熟应用,观众与信息之间的联系更趋紧密真实。在科研人员的努力下,数字系统连接人类的界面正向多元维度扩展,不再依赖单一的输入方式,有些甚至无需辅助信息采集系统。

例如触感系统技术,人的触摸动作即为命令输入,能对信息强度作出自动分析与反馈。只需透过手指轻重缓急的控制,就能实现不同指令。

动作感应系统也是以人体为人机界面作为交互媒介,突出特点是能读取人的动作,通过肢体动作等形成的指令,实现人机间交流,获得如运动般的肢体参与的。多人模式下也能增进人与人之间的交流互动,营造和谐氛围。

增强现实系统,顾名思义,在真实世界中融入虚拟的图像等信息,使虚拟影像叠加于真实环境之中,实现两者并存的奇妙现象。通过数字系统的处理,增强现实技术所提供的行为体验突破了观众于屏幕面前操作简单指令的原始模式,影像、图像等信息与观众之间达成实时交互的关系。虚实结合、真假并存的场景感,为观众提供了值得记忆的体验经历。

虚拟现实技术同样是依托于计算机技术高速发展而产生的新型传播媒介,其实现条件需要将观众的视线、听力和部分感官限制在一定范围内,甚至完全封闭。因此一般都要求借助一定的电子设备,来提供或营造虚拟空间,比如眼镜式或头盔式显示器等。通过此类设备或者大型封闭视听空间,能够全方位投射出一个非真实场景或形象,实现信息的实时互动,在一定程度上摆脱时空的束缚。

四、结语

在体验经济的潮流中,博物馆已成为在一定逻辑组织下的文化信息集合。为有效回应广大观众多层次的精神和文化需求,博物馆展示活动的关键在于设计好游客体验,信息的传达必须配以创造性的手段,才能确保激励观众学习或者受到感染采取参与行动。引导观众经历吸引、行动、反馈的过程,通过这一过程达到成功的学习与文化体验。从而推进博物馆在教育、文化中的功能升级。

本实验所需器材包括：附带金属小球的斜槽，木板及竖直固定支架，白纸，图钉，刻度尺，三角板，重锤，铅笔等.

■1.如何调整斜槽与木板？

实验中必须保证通过斜槽末端点的切线水平，木板必须处在竖直平面内，且与小球运动轨迹所在竖直平面平行，并使小球的运动靠近木板但不接触.用图钉把白纸钉在竖直板上，在木板的左上角固定斜槽，可用平衡法调整斜槽，即将小球轻放在斜槽平直部分的轨道上，如小球能在任意位置静止，就表明水平程度已调好.为确保小球每次从斜槽上同一位置滚下，可在斜槽上某一位置固定一个挡板.

用悬挂在槽口的重锤线把木板调整到竖直方向，并使木板平面与小球下落的竖直面平行，然后把重锤线方向记录到钉在木板上的白纸上，固定木板，使在重复实验的过程中，木板与斜槽的相对位置保持不变.

■2.如何建立坐标轴？

坐标原点（小球做平抛运动的起点）不是槽口的端点，而应是小球在槽口时球的球心在木板上的水平投影点，位于槽口末端上方r处（r为小球半径）.实验时，把小球放在槽口处，用铅笔记下小球在槽口时球心在木板上的水平投影点O，O即为坐标原点.过坐标原点的重锤线方向即为y轴方向，用直角三角尺可进一步确定x轴方向.

■3.如何描绘运动轨迹？

用铅笔的笔尖轻轻地靠在木板的平面上，不断调整笔尖的位置，使从斜槽上滚下的小球正好碰到笔尖，然后就用铅笔在该处白纸上点上一个黑点，这就记下了小球球心所对应的位置.保证小球每次从槽上开始滚下的位置都相同，用同样的方法可找出小球平抛轨迹上的一系列位置.取下白纸，用平滑的曲线把这些位置连接起来即得小球做平抛运动的轨迹.

应在斜槽上适当的位置释放小球，使它以适当的水平速度抛出，其轨迹由木板的左上角到达右下角，这样可以使实验误差较小.

■4.如何验证实验得到的轨迹是否准确？

根据平抛运动的规律，可在x轴上从坐标原点开始取等距离的几个点，再由轨道曲线测出各点所对应的下降高度（相对坐标原点），看这些高度是否满足1∶4∶9∶16.

关键词：实验动物；屏障系统；改造；设计与建设

实验动物科学作为生命科学研究的基础和条件，是衡量一个国家或科研单位科学研究水平的重要标志。2008～2013年，"Science"评选出50项重大科技进展中，生命科学占22项，其中利用实验动物的研究就占13项[1]。随着科学研究的深入，SPF及以上等级的实验动物的使用越来越广泛。近几年，我国不断地完善实验动物法规与标准，并颁布实施新国标GB14925-2010《实验动物环境及实施》[2]，实验动物屏障系统建设体系作为保证SPF级动物质量、动物实验准确性的载体[3]，已取得了显著发展。建立和管理与生命科学相适应的实验动物屏障环境，已成为现代医学学科建设和科研发展的必然趋势。四川大学华西第二医院是集医疗、教学、科研和人才培养为一体的大学附属医院，拥有妇儿疾病与出生缺陷教育部重点实验室、早期发育与损伤的基础与临床嵌合研究教育部长江学者创新团队及PI实验室团队等学科特色。为适应医学科学研究的快速发展，医院于2016年启动对原实验动物中心升级改造工程。本文结合本次实验动物中心升级改造过程中积累的经验，探讨如何有效实施旧设施环境改造的设计与建设，以供借鉴参考。

1实验动物屏障系统概况

四川大学华西第二医院实验动物中心按照国家有关法规和标准规划、设计、建设，是一个集科研和教学为一体的公共服务平台。经改造扩建后的实验动物中心室内建筑面积约为1100m2，位于大楼的第四、五层，其中四楼的SPF级实验动物屏障设施约400m2，平面布局如图1所示，满足了人流、物流、动物流的合理走向，避免往返交叉；五楼建有普通级实验动物房200m2，并兼顾AAALAC认证推荐的"GuidefortheCareandUseofLaboratoryAnimals"[4]，设立动物行为学观察室、动物准备室、手术室、安乐死处置室、解剖室、动物观察室等功能区域。具有动物饲养分区合理，实验设施功能齐全，充分保障实验动物福利等优点，满足不同种类、微生物控制级别的实验动物使用需求。

2实验动物屏障系统的设计布局

2.1空调净化系统设计

空调系统作为整个屏障系统运行和管理的核心[5]，采用全新风，气流组织从高洁净区向低洁净区降低：清洁走廊动物饲育间污染走廊辅助功能区。中心根据不同的等级要求采用不同的调节控制方式，四、五楼各设计独立空调系统，并配置了两套互为备用的机组设备；辅助功能区单独设计一套多联机系统，不用不开，既节约能耗，又方便管理。空调机组安装于大楼屋顶，不占室内有效面积，同时降低管网造价。净化系统采用顶送下排的送、排风方式，送入新风经粗、中及高效三级过滤处理达万级洁净度。送、排风系统采用变频风机，使通风系统能够随着室内控制指标的变化调节送、排风量，减少通风负荷。排风终端采用了除臭过滤排风机，排放的废气经除臭过滤处理后可有效防止环境污染。每台空调通风机组设置独立的自动控制系统，以强弱电一体化恒温恒湿控制柜智能化控制空调通风机组的启动、备用切换、参数调节等功能。通过远程控制终端监控空调净化系统，符合“互联网+”时代的智能化行业发展趋势要求。

2.2照明系统设计

照明系统主要包括动物生物节律照明与工作照明，为使动物照明分布尽量均匀，在满足国家标准15lx～20lx的光照强度前提下，增加动物照明灯数量，降低每个照明灯功率，并通过时控开关控制14h/10h的生物节律。屏障内外各个独立区域设置了带蓄电池的应急照明灯，便于紧急断电时，人员的安全疏散。

2.3安防系统设计

设置重要区域的视频监控、内外通讯、门禁系统等安防设施，减少区域间的交叉污染，便于实时控制实验动物屏障系统的流向管理与规范运行，解决屏障内外人员间的交流，降低人流、物流出入频率，又有效控制并减少闲杂人员的进出。由于实验动物屏障系统密闭性高，人员流动线路复杂，且洁净区内人员少，事故难发现，在消防设施设计上设置了烟感火灾探测器及两个不相邻的安全出口，便于及时发现事故与紧急疏散。由于洁净区禁止设置消防栓，在非洁净区的前后走廊均安装消防栓，保证了消防栓的工作半径符合消防规定。

2.4新型高效设备的选用

结合实验动物中心的开放式管理及不同PI项目制实验需要，安装独立通风系统笼具(简称IVC)，避免同一饲育间内不同实验项目的相互影响，以提高屏障设施利用率。在辅助区域的设计上，采用现代化设施进行管理，以提高辅助区面积的有效利用率，并节省了人力、物力成本。安装新型落地式脉动真空灭菌器，既未破坏地平影响旧房承重，又无外置推车，节省操作空间与外置车清洁工作环节。考虑在高密度饲养条件下繁重的日常清洗工作，安装运用小型笼盒全自动清洗机，以小巧、高效、节水等优势降低人员的劳动强度，进一步节省了用人用水等成本，为屏障系统的高效运转提供基础保障。

2.5充分保障动物福利

动物实验数据的准确性和可靠性很大程度上受实验动物福利水平高低的影响，在本次的设计与建设中，采取了许多有力措施充分保障实验动物福利。设置前室既可作为洁净走廊与动物饲育间的缓冲区，又可减少实验操作对其他动物产生的不良影响；设置术前准备室，用于实验动物的术前准备、与术中操作隔离，避免动物产生恐惧、焦躁等情绪；设置安乐死处置室并购置安乐死专业设备，在适当的时机以人道方式使动物达到仁慈终点，最低程度降低动物的痛苦，既维护实验动物的福利，也确保了实验数据的准确性。

3实验动物屏障系统建设施工管理

4讨论

在实验动物屏障系统的设计与建设过程中，不同单位的设计与建设理念、工艺各具特色。在平面设计中，采用的双走廊设计同赵颂军等人[6]的单走廊设计相比，虽减少了屏障系统的有效利用面积，但能有效分隔洁净区与污物区，易于控制交叉污染的危害。严鹤峰[7]、周庆生[8]等人在节能技术的研究中，介绍了定向流技术、能量回收装置等节能措施，与传统的技术相比节省人力与财力投资，进一步降低运行能耗，而我们根据不同区域的划分应用不同的变频空调系统，不用不开；采用屏障系统与IVC相结合的饲养模式，在夜间或无人工作时段，维持屏障系统通风量的同时可降低换次次数，节约能耗[9]；在满足设备对净高的需求，适当降低系统室内净高，使净高达国标最低标准2.5m，局部区域为2.4m，减少冷热负荷[10]。

5结语

对实验动物屏障系统的改造设计与建设过程中，要遵循因地制宜的利旧原则[11]，充分利用新理念、新产品、新技术，降低能耗、节约运营成本、提高饲养水平，为实验动物屏障环境系统标准化、规范化及信息化建设与管理提供基础支撑。

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