由于现有研究对TM结构描述存在争议,观察切片后我们对TM是否由胶原纤维和内皮细胞构成也产生疑问,并且猜测TM内可能存在平滑肌纤维。为证明该猜想,我们采用不同的染色法对此进行了初步的探索。
取自南方医科大学实验动物中心健康成年家兔、SD大鼠和小鼠各3只。
动物处死后立即摘取眼球,并迅速放入固定液中固定24h。常规梯度脱水、浸腊、包埋。标本用轮转切片机进行切片,厚度4μm,每种动物标本切片10片。
切片脱蜡至水,置Harris苏木精中染色,1%盐酸乙醇中分化,流水冲洗返蓝,置伊红染液中,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固,光学显微镜观察摄片。
切片脱蜡至水,置Weigert氏铁苏木精染色(A、B液1:1混合,使用前混合),充分水洗,用VanGieson氏溶液染色,快速水洗,吹干,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固,光学显微镜观察摄片。
切片脱蜡至水,置丽春红酸性复红染液染色,以1%磷钼酸水溶液分化处理,不水洗,直接用2%亮绿染液染色,快速水洗,电吹风吹干,中性树胶封固,光学显微镜观察摄片。
切片脱蜡至水,双氧水室温下处理,消除内源性过氧化酶活性,清洗后进行抗原修复,吸去封闭液加入第一抗体,4℃冰箱过夜,清洗后加入第二抗体温育,DAB显色,苏木素复染封片。阴性对照除不加入第一抗体外,其余步骤同上。阳性对照选择实验组眼球内睫状肌。一抗(1:200稀释,小鼠抗)和二抗均购自博士德(羊抗)。
切片脱蜡至水,双氧水室温下处理,消除内源性过氧化酶活性,清洗后进行抗原修复,吸去封闭液加入第一抗体,4℃冰箱过夜,清洗后加入第二抗体温育,DAB显色,苏木素复染封片。阴性对照除不加入第一抗体外,其余步骤同上。阳性对照选择实验组眼球内血管内皮细胞。一抗购自Abcam(ab28364,1:50稀释,兔抗);二抗购自博士德(羊抗)。
TM主要由与睫状肌延续而来的平滑肌纤维组成,其间有少量细丝状的胶原纤维;无内皮细胞。3种实验动物TM结构完整,且在五种染色中显色一致,说明其结构有生物共性。
因此,未来青光眼的降眼压治疗应更注重增加TM途径的房水外流,而不是单纯地抑制房水生成,或许TM内的平滑肌纤维可以为治疗POAG提供新的靶点。