开窍药具有辛香走窜之性、醒神开窍之功,主要包括4种,分别是石菖蒲、冰片、麝香及苏合香,其对中枢神经系统作用的有效成分主要为脂环化合物,存在于挥发油中[1],其作用强度,作用机制不尽相同。本实验选上述4种开窍药有效部位成分:β-细辛醚、冰片(自然冰片源于自龙脑香树树脂中析出的天然结晶性化合物)、麝香酮,苏合香挥发油(苏合香挥发油有效成分单体未明),探讨不同开窍药对中枢神经系统的兴奋-镇静作用。
1、材料与方法
1.1仪器与试剂
MultiskanMk3型酶标仪,美国ThermoScientific公司;TDL-5-A型低速离心机,上海安亭科学仪器厂;ZZ-6小鼠自主活动测试仪,成都泰盟科技有限公司;β-细辛醚,广州中医药大学第一附属医院实验中心自制,纯度为99.32%;冰片,康美药业股份有限公司,批号:151210181;麝香酮,中国食品药品检定研究院,批号:110719-201215;苏合香,正诚药业,批号:20160415;盐酸士的宁,美国Sigma公司,批号:67H2031;苦味毒,美国Sigma公司,批号:98H1178;戊巴比妥钠,美国Sigma公司,批号:031712P0167。
1.2药物制备
1.3实验动物
SPF级KM小鼠,许可证号:SCXK(粤)2013-0034,购自广州中医药大学实验动物中心。
1.4实验方法
1.4.1自主活动实验
KM小鼠,体质量18～22g,雌雄各半,随机分为5组,每组10只:β-细辛醚组、冰片组、麝香酮组、苏合香组、空白组。每天灌胃给药,共7d,每日2次,剂量:0.037g·kg-1、0.2161g·kg-1、0.00081g·kg-1、0.4323g·kg-1,空白组给予等容积生理盐水。给药前及末次给药30min后,分别将小鼠放入小鼠自主活动仪中,适应5min后开始测试,记录小鼠5min内活动次数。
1.4.2小鼠阈剂量下戊巴比妥钠睡眠实验
1.4.3士的宁兴奋实验
分组与给药方法同上,末次给药30min后,腹腔注射士的宁1.2mg·kg-1,观察并记录30min内惊厥潜伏期、惊厥次数、发生率和死亡率。
1.4.4苦味毒兴奋实验
分组与给药方法同上,末次给药30min后,腹腔注射苦味毒6mg·kg-1,观察并记录30min内惊厥潜伏期、惊厥次数、发生率和死亡率。
1.4.5常压耐缺氧实验
1.5统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行统计,数据采用均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用独立样本t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2、结果
2.1不同开窍药对小鼠自主活动的影响
与给药前比较,β-细辛醚、冰片及苏合香挥发油均能减少小鼠自主活动次数,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1不同开窍药对小鼠自主活动的影响
2.2不同开窍药对戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响
表2不同开窍药对戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响
2.3不同开窍药对苦味毒致小鼠惊厥的影响
与空白组比较,β-细辛醚、冰片、麝香酮及苏合香挥发油均能减少惊厥次数,起到镇静抗惊厥作用,差异有统计学意义(P<0.05)。冰片组惊厥率及死亡率低于其他组。见表3。
表3不同开窍药对苦味毒致小鼠惊厥的影响(x±s)
2.4不同开窍药对士的宁致小鼠惊厥的影响
β-细辛醚、冰片、麝香酮及苏合香挥发油均能减少惊厥次数,其中冰片组惊厥次数较其他3种药物组最少,差异有统计学意义(P<0.05);各药物组惊厥潜伏期比较:麝香酮组<β-细辛醚组<苏合香组<冰片组,其中麝香酮组、β-细辛醚组及冰片组各组间比较、苏合香组与麝香酮组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。
表4不同开窍药对士的宁致小鼠惊厥的影响(x±s)
2.5不同开窍药对小鼠常压耐缺氧实验的影响
表5不同开窍药对小鼠常压耐缺氧实验的影响(x±s,min)
3、讨论
开窍药主要包含4种,分别是石菖蒲、冰片、麝香及苏合香。石菖蒲含挥发油,主要为β-细辛醚、α-细辛醚、石竹烯、石菖醚等[2],其中β-细辛醚含量最高,为主要有效成分。β-细辛醚具有广泛的药理作用,包括抗肿瘤、抗炎、抗血栓、保护大脑、保护心肌细胞、保护呼吸系统、保护消化系统和杀虫灭菌等,尤其是在中枢神经系统方面,表现出良好的抗老年痴呆、抗癫痫以及抗抑郁作用[3],本研究中β-细辛醚亦表现出抗惊厥、镇静作用。
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