细菌是原核生物界中的一大类单细胞微生物。
个体形态可分球菌、杆菌和螺形菌,微米,群体形态为菌落(菌苔)
基本结构有细胞壁(肽聚糖)、细胞膜、细胞质和核体
细胞壁:肽聚糖(黏肽)、磷壁酸、脂多糖(内毒素)、染色特性(阳紫阴红)、L型细菌
质粒:细菌染色体外的遗传物质,闭合环状双股DNA分子
特殊结构有鞭毛、菌毛、荚膜和芽孢
荚膜:抵御吞噬细胞的吞噬(胞内菌感染)
鞭毛:运动器官
菌毛:普通菌毛(黏附)和性菌毛(接合),电子显微镜观察
芽孢:不是繁殖方式,是休眠状态,是抵抗不良环境的特殊存活形式,以杀灭芽孢作为灭菌或消毒是否彻底的标准。
染色方法:革兰氏染色、瑞氏染色法、特殊染色
革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌(初染、媒染、脱色、复染)
抗酸染色法:结核分支杆菌(蜡质、糖脂),红色,3%盐酸
布氏杆菌:柯兹洛夫斯基染色,红色
奶牛两病的检测:试管凝集试验和变态反应
生长繁殖基本条件:温度和酸碱度
群体生长繁殖:迟缓期、对数期(重点)、稳定期、衰亡期
细菌代谢产物:热原质(又称致热源)、毒素、侵袭性酶类(卵磷脂酶、透明质酸酶)、细菌素与抗生素
细菌分解代谢:I(吲哚)M(甲基红)Vi(VP试验)C(枸橼酸盐)
大肠杆菌:++--;产气杆菌:--++
普通肉汤培养基:四种成分
培养基:四种基本成分+(琼脂)、0.5%(半固体)、1.5%-2%(固体),注意与琼脂扩散试验的琼脂浓度区别(1%)
麦康凯培养基:大肠杆菌(红色,分解乳糖)、沙门氏菌(无色,不分解乳糖)、支气管败血波氏杆菌(蓝灰色)、胆酸盐(抑制阳性菌)
厌氧培养基:疱肉培养基;汹涌发酵(产气荚膜梭菌)
细菌在培养基中的生长现象:菌膜(专性需氧菌,分支杆菌等)
第二单元细菌的感染
正常菌群的作用:颉颃作用、营养作用、免疫作用(非特异性)
内外毒素、类毒素、抗毒素、0.3%~0.4%甲醛
毒血症:即病原菌侵入机体后,仅在局部生长繁殖而不入血,但其产生的外毒素(并非病毒)人血,到达易感组织和细胞,引起特殊的毒性症状。
第三单元细菌感染的诊断
样品保存液:30%无菌甘油缓冲盐水(细菌)、50%无菌甘油缓冲盐水(病毒)
利用生化反应对肠道杆菌进行鉴定是必不可少的步骤
特异性IgM抗体,可进行早期诊断
聚合酶链式反应(PCR):主要扩增DNA
RT-PCR:主要扩增RNA,主要是病毒
第四单元消毒与灭菌
消毒(杀灭病原微生物)、灭菌(杀灭所有病原微生物)、无菌(状态)、防腐(抑制物微生物)
热力灭菌:干热和湿热灭菌;在同一温度下湿热效果好
高压蒸汽灭菌法(121.3℃,15~30min):是应用最广、效果最好的方法
煮沸法:100℃30min左右,2%碳酸钠提高沸点
热空气灭菌法:160℃,2h
紫外线:265~266nm,表面消毒(穿透力弱),空间消毒
电离辐射:“冷灭菌”,穿透力强,医用塑料制品消毒
滤过除菌:0.22~0.45μm,不能除去病毒、支原体
过氧乙酸:过氧化物类,不属于酸类!!!
氢氧化钠(烧碱):2%水溶液杀灭繁殖体和病毒,4%溶液45min杀灭芽孢
一般配成20%的石灰乳涂刷厩舍墙壁、畜栏及地面消毒
熏蒸消毒,温度应不低于15℃,相对湿度60%~80%
乙醇(75%)、碘酊(2%)
季铵盐类(改变细菌细胞壁或细胞膜通透性,常用浓度0.1%左右)
第五单元主要的动物病原菌
球菌:链球菌,α溶血(不完全溶血)、β溶血(完全溶血)、γ溶血(完全不溶血)
猪链球菌:l、2、7、9型是致病菌,2型最常见;斑马鱼是动物模型。
蜜蜂的病原:欧洲幼虫腐臭病(蜂房球菌)、美洲幼虫腐臭病(拟幼虫芽孢杆菌、“巨鞭”)、白垩病(蜜蜂球囊菌、真菌、孢囊深墨绿色)
蚕的病原:白僵病(白僵菌、真菌、可观察到大量的菱形结晶)、质型多角体病毒(病毒、呼肠孤病毒科)、核型多角体病毒(病毒、杆状病毒科)
肠杆菌:大肠杆菌和沙门氏菌
大肠杆菌:麦康凯培养基(发酵乳糖)红色菌落;伊红美蓝琼脂黑色带金属闪光的菌落;引起的常见疾病
沙门氏菌:麦康凯培养基(不发酵乳糖)无色透明菌落;专嗜性沙门氏菌、偏嗜性沙门氏菌、泛嗜性沙门氏菌(鼠伤寒沙门氏菌);引起的常见疾病
牛出血性败血症:巴氏杆菌;牛肺疫(牛传染性胸膜肺炎):支原体
猪出血性败血症(猪肺疫):巴氏杆菌;猪传染性胸膜肺炎:放线杆菌
猪萎缩性鼻炎:巴氏杆菌+支气管败血波氏杆菌
鸭疫里氏杆菌:雏鸭传染性浆膜炎;2~3周龄雏鸭;引起的疾病病理变化与禽大肠杆菌类似(三炎)
嗜血杆菌:副猪嗜血杆菌、巧克力培养基、X因子和V因子、格氏病、
猪胸膜肺炎放线杆菌:巧克力培养基、V因子、CAMP试验阳性
鼻疽伯氏菌:马、骡、驴等单蹄兽鼻疽、Strauss反应
支气管败血波氏菌:犬传染性气管支气管炎(幼犬窝咳)和兔传染性鼻炎、麦康凯(蓝灰色)
幼犬窝咳:支气管败血波氏菌+犬传染性肝炎病毒
产单核细胞李氏杆菌:4℃可生长,易污染冷藏食品,常呈V字形排列或成对出现
炭疽芽孢杆菌:菌体最大、两端平切(竹节状)、阳性、在机体内有荚膜(无芽孢),在外界有芽孢(无荚膜)、粗糙型菌落、Ascoli沉淀反应
猪丹毒杆菌:小鼠和鸽子易感、类丹毒
分支杆菌属:结核分支杆菌、牛分支杆菌(人畜共患)、禽分支杆菌和副结核分支杆菌;
牛分支杆菌:迟发性变态反应(Ⅳ型变态反应)、罗杰二氏培养基
副结核分支杆菌:间歇性腹泻+增生性肠炎
猪痢短螺旋体:猪痢疾(黑痢),特征病变在大肠,暗视野显微镜观察
支原体(霉形体):“煎荷包蛋状”、禽类慢性呼吸道病(鸡毒支原体)、猪气喘病(猪肺炎支原体)、牛传染性胸膜肺炎/牛肺疫(支原体)、山羊传染性胸膜肺炎(山羊支原体肺炎亚种)
特别注意:梭菌属
G+杆菌,多严格厌氧,少数微需氧
形成芽胞,芽胞直径多大于菌体直径,使菌体呈梭状,故名“梭状芽胞杆菌”,简称梭菌;但不是所有梭菌都呈梭状,如破伤风梭菌
腐败梭菌:恶性水肿、羊快疫
产气荚膜梭菌:魏氏梭菌,肠毒血症和坏死性肠炎,暴烈发酵(汹涌发酵)
肉毒梭菌:肉毒毒素中毒
破伤风梭菌:鼓锤状、木马症、破伤风毒素、破伤风抗毒素
气肿疽梭菌:牛羊黑腿病病原
诺维氏梭菌:羊黑疫
第六-七单元病毒基本特性及检测
病毒:最小的微生物、nm、痘病毒(最大),圆环病毒(最小)、电子显微镜观察、活细胞内存活、无完整的细胞结构、核酸(DNA或RNA)、复制(増殖)
病毒结构:核酸(DNA或RNA)和蛋白质、囊膜(有/无)、纤突(血凝素、神经氨酸酶)
蛋白质:结构蛋白、非结构蛋白(区分野毒感染与灭活疫苗免疫,口蹄疫病毒3ABC抗体)
病毒的增殖:实验动物、鸡胚接种、细胞培养
鸡胚接种:增殖禽流感和新城疫病毒最适宜接种部位是尿囊腔接种、卵黄囊(5日龄)
重要概念:细胞病变(细胞圆缩、肿大、形成合胞体或空泡)、包涵体(某些病毒感染细胞产生的特征性的形态变化,光学显微镜可检测、狂犬病毒Negri氏体、疱疹病毒“猫头鹰眼)、空斑(在细胞进行,纯化、滴定、定量病毒的一个重要手段)
病毒感染:持续性感染(慢发病毒感染、朊病毒)
病毒特性的测定:核酸型测定、耐酸性测定、脂溶剂敏感性试验、耐热性试验、胰蛋白酶敏感试验、血凝与血凝抑制试验等
病毒感染单位测定:空斑试验
血清学诊断:中和试验、血凝抑制、免疫组化、免疫转印
病原学诊断:PCR、核酸杂交、DNA芯片
噬菌体属于尾病毒目
第八单元主要的动物病毒
绵羊痘病毒与山羊痘病毒:存在共同抗原,呈交叉反应。绵羊痘病程更明显。
存在共同抗原病毒:绵羊痘与山羊痘、小反刍兽疫与牛瘟、猪瘟病毒与牛病毒性腹泻病毒
黏液瘤病毒:兔子、吸血昆虫机械传递、头部广泛肿胀“狮子头”、鸡胚绒毛尿囊膜接种(痘疱)、传候病毒
非洲猪瘟病毒(ASFV):2018年考试的热点,、唯一已知核酸为DNA的虫媒病毒、软蜱传递、OIE列为报告疾病
伪狂犬病毒:猪为原始宿主,并作为贮主;基因缺失苗(TK-/gE-),区分免疫猪和野毒感染猪;仔猪表现为发热及神经症状
马立克氏病病毒:异源疫苗(火鸡疱疹病毒疫苗),4种病型,细胞结合型疱疹病毒(T淋巴细胞),羽囊(琼脂扩散试验)
禽传染性喉气管炎病毒:咳出血样黏液,绒毛尿囊膜接种(痘疱)
鸭瘟病毒:一个血清型,头肿大
犬传染性肝炎病毒:1型致犬的传染性肝炎(“蓝眼”),2型致幼犬传染性气管支气管炎(幼犬窝咳)
产蛋下降综合征病毒:六邻体蛋白是主要结构蛋白、蛋是主要传染源
猪细小病毒:VP2是主要免疫原性蛋白;具有血凝特性的血凝部位分布在VP2蛋白;初产母猪发生流产等,而母猪本身并不表现临床症状。
犬细小病毒:心肌炎型和肠炎型
鹅细小病毒:小鹅瘟病毒,3-20日龄小鹅,卵黄抗体,被动免疫
猫瘟热病毒(细小病毒科)、犬瘟热(副黏病毒科)
貂肠炎病毒、貂阿留申病毒(自身免疫性疾病)
猪圆环病毒:PCVl无致病性,PCV2有致病性;断奶猪多系统衰竭综合征(PWMS)
马传染性贫血病毒(EIAV):马属动物,发热、严重贫血、黄疸等,首先感染巨噬细胞,然后是淋巴细胞,所有感染马终身出现细胞结合的病毒血症
禽呼肠孤病毒:禽病毒性关节炎综合征
蓝舌病毒(BTV):蓝舌病、绵羊、OIE规定的通报疾病、吸血昆虫(库蠓)传播、表现为高热,口、鼻黏膜高度充血,唇部水肿,继而发生坏疽性鼻炎、口腔黏膜溃疡、蹄部炎症及骨骼肌变形。
传染性法氏囊病病毒:侵害法氏囊,免疫抑制。
新城疫病毒:RNA病毒、血凝素(H)、神经氨酸酶(N)
小反刍兽疫病毒:对山羊及绵羊致病,OIE规定的通报疫病,症状与牛瘟相似,消化道糜烂性损伤,回肠、盲肠、盲一结肠交界处和直肠严重出血
犬瘟热病毒:双相热,出现放射状细胞及形成合胞体
狂犬病病毒:脑组织切片检测Negri氏包含体
牛暂时热病毒:牛流行热病毒或三日热病毒,病程最短
流感病毒:8个片段,RNA病毒,H5/H7为高致病,OIE规定的通报疾病,
禽传染性支气管炎病毒:鸡胚卷缩并矮小化
猪繁殖与呼吸综合征病毒:PRRSV,“蓝耳病”,抗体依赖性增强作用
口蹄疫病毒:7个主型、偶蹄目动物、虎斑心、3ABC抗体可区分野毒感染与疫苗接种
鸭肝炎病毒:主要感染5周龄以内的小鸭,角弓反张
兔出血症病毒(RHDV):VP60是病毒免疫保护性抗原
猪瘟病毒(CSFV):E2是保护性抗原、三个特征性的病理变化
牛病毒性腹泻病毒:口部至整个消化道出现糜烂或溃疡性病灶
日本脑炎病毒(JEV):蚊虫叮咬传播;猪是主要的储存宿主和扩散宿主
朊病毒:传染性海绵状脑病的病原,疯牛病”,传染性的蛋白质颗粒无核酸
第九单元抗原与抗体
抗原:免疫原性、反应原性、半抗原
分类:异种抗原、同种异型抗原(血型抗原)、自身抗原、异嗜性抗原
超抗原的概念!
抗体:IgG、IgM、IgA、IgE和IgD五种(重链)
IgM:最早产生(初次免疫应答),抗感染免疫的早期作用,早期诊断,五聚体、分子量最大、结合抗原能力最强
IgA:黏膜免疫,分泌型二聚体、滴鼻点眼饮水气雾、哈德腺
IgE:介导I型过敏反应,在抗寄生虫感染中具有重要的作用
抗体有四条链:两条重链+两条轻链
IgG、IgA、IgD的重链有四个功能区:1个可变区VH,3个恒定区CH1、CH2、CH3。IgM、IgE的重链有五个功能区,即多了一个CH4。
轻链有两个功能区:1个可变区VL和1个恒定区CL
VH-VL:抗体分子结合抗原的所在部位。
CH1-CL:为遗传标志所在。
CH2:为抗体分子的补体结合位点,与补体的活化有关。
CH3/CH4:与抗体的亲细胞性有关。
CH3是IgG与一些免疫细胞的Fc受体的结合部位;
CH4是IgE与肥大细胞和嗜碱性粒细胞的Fc受体的结合部位。
第十单元免疫系统
免疫系统:免疫器官、免疫细胞、免疫分子
中枢免疫器官(骨髓、胸腺、法氏囊)、外周免疫器官(脾脏、淋巴结)
免疫细胞:T细胞和B细胞;
抗原递呈细胞(APC):单核吞噬细胞、树突状细胞、B细胞
补体:56℃30min可灭活。(CH2)
第十一单元免疫应答
免疫应答包括先天性免疫应答和获得性免疫应答
致敏阶段、反应阶段、效应阶段
产生的部位:外周免疫器官
细胞免疫:CTL、TDTH细胞
体液免疫:初次免疫和再次免疫
抗体的功能:中和作用、免疫溶解、免疫调理、局部黏膜免疫作用、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)
第十二单元变态反应
Ⅰ~Ⅳ四型,前三型是由抗体介导的;Ⅳ型则是细胞介导的
过敏反应型(Ⅰ型):IgE,过敏反应
细胞毒型(Ⅱ型):抗体、补体、吞噬细胞互相作用;输血反应;新生畜溶血性贫血(新生骡)
免疫复合物型(Ⅲ型):血清病、Arthus反应
迟发型(Ⅳ型):典型细胞免疫;Jones-mote、接触性、结核菌素和肉芽肿
第十四单元免疫防治
天然被动免疫和天然主动免疫
人工被动免疫和人工主动免疫
疫苗:活疫苗、灭活疫苗、代谢产物和亚单位疫苗
免疫接种途径:滴鼻、点眼、刺种、注射、饮水和气雾
第十五单元免疫学技术
凝集反应:IgG和IgM;颗粒性抗原(细菌、红细胞等颗粒性抗原);鸡白痢全血平板凝集试验;试管凝集试验
沉淀反应:可溶性抗原、环状沉淀试验、琼脂凝胶扩散试验、免疫电泳技术(抗原组分可以分开)
标记抗体技术:荧光素、酶(ELISA)、放射性同位素(灵敏度可达纳克(ng)至皮克(pg)级水平,目前最敏感的分析技术)
ELISA:间接法(包被抗原、标记抗抗体、测抗体);竞争法(包被抗体、标记抗原、测小分子抗原);双抗体夹心法(包被抗体,标记抗体,测定大分子抗原)
2018年新增知识点讲解
口疮病毒
口疮病毒属于痘病毒科,羊口疮是典型代表。
羊口疮,又称为羊传染性脓疱,是由病毒引起的绵羊和山羊的一种接触性传染病,以口唇、舌、鼻、乳房等部位形成丘疹、水疱、脓疱和结成疣状结痂为特征。
猪流行性腹泻病毒
猪流行腹泻病毒(PEDV),属于冠状病毒科冠状病毒属。本病毒对乙醚、氯仿敏感。病毒粒子呈现多性性,倾向圆形,外有囊膜。
猪流行性腹泻是由病毒引起的仔猪和育肥猪的一种急性肠道传染病。本病与传染性胃肠炎很相似,在我国多发生在每年12月份至翌年1~2月,夏季也有发病的报道。可发生于任何年龄的猪,年龄越小,症状越重,死亡率高。
猫冠状病毒、犬冠状病毒
犬冠状病毒病特征有频繁呕吐、腹泻、沉郁、厌食等症状。本病一年四季均可发生,以冬季多发,病犬是主要的传染原,犬可通过呼吸道、消化道、粪便及污染物传染。
猫传染性腹膜炎是感染猫冠状病毒而引起的疾病,传染率非常高。一般认为是经口鼻感染。
基因工程抗体
基因工程抗体(第三代抗体),又称重组抗体,是指利用重组DNA及蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不同需要进行加工改造和重新装配,经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子。
基因工程抗体主要包括嵌合抗体、人源化抗体、完全人源抗体、单链抗体、双特异性抗体等。
多克隆抗体(第一代抗体)
单克隆抗体(第二代抗体)
主要动物的细胞因子
肿瘤坏死因子:TNF分为TNF-α和TNF-β。前者主要由活化的单核-巨噬细胞产生,抗原刺激的T细胞、活化的NK细胞和肥大细胞也可分泌TNF-α;TNF-β主要由活化的T细胞产生。TNF的最主要功能是参与机体防御反应,是重要的促炎症因子和免疫调节分子。
白细胞介素(IL):是在白细胞间起免疫调节作用的细胞因子。(IL-1、IL-2等)
集落刺激因子:是一组促进造血细胞,尤其是造血干细胞增殖、分化和成熟的因子。主要有单核-巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、红细胞生成素(EPO)等。
获得性免疫应答
产生的部位:
动物机体的外周免疫器官是免疫应答的场所,其中脾脏和淋巴结是免疫应答的主要场所。
免疫应答的基本过程
感应阶段
1、APC对抗原摄取、加工处理及表达
2、T细胞和B细胞识别抗原。
反应阶段T、B细胞的活化、增殖、分化,产生效应T细胞、浆细胞和记忆细胞
效应阶段:抗体和效应T细胞与抗原结合,通过多种机制最后清除抗原。
抗原提呈
抗原被提呈细胞摄取、加工后以抗原肽-MHC分子复合物形式呈现于提呈细胞表面,最终被免疫活性细胞识别的过程,称为抗原提呈。
也称为抗原呈递。
APC的抗原呈递作用是一个涉及抗原摄取、处理与呈递的复杂过程。
现以树突状细胞为例叙述抗原的呈递过程。
2、抗原加工
摄入的抗原在APC内通过代谢而修饰成能与MHC分子结合且具有免疫原性的肽段,此过程称为抗原的加工。T细胞不能识别游离或可溶状态的蛋白抗原
3、抗原呈递
抗原呈递有二种方式:
①外源性抗原抗原递呈
②内源性抗原抗原递呈
外源性抗原——被单核巨噬细胞吞噬、捕获,或与B细胞特异性结合,而后进入细胞内的抗原,均称为外源性抗原。
所有来自体外的微生物、疫苗、异种蛋白等;
内源性抗原——由机体细胞自身产生的非己抗原。如:
病毒感染细胞所合成的病毒蛋白抗原
肿瘤细胞合成的肿瘤抗原
外源性抗原的加工(MHCⅡ类途径)
APC摄取的外源性抗原在内体(吞噬溶酶体)中降解成肽,与MHCⅡ类分子(在内质网合成)结合后,通过高尔基体表达于细胞表面,供CD4+T细胞识别。
内源性抗原的加工(MHCⅠ类途径)
外源性抗原:内体(吞噬溶酶体)加工处理后与MHCⅡ类分子结合,刺激CD4+T细胞。
内源性抗原:蛋白酶体加工处理后与MHCⅠ类分子结合,刺激CD8+T细胞。