1、ICS67.050CCSX04OB中华人民共和家标准GB31658.11-2021食品安全国家标准动物性食品中阿苯达唑及其代谢物残留量的测定高效液相色谱法Nationalfoodsafetystandard一Determinationofalbendazoleanditsmetabolitesresiduesinanimalderivedfoodbyhighperformanceliquidchromatographymethod2021-09-16发布2022-02-01实施中华人民共和国农业农村部if中华人民共和国国家卫生健康委员会发布国家
2、市场监督管理总局GB31658.11-2021本文件按照GB/T1.1一2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件系首次发布。GB31658.1120211范围食品安全国家标准动物性食品中阿苯达唑及其代谢物残留量的测定高效液相色谱法肉、肝脏提取，牛奶，高效液相5本文件规定了动物性食品中阿苯;本文件适用于猪、牛、羊、鸡砜、阿苯达唑-2-氨基枫残留2规范性引用文件下列文件中的内今仅该日期对应的版文件。GB/T66823术语与定义M本文件没矿_4原理其代谢物残留量检测的齟拃和高效液相色谱测定方法。牛:奶摩屬苯达唑、阿苯达哇砜、阿苯达唑亚p
3、UBt/日期的引用文件，的絛改单)适用于本试料中残套试料采用乙腈和色谱-荧光检测器5试剂与材料除另有规定外，5.1试剂5.1.15.1.25.1.35.1.45.1.55.1.65.1.75.1.85.1.95.1.10甲醇(CH3C)H):乙腈(CH：iCN)：色谱灣二甲基亚砜(C2H6()S)。乙酸乙酯(c4h8o2)。正己烷(c6h14)。无水硫酸納(Na2SO4)。碳酸钠(Na2CO3)。盐酸(HC1)。氢氧化钠(NaOH)。焦亚硫酸钠(Na2S2O5)5.1.11乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2Na2O8.2H2O)。5.1.
4、12氨水(NH3H20)。5.1.13乙酸铵(CH3COONH4)o5.1.14冰醋酸(CHbCOOH)。5.2溶液配制5.2.12%碳酸钠溶液:取碳酸钠2.0g，用水溶解并稀释至100mL。5.2.20.2mol/L盐酸溶液:取盐酸1.8mL，用水稀释至100mL。5.2.30.2mol/L盐酸-乙腈溶液:取0.2mol/L盐酸溶液10mL，加乙腈90mL，混匀。5.2.410mol/L氢氧化钠溶液:取氢氧化钠4.0g，用水溶解并稀释至10mL,冷却至室温。5.2.50.004g/mL焦亚硫酸钠溶液:取焦亚硫酸钠0
5、.4g,用水溶解并稀释至100mL。5.2.60.1mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液:取乙二胺四乙酸二钠3.36g,用水溶解并稀释至100mL。5.2.710%氨化乙腈溶液:取氨水10mL，加乙腈90mL，混匀。5.2.80.5mol/L乙酸铵溶液:取1.93g乙酸铵，用水溶解并稀释至500mL，用冰醋酸调节pH至5.0,混匀。5.2.9复溶液:取乙腈10mL、甲醇10mL，加0.5mol/L乙酸铵溶液80mL，混匀。5.2.10乙腈-二甲基亚砜(9:1):取乙腈90mL、二甲基亚砜10mL，混匀。5.3标准品5.3.1阿苯达
6、唑(Albendazole,C12H15N3O2S,CAS号:54965-21-8):含量99.0%。5.3.2阿苯达唑砜(AlbendazoleSulfone,C12H15N3O4S,CAS号：75184-71-3)：含量98.3%。5.3.3阿苯达唑亚砜(AlbendazoleSulfoxide,C12H15N3O3S,CAS号：54029-12-8):含量98.5%。5.3.4阿苯达峨-2-氨基讽(Albendazole-2-aminosulfone,Ci0Hi3N3O2S,CAS号：80983-34-2):含量90.0%。5
7、.4标准溶液的制备5.4.1标准储备液:取阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑-2-氨基砜标准品各约10mg，精密称定，用乙腈-二甲基亚砜(9:1)溶解并稀释定容至100mL容量瓶，配制成浓度为100Mg/mL的阿苯达唑、阿苯达唑讽、阿苯达唑亚砜和阿苯达哇-2-氨基讽标准储备液。一18C以下保存，有效期1个月。5.4.2混合标准中间液:分别准确移取阿苯达唑标准储备液2mL、阿苯达唑砜标准储备液0.2mL、阿苯达哇亚砜标准储备液2mL和阿苯达唑-2-氨基砜标准储备液1mL，于10mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成阿苯达唑浓度为20yg/mL
8、、阿苯达唑砜浓度为2Mg/mL、阿苯达唑亚讽浓度为20Mg/mL和阿苯达唑-2-氨基砜浓度为10Mg/mL的混合标准中间液。现用现配。5.5材料5.5.1酸性氧化铝固相萃取柱:1g/3mL，填料为酸性氧化铝，或相当者。5.5.2混合型阳离子交换固相萃取柱:150mg/6mL，或相当者。5.5.3尼龙微孔滤膜：0.22。6仪器和设备6.1高效液相色谱仪:配荧光检测器。6.2分析天平:感量0.01g和感量o.00001go6.3组织匀浆器。6.4涡旋混合器。6.5涡旋振荡器。6.6离心机:转速可达10000r/min。6.7固相萃取装置。6.8氮吹仪。2
9、7试料的制备与保存7.1试料的制备7.1.1组织取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。a）取均质的供试样品，作为供试试料；b）取均质的空白样品，作为空白试料；c）取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。7.1.2牛奶取适量新鲜或解冻的空白或供试牛奶样品，混合均匀。a）取均质的供试样品，作为供试试料；b）取均质的空白样品，作为空白试料；c）取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。7.2试料的保存-18C以下保存。8测定步骤8.1提取8.1.1肌肉、肝脏、肾脏取试料2g（准确至士0.02g），置于50mL离心管，加2%的碳
10、酸钠溶液0.5mL、二甲基亚砜1mL、0.004g/mL焦亚硫酸钠溶液1mL,涡旋1min。加乙酸乙酯10mL，涡旋1min,振荡5min,10000r/min离心5min，取上清液。残渣加人乙酸乙酯10mL重复提取1次，合并上清液,40C氮吹至近干。残渣加人正己烷5mL,涡旋1min，再加人0.2mol/L盐酸-乙腈溶液2mL，涡旋1min,静置分层，弃去上层正己烷，取下层溶液备用。8.1.2脂肪取试料2g（准确至0.02g），置于50mL离心管，70C水浴加热使其融化，加2%的碳酸钠溶液0.5mL、0.2mol/L盐酸水-
11、乙腈溶液5mL,涡旋1min,振荡5min,10000r/min离心5min,取上清液。残渣在70C水浴加热使其融化，加0.2mol/L盐酸水-乙腈溶液5mL重复提取，合并上清液。加正己烷5mL,涡旋1min，静置分层，弃去上层正己烷，加人正己烷5mL重复操作，取下层溶液备用。8.1.3牛奶取试料2g（准确至0.02g），置于50mL离心管中，加10mol/L氢氧化钠溶液50ML、0.004g/mL焦亚硫酸钠溶液0.5mL，涡旋1min,加乙腈10mL、乙酸乙酯5mL，涡旋，振荡5min,10000r/min离心5min
12、,移取上清液。加无水硫酸钠5g，振荡5min,10000r/min离心5min,取上清液，403氮吹至近干。残渣加正己烷5mL,涡旋1min，再加人0.2mol/L盐酸水-乙腈溶液2mL,涡旋1min，静置分层，弃去上层正己烷，取下层溶液备用。8.2净化酸性氧化铝固相萃取柱依次用0.2mol/L盐酸水-乙腈溶液3mL、0.1mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液3mL活化，取备用液过柱，收集流出液，用0.2mol/L盐酸-乙腈溶液1mL淋洗，合并流出液，加0.2mol/L盐酸溶液8mL，混匀。再通过依次用甲醇3mL、0.1mol/L乙二胺四
13、乙酸二钠溶液3mL、水3mL.O.2mol/L盐酸溶液3mL活化的混合型阳离子交换固相萃取柱，用0.2mol/L盐酸溶液3mL、甲醇3mL淋洗，抽干1min，l0%氨化乙腈溶液5mL洗脱，抽干，收集洗脱液，40C水浴氮气吹干。用复溶液1.0mL溶解残余物，过尼龙微孔滤膜后，供高效液相色谱测定（上机溶液应在72h内完成测定）。8.3标准曲线的制备准确移取混合标准中间液适量，用复溶液稀释阿苯达唑和阿苯达唑亚砜浓度为0.05fzg/mL、3GB31658.11-20210.1yg/mL、0.2pg/mL、0.5ptg/mL、1/zg/mL、
16、毫升(ptg/mL)；V最终试料定容体积的数值，单位为毫升(mL)；m供试试料质量的数值，单位为克(g)。10检测方法的灵敏度、准确度和精密度10.1灵敏度GB31658.112021本方法阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑-2-氨基砜在猪、牛、羊、鸡的肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织和牛奶中检测限均为0.02mg/kg,定址限均为0.05mg/kg。10.2准确度本方法阿苯达I座、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑-2-氨基砜在猪、牛、羊、鸡的肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织和牛奶0.05mg/kg10mg/kg添加浓度的回收率为60%120%。10.3精密度本方法的批
17、内相对标准偏差15%，批间相对标准偏差20%。GB31658.11-2021附录A（资料性）阿苯达唑及其代谢物标准溶液色谱图阿苯达唑及其代谢物标准溶液色谱图见图A.1。7EU220.00200.00180.00160.00140.00120.00100.0080.0060.0040.0020.00OS-ZMVIoslxzlzavAnHnAos-zavZMV0XX）2.004.006.008.0010.0012.0014.00f.rnin注:ABZ-NH2-SO2为阿苯达唑-2-氨基砜，ABZ-SO为阿苯达唑亚砜，ABZ-SO2为阿苯达唑砜，ABZ为阿苯达唑。图A.1阿苯达唑及其代谢物标准溶液色谱图（100Ug/L）LsCXJluodsL