包虫病(hydatiddisease,Hyd)抗体检测试剂盒用于检测羊血清中的Hyd抗体,用于未免疫动物包虫病感染筛查。若需对免疫动物进行免疫抗体评估则需选用EG95抗体检测试剂盒。
本试剂盒采用间接ELISA法,在酶标板条微孔上预包被纯化的Hyd抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有Hyd特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其它成分后,再加入酶标二抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合,再经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
组份
1
抗原预包被板条
1/2块
7
阴性对照
2ml
2
酶结合物
11/22ml
8
阳性对照
0.8/1.6ml
3
10倍浓缩洗涤液
100ml
9
血清稀释板
4
显色液
10
封板膜
2/4张
5
样本稀释液
11
说明书
1份
6
终止液
15ml
需自备的设备及试剂
1.微量移液器:0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。
2.一次性移液器吸头。
3.量筒:500ml。
4.96孔板酶标仪。
5.蒸馏水或去离子水。
6.洗瓶或洗板机。
样品制备
取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
样品的稀释
在血清稀释板中按1:100的体积比稀释待检血清(例如:500μl样品稀释液中加5μl待检血清)。
注意:阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头,准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。
注意事项
1.试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。
2.不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
3.底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
4.TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5.检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。
6.所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7.严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
8.血清稀释板为一次性用品,不得重复使用;血清稀释板的最大容量为300μl/孔。
操作步骤
1.取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照和阳性对照各2孔,取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。
2.盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育30分钟。
3.小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复6次,最后在干净吸水纸上拍干。
4.每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
5.小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤6次,方法同3。切记最后在干净吸水纸上拍干。
6.每孔加显色液100μl,轻微震荡混匀,盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。