尼卡巴嗪（Nicarbazin）又名球虫净，1955年由美国Merck公司开发，具有高效、广谱抗球虫活性，预防效果很好，且耐药性发展极慢，至今仍然是最有效的抗球虫药之一。尼卡巴嗪是4,4’-二硝基均二苯脲（DNC）与2-羟基-4,6-二甲基嘧啶（HDP）的复合物。HDP在动物体内由尿液排出，代谢迅速。而DNC通过粪便排出，代谢缓慢，因而在肌肉及其他组织中会出现不同程度的残留，人们食用后会产生潜在危害。联合国粮农组织以及新西兰、日本和我国等均以DNC单体作为尼卡巴嗪的残留标志物。为规范尼卡巴嗪在养殖鸡群中的用药，2020年我国生效实施的GB31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中规定了DNC在肉鸡不同组织中的最大残留限量。
检测项目：4,4’-二硝基均二苯脲（DNC）
应用范围：鸡肌肉/鸡蛋
前处理仪器：
分析天平（感量0.00001g和0.01g）；涡旋振荡器；离心机；氮吹仪；离心管（50mL）；滤膜（0.2μm）。
检测仪器：LC-MS/MS+ESI源
试样制备与保存
1.鸡蛋
取适量新鲜或冷藏的空白或供试鸡蛋，去壳，并使均质。零下20℃以下保存。
取均质后的供试样品，作为供试试料；
取均质后的空白样品，作为空白试料；
取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
2.鸡肌肉
取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。零下20℃以下保存。
前处理方法
提取与净化
称取试料2g±0.02g，于50mL离心管中，添加10μg/mL4,4’-二硝基均二苯脲-D8标准工作液适量，加无水硫酸钠2g，乙腈8mL，涡旋0.5min，超声5min，5000r/min离心10min，取上清液，于40℃氮气吹干，加75%甲醇水溶液饱和的正己烷1mL，涡旋10s，再加75%甲醇水溶液1.0mL，充分涡旋混合，于40℃水浴中静置5min，2000r/min离心5min，取下层清液，滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。
国标解读及注意事项
1.DNC标准物质用二甲基甲酰胺配成1mg/mL的标准储备液，在2℃-8℃保存，可使用3个月；DNC-D8标准物质用二甲基甲酰胺配成1mg/mL的标准储备液，在2℃-8℃保存，可使用3个月。
5.同位素内标加入量决定最终定容后的理论上机浓度，务必与配制的标准曲线中各点同位素的浓度相一致，才能正确校正回收率。
6.液质联用仪负离子扫描检测，为保证检测灵敏度，建议正负离子扫描分开仪器进行。
参考文献
GB29690-2013食品安全国家标准动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
图1鸡肌肉和鸡蛋中DNC残留量测定的前处理流程图
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