研究表明，不同菌株由于其细胞壁组成和胞外多糖代谢产物的不同，益生菌的免疫效果也不同[24-25]。
肠道菌群对维持肠道免疫平衡和机体健康具有重要作用。正常肠道菌群的破坏会导致肠道免疫系统失衡。益生菌制剂可以预防和治疗消化道疾病，因为它们可以帮助机体维持正常的肠道菌群，产生抗炎因子，抑制致病菌群的生长。[1-2].
众所周知，乳酸杆菌属细菌在维持肠道微生态平衡和增强肠道免疫功能方面起着重要作用[16]。研究表明，给予鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌可显著提高小鼠外周血单个核细胞的吞噬功能[19-20]。
此外，研究发现，从人体肠道中分离出的植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和副干酪乳杆菌可促进人血单核细胞分泌白细胞介素（IL)-12进而参与细胞介导的免疫功能，并调节机体的免疫功能[21-23]。
近年来的研究表明，益生菌混合制剂具有更好的免疫调节作用[11-13]。本文旨在动物实验模型中探索双智乳杆菌三联菌(B.lactisV9+I.caseiZhang+L.plantarumP-8三联菌，简称BLL)冻干粉的免疫调节作用机制。研究进展和实际应用为临床前期实验提供了依据。
1、材料与方法
1.1、材料
（1）细胞系：YAC-1细胞和鸡红细胞
（2）实验动物：雄性C57BL/6小鼠320只，体重18～22g。
（3）实验益生菌粉：B.lactisV9，I.caseiZhang，IplantarumP-8细菌粉，活菌数均为2,000亿/g。（4）试剂：基础细胞培养基及试剂盒等材料。
1.2、方法
1.2.1、实验动物的分组和给药
称取冻干保存后的乳杆菌V9、干酪乳杆菌和植物乳杆菌P-8的活菌粉，按质量比2∶1∶1溶解于无菌双蒸水中（即50％的乳杆菌V9+25％的干酪乳杆菌）后备用。
1.2.2小鼠体重和免疫器官指数的测定
小鼠常规喂养30天，记录实验期间的一般情况。在实验结束时（即给药30天），提取胸腺、脾脏等脏器以及血液并储存在4℃无菌容器中中保存备用。
1.2.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验
取保存在4℃的脾脏样本用无菌生理盐水冲洗2次，将脾脏切块，取脾细胞，孵育。通过从实验组的OD值中减去对照组的OD值来记录小鼠的淋巴细胞增殖数。
1.2.4二硝基氟苯致小鼠迟发型变态反应（耳肿胀法）
设置左耳为对照组，小鼠两耳重量的差异表明迟发型变态反应（DTH）的程度[17]。
1.2.5血清溶血素的测定
收集的绵羊红细胞悬液按常规比例（2%，v/v）配制后，用腹腔注射法进行免疫反应试验。
1.2.6抗体生成细胞的检测
用同1.2.5的方法免疫小鼠，无菌取脾细胞，用改良玻片法检测抗体生成细胞数（以空斑数/10°脾细胞数表示）。
1.2.7小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用（半体内法）
将20%鸡红细胞悬液按ip法注入小鼠体内。在显微镜下观察细胞，并记录在不同的视野中阳性细胞数，并分析吞噬指数和吞噬率[15]。
2、结果
2.1各组小鼠一般情况及脏器指数比较
低、中、高剂量组小鼠一般情况尚可，未出现腹泻、烦躁等表现，也未发现小鼠出现中毒症状和非特异性死亡。给药前和给药后30天，各组小鼠初始体重与最终体重的差值为8.77~10.65g，4组小鼠初始体重与最终体重差异无显着性意义(P>0.05)。
与对照组相比，小鼠脾脏/体重、胸腺/体重比值均无显著性差异低、中、高剂量组（P＞0.05），见表1。
2.2各组小鼠脾淋巴细胞增殖能力及耳廓肿胀程度的比较
与对照组比较。中、高剂量组小鼠脾淋巴细胞增殖能力（OD差值）明显增强（P＜0.05）：与对照组小鼠耳廓肿胀度比较，中、高剂量组小鼠耳郭肿胀度差异无统计学意义（P>0.05）。各组小鼠脾淋巴细胞增殖能力及耳廓肿胀情况比较见表2。
2.3各组小鼠吞噬指数α及腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬作用的比较
与对照组相比，BLL中、高剂量组小鼠的吞噬α指数明显升高。吞噬后腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数鸡红细胞明显升高（P＜0.05）。低剂量组小鼠吞噬α指数及吞噬率和吞噬指数与对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表3。
2.4各组小鼠HC5o和抗体生成细胞比较
BLL低、中、高剂量组和对照组的HC5o值相比，抗体产生数量的测试结果显示，BLL中、高剂量组的空斑数明显增加，差异无统计学意义（P＜0.05）。BLL低剂量组小鼠斑块数与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表4。
2.5各组小鼠NK细胞活性的比较
低、中、高剂量组和对照组的NK细胞活性与对照组比较。BLL低剂量组与中剂量组NK细胞活性无显着性差异(P>0.05)，而BLL组NK细胞活性无显着性差异(P>0.05)。高剂量组明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。
研究表明，不同菌株由于其细胞壁组成和胞外多糖代谢产物的不同，益生菌的免疫效果也不同[24-25]。乳酸菌V9、蜡梅、植物P8乳双歧杆菌v9、干酪乳杆菌Zhang、植物乳杆菌P-8均具有良好的耐酸碱性，是一种具有市场开发价值的益生菌[26-27]。
乳酸菌的成分，如多糖、脂磷脂或胞外多糖，对巨噬细胞、NK细胞等效应细胞都能产生不同的作用。因此，不同菌株对动物细胞免疫、体液免疫和吞噬细胞的作用机制不同。T淋巴细胞的转化率和增殖率可反映免疫细胞功能的强弱，主要是通过ConA诱导转化为母细胞来实现的[29]。
本研究结果表明，经ConA处理后，BLL中、高剂量组脾淋巴细胞转化率明显高于对照组（P~0.05），且转化率也随剂量的增加而增加。它表明了BLL能有效提高细胞增殖能力，增强免疫功能。
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