上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息
特点：
●检测结果的重现性好
●可作为线粒体活性的指标
●多角度了解细胞代谢变化
产品解说
规格性状
产品概述
α-酮戊二酸(α-KG)是TCA循环中重要的中间体。它被作为进入TCA循环的葡萄糖代谢物增加的指标以及谷氨酰胺代谢(Glutaminolysis,一种谷氨酰胺底物与α-KG反应的通路)增加的指标。α-KG在神经递质谷氨酸和γ-氨基丁酸（GABA）的产生中起着重要作用，不仅如此它还担负着一定的清除细胞内的活性氧的功能，是非常重要的细胞代谢指标之一。
检测原理
检测操作
整个操作过程，从细胞的前处理到荧光酶标仪检测，只需要按照操作说明书的步骤添加试剂即可检测细胞内α-酮戊二酸(α-KG)的浓度。而且，本试剂盒专门针对同类型检测方法中普遍存在的结果重现性差的问题进行了优化，即使是第一次做α-KG检测实验的科研人员也可以放心使用。
结果重现性高的两个秘诀
1)样品的前处理
同类型的检测试剂盒在样品前处理时需要微量的pH调节、过滤膜过滤等操作，这是导致结果重现性差的原因之一。而同仁化学研究所的α-KG检测试剂盒，只需要按照说明书添加试剂，可以大幅减少前处理过程中产生的操作误差。
2)α-Ketoglutarate的检测
其他检测试剂盒使用与上图相同的原理，但是由于①和②的两步反应同时在96孔板里进行，这是造成误差的另一个重要原因。而同仁化学研究所的试剂盒将这两步反应分开进行，进一步降低了误差。
标准曲线的作成例
本试剂盒附带α-KG的标准品，可以通过制作标准曲线来定量的检测样品中的α-KG浓度。如果样品中的α-KG浓度高于20μmol/l，请预先稀释样品再检测。
实验例
Doxorubicin(DOX)刺激引起的细胞内代谢变化
Sulfasalazine(SSZ)引起的细胞内代谢变化
<使用产品>
细胞内ATP：CK18CellCountingKit-Luminescence
细胞内GSH：G263GSSG/GSHQuantificationKitII
细胞内ROS：R252ROSAssayKit-HighlySensitiveDCFH-DA-
胞外谷氨酸：G269GlutamateAssayKit-WST
<实验条件>
NASH诱导小鼠的肝脏组织的代谢变化
NASH(非酒精性脂肪肝)的病变组织中有ATP、α-KG、NAD的量减少的特点。使用4周龄的高脂肪食物投喂(引发NASH)的1型糖尿病模型小鼠(STAM模型)的肝脏组织，检测其中的ATP、α-KG、NAD水平的变化。结果显示，NASH诱导后10周龄的小鼠组中ATP、α-KG、NAD的浓度降低。
※详细的实验步骤请参考FAQ“是否有检测组织的实验例
组织内ATP：CK18CellCountingKit-Luminescence
组织内NAD：N509NAD/NADHAssayKit-WST
<实验参考文献>
常见问题Q&A
具体的实验步骤如下：
碱性提取法提取的肝脏样品中的代谢指标检测
1.取大约100mg小鼠肝脏组织样品加至500μl预冷的0.5mol/KOH水溶液中。
※必须使用经过灌流操作完全脱血的组织样品，否则残留的血液会影响检测结果。
2.用Dounce型组织研磨器研磨肝脏组织。
3.将研磨后的样品回收至微管中，用500μl预冷的0.5mol/KOH水溶液清洗研磨器，并将清洗后的液体也
一起转移到回收样品的微管中(共约1ml)。
4.向回收样品的微管中加入1ml预冷的超纯水，充分混合后在冰浴上静置5min(共约2ml)。
※由于溶液的粘性较高，有时会出现离心后难以分离的情况。此时，用25g左右的细针头注射器不断
吸取/推出(大约20-30次)，直到可以顺畅的吹打溶液为止。
5.离心机12,000xg，4℃离心5min。
α-KG检测用样品的制备
6.取900μl上一步操作(步骤5)得到的溶液，加入200μl1mol/lKH2PO4水溶液进行中和，混匀后在冰浴上
静置5min。
7.离心机12,000xg，4℃离心5min，取1ml上清液至新的微管中作为检测样品。
<检测时的注意事项>
※组织提取的样品无法保存，请在当天内完成检测。
※枪头中残留的样品溶液时造成误差的原因之一，吸取样品溶液时尽量缓慢，减少枪头中残留的样品溶液。
※在稀释标准品和样品的时候，使用0.5mol/lKOH水溶液和1mol/lKH2PO4水溶液按照9:5比率混合的溶液。