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特点：
●享有显色底物WST专利
●用于L-Glutamate的定量
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试剂盒内含
产品概述
谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。
GlutamateAssayKit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。
原理
本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。
操作步骤
只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。
实验例
标准曲线的实验例：
样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。
谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：
铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:
据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。
Sulfasalazine(SSZ)引起的细胞内代谢变化实验例：
将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。
<使用产品>
·细胞内ATP：ATPAssayKit-Luminescence（货号：A550）
·细胞内α-KG：α-KetoglutarateAssayKit-Fluorometric（货号：K261）
<实验条件>
常见问题Q&A
100tests
样品数量(n=3)24个样品(参照下图)
谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)
※Workingsolution配制后，避光室温条件下4h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。
细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的FiltrationTube进行脱蛋白处理。
如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5μmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。