北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心
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近年来，一些研究发现，某些乳酸菌菌株具有抗氧化、抗衰老等重要生物学功能，在保障食品质量、提高食品品质方面具有重要作用，是开发功能性乳酸菌发酵剂的重要资源。功能性乳酸菌发酵剂在食品发酵工业中的应用潜力巨大。开发同时具有抑菌和抗氧化功能的乳酸菌发酵剂对于提高食品安全和质量具有重要价值。
市售酸菜（阿花酸菜、康师傅老坛酸菜包、雅园菜业四阿哥重庆鱼酸菜）。植物乳杆菌PL2为中国农业大学食品与营养工程学院李平兰教授赠送；大肠杆菌As1.184、铜绿假单胞菌P1、普通变形杆菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌As1.72均来自河北经贸大学微生物实验室。细菌基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）生工生物工程（上海）股份有限公司；胶回收试剂盒、2×Taq聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）StarMix北京康润诚业生物科技有限公司；生化鉴定试剂盒北京陆桥技术有限责任公司；pEASY-T3CloningKit、Trans1-T1PhageResistantChemicallyCompetentCell北京全式金生物技术有限公司。
759CKT紫外-可见分光光度计上海菁华科技仪器有限公司；CX41-32L02型光学显微镜日本Olympus公司；Veriti96WellThermalCycler美国ABI公司。
称取样品25g，加入到225mL的无菌生理盐水中，振荡均匀，用无菌生理盐水10倍稀释，选择3个适宜稀释度，分别取200μL稀释液涂布于MRS（含0.5%碳酸钙）培养基平板上，37℃培养24～48h。挑取具有溶钙圈的单菌落，反复多次划线直至获得纯培养。
将纯化的乳酸菌菌株，以1%的接种量（终浓度为107CFU/mL）接种于MRS液体培养基中，37℃培养24h，10000×g离心5min，取上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤器过滤，即为无细胞上清液（cell-freesupernatants，CFS），以植物乳杆菌PL2为指示菌，采用杯碟方法测定该CFS的抑菌活性。
式中：A0为对照组吸光度；Ai为样品组吸光度；Aj为空白组吸光度。羟自由基（·OH）清除率的测定参照文献[16]的方法，稍加改进。取邻菲啰啉（0.75mmol/L）1mL于试管中，依次加入PBS（pH7.4）2mL，蒸馏水1mL，充分混匀后，加入FeSO4溶液（2.5mmol/L）1mL，混匀加H2O2（质量分数为0.12%）lmL，在37℃水浴1.5h后在536nm波长处测定其吸光度Ap；用1mL蒸馏水代替1mLH2O2测定其吸光度Ab；用1mL样品代替1mL的蒸馏水测定其吸光度As。·OH清除率计算见式（2）：
超氧阴离子自由基（O2－·）清除率的测定参考文献[17-18]的方法，略有改进。取3mL50mmol/LTrisHCl（pH8.2）于试管中，依次加入1mL3mmol/L二乙三胺五乙酸、1mL1.2mmol/L邻苯三酚，充分混匀，加入0.5mL所测样品，混匀。于25℃反应10min后，在325nm波长处测吸光度。O2－·清除率计算见式（3）：
式中：A00为不含样品和邻苯三酚吸光度；A01为不含样品、含邻苯三酚吸光度；A10为含样品、不含邻苯三酚吸光度；A11为含样品和邻苯三酚吸光度。以上抗氧化活性测定，每个样品设3个重复，取平均值。
挑取少量的目标菌株于MRS固体培养基平板上划线，37℃培养24h观察菌落形态，并进行革兰氏染色，观察个体形态。
采用生化鉴定试剂盒进行糖醇发酵实验，参照《常见细菌系统鉴定手册》对菌株进行初步鉴定。
采用TIANampBacteriaDNAkit（天根生化科技（北京）有限公司）提取基因组DNA。以菌株的基因组DNA为模板，采用通用引物序列LPW57：5’-AGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；LPW205：5’-CTTGTTACGACTTCACCC-3’进行PCR扩增。PCR体系及反应条件参见文献。将PCR产物进行电泳检测，回收纯化目的片段，连接pEASY-T3载体，转化大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞。将经菌落PCR鉴定正确的重组子送交生工生物工程（上海）股份有限公司测序。将PCR产物序列测定结果用BLAST软件与GenBank中已知的16SrDNA序列进行同源性比较。从GenBank中选择近缘菌株的16SrDNA基因序列，用MEGA6.06软件构建系统发育树。
以菌株总基因组DNA为模板，参照Torriani等方法进行多重PCR扩增recA基因，以植物乳杆菌PL2和类植物乳杆菌L-ZS9基因组DNA为模板作对照。将PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测。
回首2020，是不平凡的一年，也是迎接挑战的一年。这一年，我们与新冠肺炎做抗衡斗争，直面全球经济的严峻形势，排除万难，改革创新，依然取得了骄人的成绩
第十九届北京分析测试学术报告会暨展览会（以下简称BCEIA）将于2021年9月27-29日在北京中国国际展览中心（天竺新馆）召开。BCEIA由中国分析测试协会主办，每两年举办一次，已连续成功举办了十八届，是中国分析测试领域专业化程度最高、影响力最大的盛会，同时在国际上也享有较高的知名度，被誉为全球四大分析仪器展会之一。
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