通用PCR检测试剂盒

2、标准品(冻干品):2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200U/L,100U/L,50U/L,25U/L,12.5U/L,6.25U/L,3.12U/L,样品稀释液直接作为空白孔0U/L。如配制100U/L标准品:取0.3ml(不要少于0.3ml)200U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3、样品稀释液:1×20ml。

4、检测稀释液A:1×10ml。

5、检测稀释液B:1×10ml。

产品名称

英文名称

编号

通用PCR检测试剂盒

LentivirusRTPCR

GOY-M0607

规格:50T分类:PCR检测试剂盒

储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。

运输:低温、避光。

有效期:一年

货期:现货PCR试剂盒的有效期一般为1年,这是指在适当的储存温度下。核酸扩增部分的试剂一般要贮存于-20℃下,产物检测部分试剂则贮存于2-8℃。尽量避免反复冻融。

【结果分析条件设定】

u基线(Baseline)设定:应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域(所有样本荧光信号无较大波动),起始点(Start)应避开荧光采集起始阶段的信号波动,终止点(End)应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环,建议基线设为6~15。

u阈值(Threshold)设定:将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。

【质控标准】

1.阴性质控品的检测结果应为阴性,无指数扩增期,Ct=40或无Ct;

2.阳性质控品的检测结果应为阳性,有明显的指数扩增期,Ct值应小于等于35;

3.以上要求需在一次实验中同时满足,否则该次实验视为无效。

【结果判断】

1.阳性:有明显的指数扩增期,且Ct<38;

2.可疑:有明显的指数扩增期,且38≤Ct<40,此时样本为可疑样本;对于可疑样本建议复核一次,若复核结果Ct<40且有指数扩增期,则判定为阳性,否则判定为阴性;

3.阴性:无指数扩增期,Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。

【对检验结果的解释】

1.实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果;

2.试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,可能会导致出现假阴性结果。

通用PCR检测试剂盒PCR反应的特异性决定因素为:

①引物与模板DNA特异正确的结合;

②碱基配对原则;

③TaqDNA聚合酶合成反应的忠实性;

④靶基因的特异性与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。

(2)灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。

(3)简便、快速

PCR反应用耐高温的TaqDNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。

(4)对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

通用PCR检测试剂盒通用PCR检测试剂盒水通道蛋白3检测试剂盒20mg

HEC1A(人子宫内膜细胞)大鼠冠状动脉内皮细胞完全培养

溶葡球酶,溶葡萄球酶质量BR,5000U/PackLysostaphin

酿酒酵母Saccharomycescerevisiae铜绿假单胞Pseudomonasaeruginosa

百里香,麝香草质量ARThymol

大鼠膀胱成纤维细胞完全培养LS174T(人结肠细胞)

亚兰,亚蓝质量BSMethyleneBlue

宇佐曲Aspergillususamii中慢生华癸根瘤Mesorhizobiumhuakuii

SulfoNHS;N羟硫代琥珀酰亚质量>99%,BRsulfoNHS

球亚种Lactococcuslactissubsp.lactis嗜热链球Streptococcusthermophilus

THE END
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